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FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS • Bacilos Gram- Negativos; • Anaeróbios facultativos; • Não formadores de esporos; • Motilidade variada; • Catalase: Positivo; • Oxidase: Negativo; • Fermentadores de Glicose; • Redução de nitrato; Principais Gêneros e Habitat Escherichia Yersinia Salmonella Proteus Klebsiella Citrobacter Enterobacter Serratia Shigella Providencia • 44 gêneros e centenas de espécies; • Habitat: Solo, água, vegetais e TGI; • Patologias: Gastroenterites, ITU (70%), septicemia (50%), infecções de feridas, pneumonia, meningite, bacteremias (30-35%), choque endotóxico; Fatores de Virulência Escherichia coli • Mais comumente isolada; • Patologias: Sepse, ITU, pneumonia e meningite; Escherichia coli Gastroenterites E. coli enteropatogênica (EPEC) E. coli êntero-hemorrágica (EHEC) E. coli enterotoxigênica (ETEC) E. coli enteroinvasiva (EIEC) E. coli enteroagregativa (EAEC) E. coli difusamente aderente (DAEC) ITU E. coli uropatogênica (UPEC) Sepse e Meningite E. coli associada a meningite (MNEC) E. coli enteropatogênica (EPEC) • Habitualmente em lactentes; • Virulência: Fímbrias (adesão) e proteínas Tir e EspF (Adesão e apoptose); • Vômitos e diarreia aquosa com muco, sem sangue; Mal-estar e febre; E. coli êntero-hemorrágica (EHEC) • Alimentos contaminados; • Elaboração de toxinas Shiga (Stx); • Diarreia sanguinolenta sem leucócitos, sem febre; • Complicação: síndrome hemolítica urêmica (SHU); FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS E. coli enterotoxigênica (ETEC) • “Diarreia do viajante”; • Início abrupto (14-50h); • Secreção de enterotoxinas termolábeis (LTI e LTII) e/ou termoestáveis (ST); • Diarreia aquosa profusa, sem sangue, muco ou pus e cólica; E. coli enteroagregativa (EAEC) • Crianças e pacientes HIV+; • Aderência em um padrão semelhante a “pilha de tijolos”; • Toxina tipo ST (EAST1); Uma toxina LT e fatores de colonização de fímbrias (AAF); • Diarreia secretora, aquosa e mucoide; Febre baixa e pouco vômito; E. coli enteroinvasiva (EIEC) • Diarreia aquosa; • Patogenia praticamente idêntica às Shigella; • Sangue, muco e numerosos leucócitos nas fezes; E. coli difusamente aderente (DAED) • Mecanismo patogênicos desconhecidos; • Fímbrias 1845 (padrão difuso); • Diarreia aquosa sem sangue nem leucócitos; Salmonella • Espécies: S. enterica e S. bongori; • Salmonelose: Ingestão de alimentos, água ou leite contaminados por fezes humanas ou de animais; Epidemias a aves domésticas de seus produtos contaminados; Gastroenterites, bacteremias ou septicemias; • Patogenia: Shigella • Mais contagiosa das diarreias bacterianas; • Transmissão via fecal-oral; • S. sonnei: 77% dos sorotipos notificados; • S. dysenteriae: Mais virulenta; • Infecção pode ser assintomática; • Evacuação frequente de fezes com sangue e muco; • Patologias: Tenesmo, dor abdominal, mialgia generalizada, ITU e vaginites; Klebsiella pneumoniae • Pneumonia primária; • Necrose extensa, produção de escarro mucoide, cor vermelho tijolo; • Tendência a abrigar plasmídeos de resistência a antibióticos; • ESBL: Beta lactamase de espectro estendido; • Resistência à ampicilina, carbenicilina e ticarcilina; FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS Gli: + Lac/Sac: + Gás: + H2S: - Gli: + Lac/Sac: - Gás: - H2S: - Gli: + Lac/Sac: - Gás: - H2S: + Gli: - Lac/Sac: - Gás: - H2S: - • KPC: Klebsiella pneumoniae carbapenemase; • Resistência aos carbapenêmicos (Imipenem, meropenem, ertapenem, doripenem); • Mortalidade e