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23 Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.23-26, 2007. Determinação da concentração inibitória média (CI 50) do extrato aquoso de Simarouba versicolor, St. Hill sobre a ovipostura do carrapato bovino ( Boophilus microplus , Canestrine, 1887) PIRES, J. E. P. 1 ; FERNANDES, R.M. 2 ; FERNANDES, M.Z.L.C.M. 3 ; VIANA, G.E.N. 2 ; DOURADO, J.C.L. 4 ; SOUSA, S.A.A. 5 1 Mestrando do Curso de Ciência Animal/Universidade Federal do Piauí-UFPI. 2 Prof. Dr./Depto. de Morfofisiologia Veterinária/ Centro de Ciências Agrárias-CCA/UFPI Campus Agrários da Socopo, CCA, S/N CEP: 64.049-550 zmoreno@ufpi.br 3 Doutoranda do Curso de Ciências Veterinárias/Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro- UFRRJ, Antiga Rodovia Rio-São Paulo, Km 47 Seropédica- RJ- Brasil. 4 Mestrando em Ciência Animal/UFPI 5 Graduando/Química/UFPI RESUMO: Boophilus microplus é reconhecido como um dos parasitos de grande importância econômica para a bovinocultura na América Latina. O uso de plantas medicinais tem se tornado uma alternativa na medicina tradicional no controle deste ectoparasita. Dentre as plantas empregadas está a Simarouba versicolor conhecida popularmente como pau-paraíba. Assim, objetivou-se determinar a Concentração Inibitória Média (CI50) do extrato desta planta sobre a ovipostura das teléoginas de B. microplus. O extrato aquoso (EA) da casca foi preparado em água destilada na concentração de 20% (m/v) e depois diluído em diferentes concentrações. Para calcular a concentração em mg/ml, determinou-se o peso seco do extrato. Utilizou-se 240 teleóginas, divididas em grupos de trinta, estas foram lavadas, separadas por peso e imersas em 20 mL das soluções. As concentrações utilizadas para o EA foram 0,54; 1,07; 2,15; 4,3; 8,6 e 17,2 mg mL-1. Foram usados, um controle negativo (H2O destilada) e um controle positivo (Amitraz na concentração de 0,25 mg mL-1). Os resultados revelaram que teleóginas tratadas com o extrato aquoso na concentração de 0,54 e 1,07 mg mL-1 tiveram comportamento semelhante ao controle e ao padrão. A CI50 calculada foi 4,14 mg mL -1 e a concentração de 17,2 mg mL-1 foi capaz de inibir 100% da ovipostura. Desta forma a S. versicolor é uma alternativa para o controle do carrapato bovino, onde a resistência a outros inseticidas tenha se desenvolvido. Palavras-chave : Simarouba versicolor, CI50, carrapato bovino ABSTRACT: Determination of average inhibitory concentration (CI 50) aqueous extract of Simarouba versicolor St. Hill about the oviposition of the cattle tick ( Boophilus microplus , Canestrine, 1887). The Boophilus microplus is recognized as one of the parasites of economic importance for the cattle raising in Latin America. Therefore, the use of medicinal plants has become an alternative in the popular medicine to combat this ectoparasite. Amongst the employed plants, there is the Simarouba versicolor commonly known as pau-paraíba. Thus, this work aimed at the determination of the Average Inhibitory Concentration (IC50) of this plant in the oviposition of the cattle tick B. microplus. The aqueous extract (AE) of the rind was prepared in distilled water on concentration of 20% 1 (m/v) and after, it was diluted in different concentrations. The dry weight of the extract was determined for calculating the concentration in mg mL-1. It was used 240 females, divided in groups of thirty; they were washed, separated for weight, and immersed in 20 mL of the solutions. The concentrations used for the EA were the followings: 0.54, 1.07, 4.3, 2.15, 8.6, and 17.2 mg mL-1. There were employed a negative control (distilled H2O) and a positive control in this work (Amitraz in the 0.25 concentration of mg mL-1). The results had disclosed that the treated females with the watery extract in concentration to the 0.54 and 1.07 mg mL-1 had a similar behavior to the control and the standard. The IC50 was equal 4.14 mg mL -1 and the 17.2 concentration mg mL-1 was capable of inhibiting 100% of the oviposition. For this reason, S. versicolor appears as alternative for controlling the cattle ectoparasite, which has developed resistance against other insecticides. Key words : Simarouba versicolor; inhibitory concentration (IC50); cattle tick Recebido para publicação em 13/03/2006 Aceito para publicação em 30/08/2006 24 Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.23-26, 2007. INTRODUÇÃO O carrapato bovino (Boophilus microplus) é a espécie de maior distribuição geográfica e importância econômica para países produtores de bovinos em áreas tropicais e subtropicais do planeta (Campos Júnior & Oliveira, 2005). Este é reconhecido como um dos parasitos mais importante economicamicamente para a bovinocultura brasileira, assim como para a grande parte da América Latina, pois o Brasil apresenta um dos maiores rebanhos do mundo, além de possuir condições climáticas favoráveis à reprodução do B. microplus durante praticamente todas as estações