BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA - QUESTIONARIO I - BIOMEDICINA

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PERGUNTA 1 
• Você deseja clonar um segmento de DNA recém-purificado de uma PCR, em um vetor específico – ambos 
representados na imagem a seguir. As sequências das extremidades do segmento purificado da PCR estão 
representadas pelas letras que constituem as bases dos nucleotídeos do DNA. Assim, é possível analisar 
qual enzima de restrição é a mais adequada para dar continuidade com o processo de clonagem. Admita 
que em seu laboratório você possui disponível apenas as enzimas de restrição listadas: BamHI, EcoRI, 
EcoRV, SmaI e XmaI. 
 
 
A partir das informações e do seu conhecimento sobre o assunto, determine qual alternativa apresenta a 
enzima de restrição adequada para você dar segmento com seu experimento de clonagem, considerando 
que você deseja controlar a posição de inserção do fragmento, respeitando o sentido de leitura do gene e 
que você irá utilizar a mesma enzima de restrição para digerir o inserto e o vetor. Nas alternativas estão 
apontados os sítios de reconhecimento de cada enzima de restrição. 
 a. BamHI. 
 b. EcoRI. 
 c. SmaI. 
 d. XmaI. 
 e. EcoRV. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 2 
• Qual das seguintes estratégias seria a mais adequada para purificação de uma mistura contendo proteínas 
de tamanhos distintos? 
 a. Cromatografia de afinidade. 
 b. Cromatografia de troca catiônica. 
 c. Cromatografia em gel filtração. 
 d. Cromatografia de troca aniônica. 
 e. Cromatografia por interação 
hidrofóbica. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 3 
• Um pesquisador deseja clonar a sequência codificante de um gene de 540 pb a jusante (downstream) do 
promotor (200 pb) de um vetor, para subsequente expressão e purificação da proteína de interesse. Assim, 
o gene foi isolado como fragmento da ação da enzima de restrição SmaI (o sítio de reconhecimento dessa 
enzima é CCC↓GGG / a seta indica sítio de clivagem) e clonado no sítio SmaI do vetor localizado 
imediatamente a jusante do promotor. A sequência do gene contém um único sítio para enzima de 
restrição EcoRI localizada 70 pb a jusante do códon iniciador. A representação esquemática do plasmídeo a 
seguir indica a localização dos sítios de reconhecimento de algumas enzimas de restrição no vetor e a 
posição de inserção do gene de interesse. 
 
 
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O pesquisador avaliou as colônias obtidas no processo de clonagem por meio da digestão do material com 
as duas enzimas de restrição HindIII e EcoRI. Qual dos seguintes padrões de digestão com essas duas 
enzimas de restrição representa o clone com perfil desejado pelo pesquisador para os experimentos de 
superexpressão? 
 a. ~270 pb + ~470 pb + o restante da 
estrutura vetor. 
 b. ~740 pb + ~70 pb + o restante da 
estrutura vetor. 
 c. ~200 pb + o restante da estrutura 
vetor. 
 d. ~810 pb + o restante da estrutura 
vetor. 
 e. ~200 pb + 540 pb + o restante da 
estrutura vetor. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 4 
• Leia e analise as proposições. 
I- CRISPR é um acrônimo da língua inglesa das palavras repetições palindrômicas curtas agrupadas e 
regularmente interespaçadas (clustered regularly interspaced short palindromic repeat). 
 
II- O operon CRISPR contém fragmentos de DNA viral provenientes de infecções prévias sofridas por 
organismos procariontes. Os cientistas descobriram que ele faz parte de um mecanismo de defesa de 
bactérias, sendo posteriormente adaptado como uma ferramenta de edição gênica. 
III- Sequências PAM, sgRNA (single guide), Cas são componentes importantes no processo de edição gênica 
mediada pelo operon CRISPR. 
IV- A edição gênica promovida pelo sistema CRISPR/Cas pode ser realizada apenas em éxons. 
V- A edição gênica realizada pelo sistema CRISPR/Cas permite exclusivamente a remoção de fragmentos do 
genoma (construção de knock-outs), além de ser uma técnica que pode ser aplicada apenas em organismos 
mais simples, como os procariontes. 
 