infecções nosocomiais; Proteus • Solo, água e materiais contaminados com fezes; • Motilidade com deslocamento, não inibitória, e forma de onda (Véu ou swarm); • Proteus mirabilis: Mais frequente, relacionado com ITU; • Proteus vulgaris: Infecção em pacientes imunossuprimidos; Diagnóstico Laboratorial Meios de Cultura Isolamento primário • Ágar Sangue de Carneiro: Colônia relativamente grandes; Composição – Ágar Base Sangue, Ágar BHI, Tripticase Soja, Ágar Muller- Hinton, 5% Sangue; • Ágar MacConkey: Seletivo para bacilos gram- negativos entéricos relacionados; • Detecção de fermentação da lactose: Viragem do indicador vermelho neutro; • Lactose positiva (Vermelho): Klebsiella, Enterobacter, Escherichia; • Lactose negativa (Amarelo): Proteus, Salmonella, Shigella; • Ágar Salmonella-Shigella (SS): Seletivo para espécies de Salmonella e Shigella; Concentração elevada de sais biliares e citrato de sódio; Atividade da citocromo-oxidase • Detecta a presença da enzima através do reagente tetrametil-p-fenilenodiamina; Fermentação da Glicose Shigella Colônias incolores Salmonella Col, incolor centro negro FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS • Ágar TSI: Tríplice açúcar ferro; • Fermentação da glicose, sacarose/lactose; • Produção de gás; • Produção de H2S; Provas Bioquímicas Principais provas Fermentação da glicose Produção de gás Fermentação da lactose Utilização do citrato Motilidade Produção de indol Oxidase Produção de urease Descarboxilação da lisina Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S) Produção de gelatinase e/ou DNAse Provas complementares Teste da ornitina descarboxilase/arginina dehidrolase Reação de vermelho de metila (VM) e Voges-Proskauer (VP) Fermentação de outros carboidratos: Glicerol, sacarose, maltose, arabinose, salicina, dulcitol, manitol, etc; ONPG: Teste da Beta galactosidase Utilização do malonato de sódio Hidrólise da esculina Teste de Vermelho de Metila (VM) • Fermentação pela via ácido mista; • Indicador: Vermelho de metila; • Ácido fórmico e ácido lático; Reação de Voges-Proskauer (VP) • Fermentação pela via do butilenoglicol; • Menor produção de ácidos mistos; • Ácido pirúvico – Acetoína – Butilenoglicol; Utilização do Citrato • Detectar o citrato com única fonte de carbono; • Diferenciação de bacilos gram-negativos; • Composição: Fosfato de dipotássio, cloreto de sódio, citrato de sódio e sulfato de magnésio; • Positivo: Azul; • Negativo: Verde; Motilidade • Meios líquidos: 1 gota de inóculo na lâmina e exame ao microscópio; • Meios semissólidos: 0,4% de ágar; • Crescimento difuso; Indol • Detecta a presença da enzima triptofanase; • Reagente de Kovacs: Indicador da reação; • Formação de anel vermelho: p-Dimetilaminobenzaldeído; Hidrólise da Ureia • Detecta a presença da enzima urease; • Alcalinização do meio: Cor rosa; • Positivo (Rosa): P. mirabilis; • Negativo (Amarelo): E. coli; FAMÍLIA ENTEROBACTERIACEAE ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS Descarboxilação da Lisina • Detecta a presença da enzima lisina descarboxilase; • Indicador: Púrpura de bromocresol; • Positivo: Roxo; • Negativo: Amarelo; Teste da Fenilalanina Desaminase • Detecta a formação de ácido fenilpirúvico em meio contendo fenilalanina; • Reativo de cloreto férrico; • Positivo (Verde): Proteus, Morganella e Providencia; Produção de Sulfeto de Hidrogênio • Liberação de enxofre, na forma de H2S a partir de aminoácidos e outros compostos de enxofre; • Positivo: Escurecimento do meio;
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