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Disciplina: Microbiologia Clínica
Aluna : Marcelle Verdan 
Tarefa 4
Leia com atenção as propostas de atividade listadas a seguir e responda-as de forma detalhada. 
1. Estudos sobre Staphylococcus.		
Estudo 1A. Um adolescente com gripe confirmada foi hospitalizado ao apresentar estresse respiratório. Ele apresentou ainda febre, erupção cutânea e pressão arterial baixa. Staphylococcus aureus foi isolado de suas secreções respiratórias. 
a) Qual a melhor forma de coletar amostras de secreções respiratórias do trato superior? 
R- Amostras do de nasofaringe ou orofaringe com swab apropriado com meio para exame de cultura, biologia molecular ou swab sem meio para Gram e teste rápido .
b) Qual a melhor forma de coletar amostras do trato respiratório inferior? 
R- O trato respiratório inferior consiste em órgãos localizados na caixa toráxica: traqueia, brônquios, brônquiolos, alvéolos e pulmão. As camadas da pleural e músculos que formam a cavidade toráxica também fazem parte do trato respiratório inferior. Sendo assim a coleta dessas amostras se dá por aspiração , biopsia ou indusão no caso de amostras de escarro.
c) Qual o procedimento laboratorial comumente adotado para análise de amostras do trato respiratório quando há suspeita de infecção por Staphylococcus?
 R- São realizados cultura da amostra coletada e teste de catalase.
d) Discuta a relação entre os sintomas apresentados pelo paciente (estresse respiratório, febre, erupção cutânea e pressão baixa) e o agente etiológico (Staphylococcus). 
 R- Ocorre a síndrome de choque tóxico que é um grupo de sintomas graves, que são rapidamente progressivos. É causada por toxinas produzidas pela bactéria ( gram- positiva) em formas de esferas ( cocos).
Estudo 1B. Pacientes que sofreram queimaduras moderadas ou graves devem ser internados para receber tratamento imediato, pois há sério risco de complicações, uma vez que ocorre a quebra da barreira natural de proteção do corpo contra microrganismos do ambiente, favorecendo a infecção das feridas e, em casos mais graves, podendo acarretar bacteremia. Nos Centros de Tratamento de Queimados, a infecção é responsável por 75 a 80% dos óbitos. Nesse contexto, uma amostra foi coletada de um paciente queimado e inoculada em Ágar Sal-Manitol (Imagens 1 e 2). Após período de incubação, detectou-se a presença de Staphylococcus aureus. 
a) Qual imagem representa o meio com provável crescimento dessa espécie? 
 R- Imagem 2.
b) Qual a diferença entre o microrganismo que cresceu na Imagem 1 daquele crescido na Imagem 2? Considere o porquê de o Ágar Sal-Manitol mudar de cor de rosa/avermelhada para amarelo em sua resposta.
 R- A degradação do manitol com a produção de ácido muda a cor do meio de rosado para amarelo , devido a alta concentração de NaCl ocorre a inibição de crescimento de bastonetes Gram- negativos e da maioria dos microrganismos. Staphylococcus aureus fermentadores de manitol produzem colônias grandes e rodeadas de uma zona amarela são considerados patogênicos. Os staplylococos não patogênicos típicos não fermentam manitol e formam colônias vermelhas.
Imagem 1- Staphylococcus não patogênicos 
Imagem 2- Staphylococcus patogênicos. 
c) Cite outro microrganismo comumente associado à infecção de pacientes queimados e quais os métodos diagnósticos utilizados em laboratório de análise para sua confirmação.
 R- Os principais patogênos presente em queimados são: pseudomonas aureginosa, Staphylococcus aureus, acinetobacter sp, cândida albicans, Proteus sp. Esses microrganismos podem estar ou não relacionadas a própria microbiota do paciente. O processo de infecção, com a perda da primeira linha de defesa imunológica, deixa o organismo suscetível a entrada e instalação desses microrganismos. 
No caso de queimaduras, a superfície da ferida certamente estará colonizada pela microbiota do próprio paciente e pelos microrganismos do meio ambiente em que se encontra. Com isso a cultura a cultura somente dá amostra superficial pode levar a erros e, nesses casos, a biopsia de tecido profundo é o método de diagnóstico mais indicado. Além disso os microrganismos não ficam distribuídos somente na ferida queimada. Portanto durante a coleta, recomenda- se coletar também amostras áreas adjacentes a queimadura .
As amostras de biopsia, devem ser colocadas em frasco estéril, com meio de cultura líquido ou solução fisiológica. As amostras devem ser encaminhadas ao laboratório imediatamente, ou sob refrigeração entre 2° e 8°C no máximo por 24h.
	Imagem 1.
	Imagem 2.