do ano (Silva et al., 2000). O combate a este ectoparasito tem colocado criadores e médicos veterinários em situações difíceis, seja em relação ao desenvolvimento de resistência aos produtos manufaturados, seja pelos crescentes custos financeiros, danos ambientais, riscos à saúde do trabalhador envolvido, conseqüências do uso indiscriminado destes carrapaticidas (Arantes et al., 1996). De acordo com tais circunstâncias e dependendo da sua eficácia, as plantas consideradas com atividade ectoparasiticidas oferecem uma alternativa que pode superar alguns desses problemas. Assim, muitos princípios ativos com diferentes modos de ação, têm sido isolados de plantas e esses seriam de valor onde a resistência se tenha desenvolvido aos carrapaticidas de síntese. Uma das plantas que tem sido usada na medicina tradicional é a Simarouba versicolor, que pertence à família Simaroubaceae, sendo uma espécie brasileira que tem propriedades semelhantes à Cascara Amarga (Simarouba amara). Os frutos e a casca são usados como anti-helmíntico e a infusão da casca é usada para mordida de cobra. A casca tem sabor amargo e os insetos não a atacam. Acredita- se que o pó da casca tem atividade vermicida (Grieve, 2002). Grenand et al. (1987) afirmam que a quassina é o principal constituinte químico de S. versicolor, determinada em 1960. Como resultado um grande número de outros constituintes foram isolados de diversas espécies de simaroubaceas e sua estrutura elucidada. Mesquita (1997), através de análise cromatográfica dos extratos clorofórmico e acetato de etila, retirados do lenho de S. versicolor, fez o isolamento de dois quassinóides, excelsina e 11- acetato-amarolídio, sendo que a excelsina foi isolada pela primeira vez neste gênero. Arriaga et al. (2002) a partir das raízes, galhos e frutos desta planta isolaram, através dos extratos hexânico, clorofórmico, acetato de etila e metanólico, os quassinóides (3,5- 7), triterpenóides (8-14) e uma mistura de esteróides (15-17), além do flavonóide canferol e derivados esqualênicos (19). A Dose Letal Mediana (DL50) do extrato aquoso de S. versicolor foi determinada em camundongos por Fernandes et al. (2004) que observaram as seguintes doses 68,80 e 185,88 mg Kg-1 pelas vias oral e intraperitoneal, respectivamente. Sabe-se que na região Nordeste há citações populares sobre o uso desta planta como carrapaticida, porém não há nenhuma pesquisa sobre seu efeito nos carrapatos. Segundo citações populares o extrato da casca quando aplicado sobre os bovinos infestados com carrapatos provoca a queda dos parasitos do corpo do animal, porém não há informações científicas se esta se deve a atividade repelente ou carrapaticida. Considerando o vasto uso desta planta na medicina, a qual já teve algumas de suas ações cientificamente testadas, porém sem nenhum estudo a respeito de sua atividade sobre os carrapatos, o presente trabalho teve como objetivo determinar a concentração do extrato aquoso da S. versicolor capaz de inibir 50% a oviposição das teleóginas. MATERIAL E MÉTODO Os ensaios farmacológicos foram conduzidos no Laboratório de Fisiologiae Farmacologia Veterinária do Departamento de Morfofisiologia Veterinária do Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Piauí. A planta Simarouba versicolor, St. Hill pertencente à família Simaroubaceae e conhecida popularmente como pau-paraíba, caixeta, marubá, gavilan e negrilho, foi coletada no município de Angical–PI, no período de janeiro/2003 e identificada no “Herbário Graziela Barroso”/UFPI exsicata no 14.301/TEPB. A casca da planta após ser cortada em pedaços menores foi submetida à secagem em uma estufa de circulação de ar forçada durante três dias a uma temperatura máxima de 55ºC. Após completa secagem, o material foi triturado em moinho e acondicionado em um frasco de vidro hermeticamente fechado. O extrato aquoso da S. versicolor foi preparado a partir de 40g da matéria vegetal para 200 mL de água destilada, após cocção de dois minutos. Determinou-se o peso seco deste extrato, retirando- se três alíquotas de 1mL da solução e colocando-as em frascos lavados, secos, desengordurados e previamente pesados e identificados. Estes foram colocados em um dessecador até a obtenção de um peso constante para cada frasco. A massa média obtida referente à 1 mL foi relacionada ao respectivo volume total, obtendo-se da concentração em mg mL-1. As fêmeas carrapatos ingurgitadas (teleóginas) foram coletadas em fazendas localizadas na zona rural de Teresina capital do Estado do Piauí, 25 Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.23-26, 2007. região nordeste do Brasil abaixo da linha do equador com latitude e longitude 05° 05’ 21’’ e 42° 48’ 07’’ W, respectivamente. Esta apresenta temperatura de 28,8°C e precipitação pluviométrica de 1,360 mm na média anual (Sudene, 1990). As teleóginas foram colhidas de animais que há 90 dias, no mínimo, não tinham sido tratados com carrapaticida químico. A seguir foram transportadas