AULA 11 clonagem

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Clonagem gênica
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• Preproinsulina: 110 a.a
Peptídeo sinal, cadeia A, B e C
• Proinsulina: remoção do peptídeo sinal para localização no]
Retículo Endoplasmático
• Insulina: 51 a.a.
clivagem enzimática do peptídeo C, formação de pontes
dissulfeto.
Clonagem do gene da preproinsulina (PPI)
Insulina: controle dos níveis de glicose no sangue, metabolismo
De açucares, proteínas e lipídeos
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Expressão recombinante de genes
bactérias
proteínas recombinantes
produção de vacinas recombinantes
produtos de interesse farmacêutico
produtos de interesse industrial
leveduras
células eucarióticas em cultura
plantas
animais
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Obtenção do Fator de crescimento de
granulócitos (G-CSF) recombinante em bactérias
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Extrato total proteico de bactérias separado em SDS-PAGE
não induzidas
Proteína de
70kDa
recombinante
induzidas com IPTG
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Obtenção de insulina
recombinante
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Obtenção de camundongos
transgênicos
-geração de linhagens modelos para
estudo para pesquisa
Transgene: pode estar sobre
controle de um promotor induzível
10-30% sobrevivência
Transgene integrado em células
somáticas e germinativas
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Ovelhas transgênicas:
Produção de proteínas
recombinantes no leite
hGH = hormônio do crescimento humano
hGH
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Expressão de toxinas em
plantas transgênicas