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Aula 3 - Seleção, coleta e transporte das amostras para análise bacteriológica (1)

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Seleção, coleta e transporte das amostras para análise bacteriológica
Polyanna Negreiros
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Diagnóstico
Isolamento de micro-organismos viáveis
Coletado e entregue rapidamente ao laboratório e semeado em meios de cultura
Livre de contaminantes
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Diagnóstico
Todo resultado liberado pelo laboratório de microbiologia é consequência da qualidade da amostra recebida;
A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etiológico;
Portanto, procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um “falso” agente etiológico, resultando numa orientação terapêutica inadequada. 
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Na amostra devem estar identificados:
Nome e registro do paciente
�Leito ou ambulatório e especialidade
�Material colhido
�Data, hora e quem realizou a coleta 
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Sangue
Hemocultura
Colher antes da administração de antibióticos; 
Cuidadosa desinfecção da pele do paciente;
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Hemocultura
Técnicas de Coleta
Remover os selos da tampa dos frascos de hemocultura e fazer assepsia prévia nas tampas com álcool 70%;
Garrotear o braço do paciente e selecionar uma veia adequada. 
Fazer a anti-sepsia com álcool 70% de forma circular e de dentro para fora.
Aplicar solução de iodo 
Para ação adequada do iodo, deixar secar por um a dois minutos antes de efetuar a coleta. 
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Hemocultura
Técnicas de Coleta
Coletar a quantidade de sangue e o número de amostras recomendados;
�Remover o iodo do braço do paciente com álcool 70% para evitar reação alérgica.
�Identificar cada frasco com todas as informações padronizadas e enviar ao laboratório juntamente com a solicitação médica devidamente preenchida. 
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Hemocultura
Volume recomendado
O volume ideal corresponde a 10% do volume total do frasco de coleta;
 Exemplo: frascos com 40 ml coletar de 4 ml a 5 ml de sangue;
NÚMERO DE FRASCOS
�Deverá ser considerado de acordo com a condição clínica do paciente.
�Um total de três culturas em 24 horas costuma ser suficiente para descartar bacteremia ou endocardite
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Hemocultura
Transporte
A amostra não deve ser refrigerada
Após a coleta, os frascos devem ser mantidos em temperatura ambiente e encaminhados imediatamente ao laboratório
O tempo crítico para o transporte de frascos contendo amostras para hemoculturas é de 30 minutos
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Hemocultura
A amostra pode ser rejeitada:
Identificação inadequada ou falta de identificação no frasco da amostra
Realização de coleta em frasco inadequado, por apresentar volume insuficiente, armazenagem e/ou transporte inadequado
Entretanto, quando houver exceção e for realizada hemocultura com volume de sangue menor do que o ideal, tal informação deve estar contida no resultado, a fim de elucidar a diminuição da sensibilidade do exame.
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Hemocultura
Processamento
Os frascos encaminhados ao laboratório devem ser incubados em estufa na temperatura de 35 a 37ºC
Recomenda-se período de incubação de 7 dias para metodologias manuais e de 5 dias para métodos automatizados
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Urocultura
Coleta de Urina – Segundo Jato
O ideal é que o paciente realize a coleta no próprio laboratório, visando a eliminar o viés gerado pelo aumento da contagem de colônias durante o transporte
Transporte em temperatura inadequada pode alterar significativamente a contagem bacteriana, levando a culturas falso-positivas
Higienização correta para homens e mulheres
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Urocultura
Coleta de Urina – Pacientes com Cateter Urinário
Fechar a sonda 30 minutos antes da coleta
Utilizando gaze embebida em álcool 70%, realizar a desinfecção da porção superior da cânula, aspirar a urina utilizando seringa e agulha estéreis
NÃO coletar urina da bolsa coletora do cateter
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Urocultura
Transporte e Armazenamento
Após a coleta, anotar na etiqueta o horário da coleta
A urina deve ser enviada imediatamente ao laboratório, se mantida a temperatura ambiente deve ser processada na microbiologia dentro de no máximo 1h após a coleta
Quando não for possível processar a urina dentro de uma hora, a amostra deve ser refrigerada (2 a 8°C) até o momento da semeadura, por no máximo 24 horas.
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Urocultura
Critérios de Rejeição
Urina coletada em recipientes não estéreis
Urina sem refrigeração com período superior a 2 horas após a coleta
Urina com volume inferior ao mínimo aceitável
Urina coletada da bolsa de pacientes com sondagem vesical
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Coprocultura
Coletar a amostra durante a fase aguda da diarreia
O frasco deve ser identificado corretamente e anotar o horário da coleta;
Não utilizar papel higiênico para coletar as fezes, pois ele pode ser impregnado com sais de bário, que são inibidores de patógenos fecais
Em caso de crianças, admite-se a coleta sobre fralda descartável nova
Evite a contaminação da amostra fecal com urina
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Coprocultura
Coleta
Coletar as fezes em um recipiente limpo e seco, fornecido pelo laboratório - Meio de transporte Carry Blair
Identificar, de forma legível, com nome do paciente, dia e a hora da coleta
Encaminhar o tubo com o swab e o frasco imediatamente ao laboratório ou refrigerar por no máximo 24hs
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Fluidos Corporais 
Líquidos sinovial
Pleural
Peritoneal
Pericardico
Aminiótico
A coleta é realizada pelo médico responsável pelo paciente
Fazer antissepsia do sítio da punção e realizar assepticamente aspiração percutânea ou cirúrgica da amostra
Os fluidos corporais estéreis podem ser transferidos para tubos estéreis.