	
	
	 Fonte : Imagem 1
https://www.biomedicinapadrao.com.br/2011/11/guia-meios-de-cultura-para-bacteriashtml
	Fonte : Imagem 2
https://medsaude.wordpress.com/2008/05/20/sobre-staphylococos/
2. Estudos sobre infecções fúngicas.
Estudo 2A. Antibioticoterapia é um fator predisponente para a aquisição de candidíase. Você saberia responder por que o uso de antibióticos de amplo espectro pode favorecer essa infecção fúngica oportunista?
R- Porque os antibióticos causam a interrupção do sistema imunológico no intestino, com isso ocorre a diminuição de bactérias comensais que fazem o papel importante contendo o organismo. 
Estudo 2B. O exame direto para diagnóstico de infecções causadas por fungos consiste em avaliar a amostra clínica microscopicamente, entre a lâmina e a lamínula, utilizando reagentes e/ou corantes para a visualização das estruturas fúngicas. Embora o exame direto seja conclusivo para o diagnóstico de algumas micoses, na maioria das vezes, esse exame não é suficiente para a identificação do agente etiológico. Observe as Imagens 3 e 4 a seguir e, depois, resposta às questões propostas: 
a) Três tipos de fungos são indicados na Imagem 3. Quais são eles? Quais as principais características de cada um deles e quais micoses podem causar? Discuta com detalhes essas doenças. 
 R- a- Paracoccidioides brasilienses
 b- Crytococus sp
 C- Conidiofóro aspergilar
Paracoccidioides brasilienses – É a primeira micose sistêmica no Brasil. Essa doença representa uma das dez principais morte por doenças infecciosas e parasitárias, crônicas e recorrentes no país. 
É causada por um fungo termodimórfico do gênero Paracoccidioides spp. Com destaque para duas espécies patogênicas: Paracoccidioides brasilienses e Paracoccidioides lutzie. Esses fungos estão dispersos no meio ambiente. 
A transmissão se dá a exposição ao fungo, através do manejo do solo contaminado, atividades agrícolas, preparou do solo, entre outras .
A principal porta de entrada do fungo no organismo é por via inalatória. Os órgãos comumente afetados são os pulmões, pele, mucosas, linfonodos, adrenais, sistema nervoso central, fígado e ossos.
Principais formas clínicas da doença: 
Forma aguda- progressão das lesões primárias evolui rapidamente, de semana a meses. Essa forma clínica é grave devido a elevadas taxas de letalidade em crianças e adolescentes. Causa hipertrofia do sistema retículo endotelial e acometimento generalizado doa linfonodos. O fungo pode se disseminar para outros órgãos ou sistemas como pel, ossos, e sistema gastrointestinal, fígado, baço, e medula óssea. 
Forma crônica- se manifesta de forma mais lenta, com duração dos sintomas de 4 a 6 meses. Ocorre o comprometimento pulmonar, as mucosas das aerodigestivas superiores e pele são locais mais acometidos.
Forma residual- São sequelas, se manifesta Clinicamente com alteração anatômicas e funcionais causadas pelas cicatrizes que se seguem ao tratamento. Podem ser observadas em vários órgãos , com maior frequência nos pulmões, pele , laringe, traqueia, glândulas adrenais, mucosa das vias aerodigestivas superiores, sistema nervoso central e sistema linfático .
O diagnóstico é clínico laboratorial, a confirmação laboratorial é feita com achado do fungo em secreções e tecidos em forma de levedura com ou sem gemulação através de cultura específica, realizando sorologia e histopatológico .
Crytococus sp- É uma infecção pulmonar ou disseminada, adquirida por inalação de solo contaminadocom a levedura encapsulada. Os sintomas são de pneumonia, meningite, envolvimento cutâneo, ósseos e das vísceras. 
Ela é popularmente como a doença do pombo, é causada por Crytococus neoformans , sendo encontrada nas fezes dos pombos, frutas e solo contaminado. 
O diagnóstico laboratorial é realizado através da coleta de líquor, urina, fragmentos de tecido, apirados de leões cutâneas, escarro e demais amostras do trato respiratório. 
Conidiofóro aspergilar- A aspergilose e uma infecção oportunista que costuma afetar o trato respiratório inferior, causa pela inalação de esporos de fungos filamentoso, os esporos germinam e se transforma em hifas.
Os sintomas mais comuns são: tosse persistente com presença de catarro ou sangue , dificuldade ao respirar, dor no peito e febre.
O diagnóstico é por meio invasivo através do histopatológico ou citopatólogico pulmonar obtido por taracoscopia ou biopsia do pulmão. A presença de hifas no tecido analisado juntamente com a cultura positiva para Aspergillus do mesmo local onde a amostra foi colhida.
b) A micose representada na Imagem 4 pode ser causada por algum microrganismo identificado na Imagem 3? Discuta
 R- Não- a imagem 4 apresenta uma micose cutânea, também chamada de onicomicose ou tinea unguim.