Assinale a alternativa correta. 
 a. Estão corretas apenas as 
afirmativas I e II. 
 b. Estão corretas apenas as 
afirmativas I, II e III. 
 c. Estão corretas apenas as 
afirmativas II, III e IV. 
 d. Estão corretas apenas as 
afirmativas I, III e V. 
 e. Estão corretas apenas as 
afirmativas II, III e V. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 5 
• Um dos reagentes utilizados na preparação de células competentes é: 
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 a. HCl. 
 b. NaCl. 
 c. Glicina. 
 d. Formamida. 
 e. CaCl2. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 6 
• Eletroporação é: 
 a. O processo de separação de 
moléculas carregadas, por meio de 
um gel mantido em um campo 
elétrico. 
 b. O processo que permite a ligação 
do DNA exógeno a um vetor 
eletricamente carregado. 
 c. O processo que estimula a 
multiplicação celular. 
 d. Aplicação de pulsos de alta 
voltagem, geralmente utilizados 
para criação de poros na 
membrana plasmática das células. 
 e. Aplicação de pulsos de baixa 
voltagem, usados para fechar os 
poros da membrana plasmática das 
células após protocolo de choque 
térmico. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 7 
• Vetores são: 
 a. Moléculas que degradam ácidos 
nucleicos. 
 b. Moléculas que auxiliam na 
replicação. 
 c. Moléculas que são capazes de se 
ligar covalentemente a um 
segmento de DNA e carregá-lo para 
o interior das células. 
 d. Moléculas que protegem a célula 
hospedeira contra a invasão de 
DNA exógeno. 
 e. Moléculas que impedem a 
replicação do DNA endógeno da 
célula. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 8 
• Os cosmídeos não apresentam: 
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 a. Genes que codificam proteínas 
virais. 
 b. Origem de replicação. 
 c. Genes de resistência a antibióticos. 
 d. Sítios de reconhecimento para 
enzimas de restrição. 
 e. Sequência cos. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 9 
• Qual é o papel das enzimas de restrição nas bactérias? 
 a. Degradar o cromossomo 
bacteriano durante a replicação. 
 b. Degradar o DNA de fagos 
invasores. 
 c. Produzir iniciadores de RNA para a 
replicação. 
 d. Degradar o DNA de outras 
bactérias durante o processo de 
conjugação. 
 
 e. Inserir o DNA de fagos invasores no 
DNA cromossômico. 
0,5 pontos 
PERGUNTA 10 
• “Em 1998, a equipe do biólogo James Thomson, da Universidade de Wisconsin, Estados Unidos, isolou e 
desenvolveu pela primeira vez em laboratório uma linhagem de células-tronco extraídas de embriões 
humanos. Foi um feito técnico e um problema ético para a pesquisa biológica. Feito, porque os estudos 
com essas células podem, em teoria, levar a melhores tratamentos ou à cura de uma lista quase 
interminável de doenças. Se devidamente cultivadas, as células-tronco embrionárias, e apenas elas, podem 
dar origem a todos os tecidos de um organismo, cerca de 220 tipos distintos de células que seriam a 
matéria- prima de novas terapias. Problema, porque a forma de obtê-las ofende a crença de parcelas da 
sociedade, em especial os religiosos, e, em alguns países, também as leis: as células-tronco são retiradas 
de embriões, que, ao ceder esse material, tornam- se inviáveis.” (Pesquisa Fapesp, https:// 
revistapesquisa.fapesp.br/celulas-tronco/, 2005) 
 
Com relação às células-tronco, é incorreto afirmar: 
 a. As células-tronco podem ser 
retiradas da massa celular interna 
de blastocistos. 
 b. As células-tronco de um paciente 
podem ser usadas para regenerar 
seus tecidos ou órgãos lesados, 
eliminando o risco de rejeição 
imunológica. 
 c. As células-tronco de adulto, caso 
recebam estímulo adequado, são 
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capazes de se diferenciar em 
outros tipos de célula, 
independentemente do seu tecido 
de origem. 
 d. Quando retiradas de embriões 
congelados, eliminam as questões 
éticas e religiosas associadas à 
obtenção de órgãos para 
transplantes, independentemente 
do tempo de congelamento. 
 e. As células-tronco embrionárias são 
capazes de se diferenciar em 
outros tipos de células, desde que 
cultivadas sob condições 
adequadas. 
 
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