MÉTODOS DE COLETA DE SÊMEN

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Biotecnologia da Reprodução Animal dsfdsfdsf fsfs
 MÉTODOS DE COLETA DE SÊMEN 
 Para uso imediato, e para preservação (resfriado e 
 congelado); 
 MÉTODOS: vagina artificial, eletroejaculação, massagem 
 digital/mão enluvada, massagem abdominal, estimulação 
 farmacológica (cloridrato de dexmedetomidina), cauda do 
 epidídimo (alternativa post mortem utilizada em equinos); 
 AVALIAÇÃO DA QUALIDADE SEMINAL: avalia-se as 
 características físico químicas por meio dos 
 exames imediato (logo após a colheita; volume , 
 cor, odor, aspecto (concentração), 
 turbilhonamento, motilidade e vigor ) e mediato 
 (laboratório; concentração, morfologia, 
 funcionais (membrana, acrossomo, mitocôndria, 
 DNA); 
 Motilidade : movimentação do sptz (progressivo, 
 circular, oscilatório, retrógrado); avalia-se a 
 porcentagem de células que se movem 
 progressivamente; 
 Lâmina e lamínula (pré-aquecidas 37ºC para não causar 
 choque térmico nos sptz, e consequente morte ou mais 
 alterações na avaliação); microscópio em 100 - 200 X; 
 diluição (citrato de sódio 2,94% ou solução fisiológica); 
 Vigor: relacionado à motilidade progressiva; 
 CLASSIFICAÇÃO DE WALTON 
 5- Todos ou a maioria exibem movimentos progressivos 
 4- 75% dos sptz tem movimentos progressivos 
 3- Metade dos sptz com movimento progressivo e 
 oscilatório e metade de imóveis 
 2- Só existem sptz com movimentos oscilatórios e um 
 grande número de imóveis 
 1- Todos os sptz são imóveis 
 0- Ausência de espermatozoides 
 Concentração : aspecto (cor), microhematócrito, 
 espectrofotômetro, colorímetro, 
 espermiodensímetro, câmara de Neubauer 
 (hemocitômetro), e CASA (sistema de análise 
 computadorizada do movimento espermático); 
 Colorímetro: consiste em registrar a quantidade de luz 
 absorvida por uma amostra; 
 Espermiodensímetro: baseado no grau de turbidez do 
 ejaculado; 
 Câmara de Neubauer-hemocitômetro: necessita-se do 
 espermatozóide morto; amostra diluída (d) em formol 
 salino/água; 
 Bovino 
 Peq ruminante 
 Equino 
 1:200 
 1:400 
 1:100 
 Cão 
 Suíno 
 Aves 
 1:20/ 1:200 
 1:100 / 1:200 
 1:1000 
 • Não se conta os espermatozoides de duas linhas (se 
 decide quais; normalmente em L); para não superestimar 
 a quantidade de espermatozoides; 
 Morfologia: realização da análise das 
 características morfológicas do sêmen (tipos de 
 defeitos) 
 Técnicas: preparação úmida (lâmina e lamínula); sêmen 
 diluído em formol salino aquecido (osmolaridade e 
 choque térmico); contraste de fases ou contraste 
 diferencial de interferência de fase (DIC); 
 Defeitos Maiores/Primários: afetam a motilidade e a 
 capacidade de fecundação do espermatozoide; 
 Defeitos Menores/Secundários: meio termo, não 
 atrapalhando tanto na motilidade e fecundação; 
 Defeitos Totais: classificar pelo defeito mais severo; 
 Sistema de análise computadorizada do movimento 
 espermático (CASA): avalia-se a motilidade, 
 morfologia e concentração; 
 TESTES FUNCIONAIS: 
 Teste de integridade de membrana: teste 
 hipo-osmótico (solução hipo-osmótica de 
 frutose/citrato de sódio/água destilada), 
 eosina-nigrosina; 
 Teste de fragmentação de DNA: ensaio cometa 
 (eletroforese), teste FUNEL (sonda fluorescente), 
 azul de toluidina; 
 Sondas Fluorescentes: integridade de membrana e do 
 acrossomo, além do potencial mitocondrial; 
 Citometria De Fluxo: equipamento onde se passa o fluxo de 
 sêmen e se consegue fazer a contagem dos sptz; 
 LIGAÇÃO DO OÓCITO: ZP homóloga, oócito de 
 hamster livre de ZP, e membrana perivitelínica 
 de ovo de galinha; 
 SEXAGEM : capacidade de separar o sptz X do Y (X 
 ~4% DNA > Y; dependendo da minha intenção de 
 produção (fêmea/leite ou macho/corte); gradiente 
 de concentração (Percoll; diminuir o meio em 
 concentrações diferentes, onde o X (que é mais 
 pesado) permanece abaixo e o Y ficará na 
 superfície); taxa de eficiência de 70-80%; 
 Citometria de fluxo: corante Hoechst 33342 onde o X cora 
 mais por ser mais denso; taxa de eficiência de 90%;