imediatamente ao laboratório, onde foram limpas com pincel de cerdas macias e pesadas em balança de precisão (escala 0,0001 g), visando uma uniformização do peso. Posteriormente, foram formados grupos de 10 teleóginas, as quais foram colocadas em copos de PVC, contendo 20 mL do extrato aquoso por 10 minutos (Tabela 1). Esse procedimento foi realizado em triplicata para os grupos testes (extrato aquoso), controle negativo (água destilada) e controle positivo (Amitraz 0,25 mg mL1). TABELA 1 . Grupos de teleóginas de B. microplus em diferentes concentrações no extrato aquoso de S. versicolor, do padrão e do controle. Transcorrido este tempo, as teleóginas foram colocadas em papel toalha para a retirada do excesso da solução. Em seguida fixadas com fita adesiva dupla face numa placa de Petri previamente identificadas. Observou-se durante um período de três dias a fase de pré-postura, 17 dias a fase de postura, 22 dias o período de eclosão dos ovos e 7 dias a viabilidade das larvas, conforme as diversas fases do ciclo reprodutivo dos carrapatos. A CI50 foi calculada através de probitos, levando-se em consideração as concentrações dos extratos em relação ao percentual de oviposição. Para os cálculos adotou-se o programa PSSS for Windows. Release 8.0.0.1 Standard Versions. Copyrightã PSSS Inc., 1989-1999. RESULTADO E DISCUSSÃO O teste da Concentração inibitória com o extrato aquoso da S. versicolor em diferentes concentrações permitiu a determinação de uma concentração inibitória mediana da oviposição das teleóginas de B. microplus (Tabela 2). O seco médio obtido para o extrato aquoso na concentração de 20% foi de 17,2 mg mL-1 e a partir deste resultado relacionou-se a massa de 1 mL com as concentrações finais obtidas para o extrato aquoso (Tabela 1). Na Tabela 2 verifica-se que as teleóginas que foram expostas ao extrato aquoso nas concentrações de 0,54 e 1,07 mg mL-1 tiveram um comportamento semelhante ao controle negativo, porém com um percentual de ovipostura menor. Da mesma forma, estas concentrações apresentaram percentuais de inibição igual ao padrão (amitraz), registrando-se 16,7% de inibição da oviposição. Estes resultados este que diferem daqueles registrados por Martins et al. (2002) que obtiveram uma postura mínima de 10 e TABELA 2. Determinação da CI50 do (EA) da S. versicolor sobre a oviposição de Boophilus microplus. 26 Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.23-26, 2007. 20% nas diluições de 0,20 e 0,22 mg mL-1 respectivamente. O aumento gradativo da concentração possibilitou alcançar um percentual máximo de inibição da ovipostura, onde o extrato aquoso na concentração de 17,2 mg mL-1 foi capaz de inibir 100% da ovipostura. Segundo Oba & Dell’Porto (1982), é provável que a cepa de B. microplus sofra penetração do inseticida através da cutícula que é variável de acordo com a espessura da camada lipídica da pele, e da fase de desenvolvimento do artrópode, o que pode explicar estas observações. Na Tabela 2 observa-se ainda, que a concentração inibitória média calculada foi de 4,14 mg mL-1, sendo o limite de confiança superior de 24,74 mg mL-1 e o inferior de 1,46 mg mL-1. Registra-se também, que a inibição apesar de acontecer de forma gradativa, às concentrações 0,54 e 1,07 mg mL-1 apresentam o mesmo percentual de inibição, ocorrendo comportamento semelhante com relação as doses 2,15 e 4,30 mg mL-1. Consultando a literatura verificou-se que não há registro do cálculo da concentração inibitória para as teleóginas de B. microplus submetidas ao tratamento com o extrato aquoso da S. versicolor. Quanto a ovipostura verifica-se que foi inversamente proporcional à concentração e que não ocorreu de forma linear, impossibilitando a formação de uma curva sigmóide. Apesar de haver postura nas concentrações menores estudadas os ovos oriundos das teleóginas tratadas com a S. versicolor não apresentaram eclosão sendo totalmente inviáveis. De acordo com tais resultados pode-se afirmar que a S. versicolor é uma alternativa para o controle do carrapato bovino, principalmente onde a resistência a outros carrapaticidas tenha se desenvolvido. REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA ARANTES, G.J.; MARQUES, A.O.; HONER, M.R.O. Carrapato do bovino, Boophilus microplus, no município de Uberlândia análise da sua resistência contra carrapaticidas comerciais. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária , v.4, n.2, p.89-93, 1996. ARRIAGA, A.M.C. et al. Chemical constituents of Simarouba versicolor. Anais da Academia Brasileira de Ciências , v.74, n.3, p.415-24, 2002. CAMPOS JÚNIOR, D.A.; OLIVEIRA, P.R. Avaliação in vitro da eficácia de acaricidas sobre Boophilus microplus (Canestrini, 1987) (Acari: Ixodidae) de bovinos no munic[ipio de Ilhéus, Bahia, Brasil. Revista Ciência Rural , v.35, n.6, p.1386- 92, 2005. FERNANDES, M.Z.L.C.M. et al. Determinação da toxicidade aguda da Simarouba versicolor em camundongos. 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