Recuperação e purificação de bioprodutos

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Recuperação e purificação de bioprodutos – 2020 
Atividade Avaliada 01 
Jamile Lima Rodrigues – 72048 
1. Explique o que é precipitação fracionada e quando ela pode ser utilizada. 
A precipitação fracionada tem sido frequentemente utilizada industrialmente, ela 
leva a purificação, no entanto gera algumas dificuldades na reprodutibilidade dos 
resultados obtidos em laboratório e a redução de eficiência com o aumento de 
escala, pois ocorrem impasses com o aumento de escala. 
A precipitação fracionada é quando se utiliza elementos que, ao reagirem com 
outros elementos, irão produzir um composto novo, a concentração do agente 
de precipitação é bastante responsável, no entanto fatores como pH, 
temperatura, força iônica e concentração de proteínas também são variáveis 
importantes no sistema. 
A precipitação fracionada acontece quando produtos de solubilidade de dois são 
pouco solúveis e que possuem um íon comum que se diferem. Assim, um sal se 
precipitará quase que por completo antes mesmo que o outro inicie a 
precipitação. 
 
2. Baseado no exemplo apresentado no livro (página 219, figuras 6,2 e 6,3), 
proponha um outro exemplo para utilização da precipitação fracionada. 
Não precisa pesquisar valores reais, suponha moléculas e suas diferentes 
concentrações, e proponha uma metodologia para separação. 
De acordo com COSTA, et al., 2008, os extratos proteicos obtidos em cinco 
diferentes tampões de extração (Tampão ácido sulfúrico/sulfato de sódio pH 4,5; 
tampão acetato pH 3,6; tampão acetato pH 4,0; tampão acetato pH 5,0 e tampão 
fosfato pH 7,0), foram determinado o teor de proteínas totais pelo método de 
BRADFORF (1976), a atividade proteolítica pelo método de Depeau (1976) 
modificado e foi feito uma relação entre os dois valores para se obter a atividade 
específica das enzimas proteolíticas. 
Os resultados obtidos foram que o ácido sulfúrico/sulfato de sódio pH 4,5 obteve 
melhor extração de proteínas, além disso, os extratos proteicos obtidos 
utilizando ácido sulfúrico/sulfato de sódio apresentaram valores maiores de 
atividade proteolítica, 37,54 U/ml. O valor de atividade específica das enzimas 
proteolíticas foi maior no extrato obtido com solução de ácido sulfúrico/sulfato de 
sódio (32,08 U/mg) (Tabela 1) (COSTA, et al., 2008). 
 
Na comparação das duas técnicas de precipitação fracionada, a precipitação por 
sulfato de amônio foi mais efetiva na manutenção dos valores de atividade 
proteolítica nas frações 20-50% e 50-75%, a utilização destas frações 
apresentaram uma atividade proteolítica mais próxima do extrato proteico total 
foi de 88,57%. Os resultados indicam que a precipitação por sulfato de amônio 
é a técnica mais efetiva para os passos iniciais de purificação de bromelina 
(Tabela 2) (COSTA, et al., 2008). 
 
 
 
As frações 20–50% e 50-75% de sulfato além de possuírem bandas com o 
mesmo peso molecular, apresentaram maiores valores de atividade proteolítica, 
podendo ser um indicativo provável de maior concentração desta enzima nessas 
frações. 
Foi concluído que na comparação entre as técnicas de extração e de 
precipitação, a extração com tampão ácido sulfúrico/sulfato de sódio pH 4,5 
seguidas de precipitação por sulfato de amônio, demonstrou ser mais efetiva no 
processo inicial de purificação da bromelina do abacaxizeiro (COSTA, et al., 
2008). 
 
Referências 
COSTA, H. B., FERNANDES, P.M.B, VENTURA, J.A. Extração, purificação 
parcial e comparação de duas técnicas de precipitação de enzimas 
proteolíticas do abacaxizeiro. Nucleo de biotecnologia, Universidade Federal 
do Espírito Santo – UFES, XX Congresso Brasileiro de Fruticultura, 2008. 
Acesso: 27/10/2020, Disponível em: <COSTA, H.B.; FORTUNATO F.S; 
DELBONI, S.G.; VENTURA, J.A. Proteolitic activity in stems of 'Vitória', 'Smooth 
Cayenne' and 'Pérola' pineapple plants. Pineapple News. Honolulu, v. 15, p.70, 
2008> 
DEPEAU, G. R. Methods in Enzimology. v. 45 New York: Academic Press, 
1976.