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Fluidos Corporais 
Critérios de rejeição
Amostras coaguladas
Amostras em recipiente com vazamento
Transporte e Armazenamento
Após a coleta, anotar na etiqueta o horário da coleta
Enviar ao laboratório imediatamente
Não refrigerar a amostra
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Líquor
A coleta da amostra é um procedimento médico
Recomenda-se a coleta sequencial do líquor em no mínimo 3 frascos estéreis devidamente identificados e numerados de 1 a 3
1 (bioquímica)
2 (bacteriologia)
3 (hematologia) 
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20
Cultura Ocular
A maioria das amostras oculares deve ser coletada pelo oftalmologista, estas amostras devem ser inoculadas diretamente nos meios de cultura fornecidos pelo laboratório, no próprio consultório médico ou na clínica. 
Conjuntiva:
A coleta deve serrealizada com swab estéril de alginato de cálcio, rolando o swab sobre a conjuntiva. Coletar amostras de ambos os olhos com swabs separados. 
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Feridas/Abscessos e Tecidos Moles
Coletar amostras somente de feridas que tenham sinas clínicos de infecção ou que não cicatrizam por longo período
A presença de células epiteliais indica contaminação da amostra com microbiota da pele e mucosa e pode comprometer o significado da cultura
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Feridas/Abscessos e Tecidos Moles
Coletar preferencialmente biopsias e aspirados:
Na impossibilidade de coletar aspirado ou biópsia, utilizar swab
A amostra deve ser processada em no máximo 2 horas.
Culturas de lesões secas e crostas NÃO devem ser coletas
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Trato Respiratório
Escarro Expectorado
Para esta amostra o paciente irá participar ativamente da coleta
Na suspeita de infecção por micobactérias coletar 3 amostras em dias consecutivos ou alternados, somente uma amostra por dia.
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Trato Respiratório
Escarro Expectorado – Orientações ao Paciente
O primeiro escarro da manhã, antes da ingestão de alimentos é considerado a melhor amostra
O paciente deve escovar os dentes sem creme dental e enxaguar a boca várias vezes com a água, inclusive com gargarejos
Respirar fundo várias vezes, e tossir profundamente, a amostra deve vir do `peito` e não da `garganta`
Recolher o escarro expectorado dentro de um frasco de boca larga com tampa rosca fornecido pelo laboratório
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Trato Respiratório
Transporte e Armazenamento
Após a coleta, anotar na etiqueta data e hora da coleta.
Devem ser processadas o mais rápido possível após a coleta (menos que 2 horas)
Amostras devem ser mantidas refrigeradas (2 a 8°C) até serem processadas no laboratório
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Meios de Cultura
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Cary Blair
A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Salina tamponada
Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável
Meio de transporte de fezes
Inocular 2 g da amostra de fezes e homogeneizar;
�Incubar a 35 ±1°C por 12 a 18 horas.
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Meio Stuart
Transporte de diversos materiais e consequente conservação dos micro-organismos.
�Conservação de micro-organismos patogênicos como: Pneumococcus, Haemophilus spp., Salmonella spp., Shigella spp. entre outros. 
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Ágar Nutriente
O Nutriente Ágar é um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia. 
Análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas à exames bacteriológicos 
Uso mais frequente para a conservação e manutenção de culturas em temperatura ambiente
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Ágar Nutriente - Inoculação
Estriar a superfície inclinada do meio;
Incubar. 
Ágar Nutriente - Interpretação
Cor original do meio: branco opalescente
�Positivo: Crescimento na superfície do ágar;
�Negativo: Ausência de crescimento. 
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Chocolate
Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos.
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Meios de Cultura – Transporte e Conservação
Ágar Chocolate - Inoculação
Estriar a superfície do meio, usando a técnica de semeadura para isolamento;
�Incubar a 35ºC por 24 horas. 
Ágar Chocolate- Interpretação
Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp
Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Salmonella – Shigella (SS)
Ágar SS possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos. 
�
Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e água. 
Inocular as placas e incubar por 18 a 24 horas;
�Se negativo após 24 horas, reincubar por mais 24 horas. 
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Salmonella – Shigella (SS)
�Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.
�Colônias com centro negro (H²S): suspeita de Salmonella.
�Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Mac Conkey
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos
�
A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS
Isolar bacilos Gram negativos
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Mac Conkey
Cor original do meio: rosa avermelhado.
�Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
Colônias incolores: não fermentadoras de lactose.
Não há crescimento de cocos Gram positivos. 
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Sangue
Oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos microrganismos
A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. E Staphylococcus spp. 
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Sangue
A degradação completa dos glóbulos vermelhos (hemólise β) é reconhecida pelas zonas claras desenvolvidas em torno das colônias bacterianas;
A destruição parcial dos glóbulos vermelhos (hemólise α) pode ser reconhecida pelo desenvolvimento de uma cor marrom esverdeada no meio de ágar;
A hemólise γ é reconhecida quando o crescimento bacteriano não muda o meio e não destrói os glóbulos vermelhos
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Meios de Cultura – Crescimento e Isolamento
Ágar Sangue
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Seleção, coleta e transporte das amostras para análise bacteriológica
Polyanna Negreiros
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