A imagem 3 os fungos apresentados causam outros tipos de doenças em principal no trato respiratório. 
c) Quais os fungos mais frequentemente isolados em micoses de unha (Imagem 4)?
 R –Fungos dermatofitos: Trichophyton rubrum, Trichophyton soudaniense, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton violarem
Fungos não- dermatofitos: Fusarium, Aspergillus, Aeromonuim, Scytaliduim, Scopulariopsis brevicaulis.
Leveduras: Cândida 
d) Que tipo de amostra pode ser usado para a realização de exame microscópico no caso da Imagem 4? Descreva os procedimentos de coleta.
R- Exame micologico direto, que e realizado para detecção de fungos em microscópico. A coleta é realizada através de raspado da lesão em pote estéril, com lâminas ou esculpidores. Realizar a assepsia com álcool 70% e realizar a coleta na parte mais profunda da lesão. 
O paciente deve estar sem uso de antifúngicos de uso tópico e oral por pelo menos 15 dias, sem esmalte por 72h.
	Imagem 3.
	Imagem 4.
	
	
	Fonte: Imagem 3
https://www.scielo.br/j/jbpneu/a/M7N9sPGKtzJgs9zD9GzsnSn/?lang=en&format=pdf
Imagem 4
http://www.hiltonfito.com.br/orientacao/95-micose-de-unha/ 
3. Estudo sobre detecção de resistência bacteriana aos antibióticos.
Estudo 3A. O antibiograma ou teste para detecção de resistência deve ser realizado a partir de bactérias isoladas de amostras clínicas representativas de um processo infeccioso, no qual a sensibilidade aos antimicrobianos não é previsível. O método de disco-difusão em ágar (Imagem 5) é o mais simples, barato, e ainda assim confiável e, por isso, o mais utilizado em muitos laboratórios de Microbiologia Clínica.
	Imagem 5.
	
Fonte: Imagem 5
https://www.scielo.br/j/jbpml/a/3PycFnSvcR4n4D3BxYZQYBn/?lang=pt&format=pdf
a) Como é realizado o teste de disco-difusão? Descreva as etapas de (1) preparo do inóculo, (2) inoculação das placas, (3) aplicação dos discos, (4) incubação e (5) leitura.
 R – E um teste que se baseia na difusão através do ágar- Muller Hinton, de um antimicrobiano impregnado em um disco de papel de filtro. A difusão do antimicrobiano produz a formação de um halo de inibição do crescimento bacteriano. Esse método foi idealizado por Bauer et.al em 1966, e desde então é um dos métodos mais utilizados nos laboratórios. 
1- Preparo do inoculo- Tem início com uma placa previamente semeada, quando algumas colônias são transferidas para um tubo de solução salina estéril até que fique turvo semelhante ao tubo de escala MC Farland 0,5, significando que a concentração no tubo de salina é 1,5× 10⁸ UFC/ ml.
2- Inoculação nas placas – semear a suspensão bacteriana uniformemente sobre a superfície do ágar Muller Hinton utilizando um swab de algodão previamente embebido na suspensão bacteriana . A inoculação deve ser feita em três direções, afim de obter um inoculo uniforme , formando um tapete na superfície do meio.
3- Aplicação dos discos- colocar os discos de antibióticos sobre a superfície do ágar inoculado, com auxílio de uma pinça estéril ( ou flambada) . Pressionar levemente cada disco para baixo para assegurar um contato uniforme no meio.
4- Incubação- é realizada em estufa a 37°C por 24horas .
5- Leitura- realizar a leitura do diâmetro dos halos de inibição do crescimento bacteriano ao redor dos discos de antibióticos e comparar com a tabela para interpretação do grau de suscetibilidade para cada microrganismo.
b) Como selecionar os antimicrobianos que são utilizados no teste?
 R- A partir do resultado da cultura , cada microrganismo tem sua gama de antibióticos a serem testados .
c) Quais as limitações da técnica e que fatores podem afetar o resultado do antibiograma?
 R- O amplo e inadequado uso de antibióticos, microrganismo de crescimento lento, necessidade de prolongar a incubação do microrganismo. Esses fatores podem causar erros n leitura ou resultados imprecisos.
d) Por que se diz que esse método é qualitativo e não quantitativo?
R- Porque é um método que se mede a sensibilidade do antibiótico testado. Ele não quantifica nada .
e) Que outro teste pode ser realizado para conhecer a resposta de um determinado microrganismo aos antimicrobianos? Cite e explique a técnica.
R- O Etest é um método manual ideal para operações de antiograma de rotina, consiste em gradiente de concentração de antibióticos pré-definido colocado em uma fita plástica, que é utilizada para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) de antibióticos.