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Fonte de luz: para iluminação de amostra. Lente condensadora: para focar o feixe de luz na altura da amostra. Platina: sobre ela é colocado o portaobjeto. Lente objetiva: para coletar a luz que passou pela amostra. Lente ocular: através da qual a imagem formada pela lente objetiva pode ser examinada diretamente. HistologiaHistologia 1- Base ou pé 2- Braço ou coluna 3- Canhão ou tubo 4- Révolver ou porta-objetiva 5- Platina 6- Micrométrico (ajuste de foco) 7- Macrométrico (ajuste de foco) 8- Parafuso ou diafragma del condensador 9- Fonte de luz e Diafragma de campo 10- Condensador 11- Ajuste da platina 12- Lentes Oculares 13- Lentes Objetivas Instrumento que amplia uma imagem e permite ver mais detalhes do que é possível a olho nu. A função de um microscópio é ampliar uma imagem a um nível em que a retina possa resolver informações, que ficariam abaixo da resolução. Microscópio de contraste de fase: são usados para aumentar o contraste sem tingir. Microscópio de fluorescência e confocal: projetado para visualizar estruturas através do uso de técnicas específicas. Como imunofluorescência. A óptica do microscópio eletrônico é semelhante à do microscópio de luz, exceto que o MET usa um feixe de elétrons em vez de um feixe de luz. Fornecem dados morfológicos e analíticos sobre células e tecidos. Metacromático: uma substância ou um componente celular é tingido com uma cor diferente da do corante usado. Ex: azul de toluidina na cartilagem jovem, mastócitos. Microscópio Óptico Microscópio Eletrônico - microscópio eletrônico de transmissão (MET) - microscópio eletrônico de varredura (MEV) 12 3 Componentes do microscópio de campo claro: Outros sistemas ópticos: 11 Assunto que cai na prova As amostras são coradas para permitir o exame, pois os cortes de parafina são incolores. Para corar os cortes histológicos, a parafina deve ser dissolvida e extraída, mais uma vez xilol e os tecidos devem ser reidratados com soluções alcoólicas. O tecido da lâmina é revestido com hematoxilina. (Solúvel em água). O corante de contraste, eosina. (Solúvel em álcool) HistologiaHistologia Ácidos: sais cuja base é incolor e seu ácido é colorido (eosina ou eosinato de sódio). Eles são corantes citoplasmáticos. Básico: sais cuja base é colorida e o ácido é incolor (azul de metileno ou cloridrato de azul de metileno). Eles são corantes nucleares.Hematoxilina: corante com propriedade básica; pode colorir subst/estruturas ácidas; cor azul. Eosina: corante com propriedade ácida; pode colorir subst/estruturas básicas; cor vermelha. H/E: corantes utilizados juntos para visualização da maior parte das estruturas da amostra; cor roxa. Em procedimentos cirúrgicos para análise anato- patológica imediata é utilizado o método de congelação. O corante usado é o azul de metileno ou violeta genciano. Orceína e fucsina-resorcina: corantes para elástina. Impregnação de prata: corante para fibras ret. e memb. basais. Neutro: sais nos quais o ácido e a base são coloridos. Eles tingem o núcleo de uma cor e o citoplasma de outra. Indiferente: não formam sais. Ele tinge as substâncias que têm um poder de dissolução superior ao do líquido que foi usado para preparar a solução corante. (Sudão III, vermelho escarlate) Ortocromático: os tecidos adquirem uma cor igual à da solução corante utilizada. Ex: azul de toluidina, tecido nervoso. Animais (carmin) Vegetais (hematoxilina, orceína, açafrão) Corantes H/E H&E Congelação Etapa 3: Coloração Exceções: elastina, fibras reticulares, membranas basais e lipídios - H/E não permite visualização adequada. Tipos de corante Corantes naturais: Corantes sintéticos: As colorações podem ser: Assunto que cai na prova HistologiaHistologia O primeiro passo da preparação de uma amostra de tecido ou órgão é a fixação para preservar a estrutura. A fixação preserva permanentemente a estrutura do tecido para os tratamentos subsequentes. As amostras devem ser imersas no fixador imediatamente após a remoção do corpo. -Abolir o metabolismo celular -Evita a degradação enzimática de células e tecidos por autólise (autodigestão) -Fortalece o tecido como resultado da formação de ligações cruzadas ou desnaturação de moléculas de proteínas. O tecido é formado pelo agrupamento de células com a mesma função. Os órgãos são unidades funcionais maiores, constituídas por diferentes tipos de tecidos, por exemplo, o coração. Após a fixação, é lavado e desidratado em uma série de soluções alcoólicas (álcool 75%, 90% e 100%). Em seguida, enxágue com xileno ou tolueno para extrair o álcool antes de filtrar com parafina. Quando a parafina esfria e endurece, ela se achata em um bloco de tamanho adequado (cacete). O bloco é colocado em uma máquina de corte especial (micrótomo), que o corta em fatias finas com lâminas de aço. Estudo científico das estruturas microscópicas dos tecidos e órgãos do corpo. “O estudo do tecido” refere-se a análise da composição microscópica e respectiva função do material biológico. Técnicas histológicas Processo que pode ser dado a uma amostra de órgão, obtida por biópsia ou necropsia; para ser visto no microscópio. Preparação de tecidos Etapa 1: Fixação (Formalina) A Fixação é utilizada para... -Destruir microorganismos patogênicos, como bactérias e fungos ou vírus. A substância + utilizada é a solução aquosa de formaldeído a 37% (formalina) Etapa 2: Inclusão de Parafina Tipos de corte: Transversal, Obliquo e Longitudinal. O corte limita o tecido para observação em apenas um plano. As secções obtidas são montadas nas lâminas de vidro utilizando um meio de montagem (resinas acrílicas) como adesivo. Vidro portaobjetos y cubreobjeto (onde as amostras são montadas)
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