10_-_Fosforo

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Universidade Federal de Santa Maria
Centro de Ciências Rurais
Departamento de Tecnologia e Ciência dos Alimentos
Curso de Graduação em Agronomia
Disciplina de Bromatologia Animal
Protocolo de Protocolo de 
óóFósforo (P)Fósforo (P)
Professor: Renius Mello
by Prof. Renius Mello
1. Objetivo
‰ Determinar o teor de fósforo (P) em alimentos para animais.
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2. Método
‰ Molibdato-Vanadato
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3. Escopo
‰ Este método é aplicável para a determinação dap p ç
dosagem de fósforo (P) em todos os tipos de forragens
e rações.e rações.
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4. Princípio básico
‰ Os minerais são solubilizados com H2SO4. Baseando-2 4
se na reação de Misson, a solução contendo ortofosfato
(PO4---) é tratada com reagente Vanadato-Molibdato em(PO4 ) é tratada com reagente Vanadato Molibdato em
meio ácido, ocorrendo a formação do complexo
amarelo estável de ácido vanadi molibdi fosfórico oamarelo estável de ácido vanadi-molibdi-fosfórico, o
qual é dosado colorimetricamente em 420 nm.
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5. Equipamentos
‰ Balão volumétrico de 50 e 100 mL
‰ Erlenmeyer de 100 mL
‰ Funil e papel filtro
‰ Pipetas volumétricas
f ô l é‰ Espectrofotômetro colorimétrico
‰ Balança analítica eletrônica com precisão de 0 1 mg‰ Balança analítica eletrônica com precisão de 0,1 mg
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6. Reagentes
‰ Ácido sulfúrico (H2SO4) 10 N( 2 4)
‰ Reagente misto
‰ Molibdato de amônio à 5%
d d ô à 0 2 %‰ Vanadato de amônio à 0,25%
‰ Somente no momento de uso proceder a mistura dos‰ Somente no momento de uso proceder a mistura dos
reagentes em partes iguais (50:50)
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6. Reagentes
‰ Padrão com 20 μg de Pμg
‰ Pipetar 5 mL da solução estoque contendo 80 μg de P e
colocar em balão volumétrico de 100 mLcolocar em balão volumétrico de 100 mL
‰ Adicionar 4 mL de H2SO4 10N e H2O q.s.p. 100 mL2 4 2 q p
‰ Pipetar 5 mL da solução acima, colocar em tubo de ensaio
e adicionar 2 mL de reagente mistoe adicionar 2 mL de reagente misto
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6. Reagentes
‰ Branco para calibrar o fotocolorímetrop
‰ Colocar 25 mL de H2O destilada e 1 mL de H2SO4 10N num
béquer pequenobéquer pequeno
‰ Pipetar 5 mL da solução acima, colocar em tubo de ensaiop ç ,
e acrescentar 2 mL de reagente misto
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7. 
Procedimento/marcha/roteiro
A) PREPARO DAS CINZAS:
I. Pesar 0,1g de cinzas e colocar em balão volumétrico de 50
mLmL
II. Adicionar 2 mL de H2SO4 10N no balão volumétrico
III. Adicionar H2O q.s.p. 50 mL do balão volumétrico (solução 1
ou solução mãe - SM)ou solução mãe SM)
IV. Agitar e filtrar a solução 1 (SM) em papel filtro
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7. 
Procedimento/marcha/roteiro
B) TÉCNICA
V. Pipetar 10 mL do filtrado (SM) e colocar no balão de 100 mL
VI. Adicionar H2O q.s.p. 100 mL (solução 2 ou de trabalho – ST)
VII Pipetar 5 mL da solução 2 (ST) e colocar em tubo de ensaioVII. Pipetar 5 mL da solução 2 (ST) e colocar em tubo de ensaio
VIII. Adicionar 2 mL de reagente misto ao tubo de ensaio
IX. Repousar por 5 min., calibrar o fotocolorímetro com o
branco e fazer a leitura das amostras e do padrão com 20 μgbranco, e fazer a leitura das amostras e do padrão com 20 μg
de P em 420 nm.
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8. Cálculos
‰ Dados:
T (%) A( )
Padrão 20 μg P 50
Amostra 72
0,301
0 143
A l 100/T A l T/100
Amostra 72 0,143
A= log 100/T ou A= -log T/100
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8. Cálculos
‰ PI:
0,301 A 20 μg P
0 143 A X0,143 A X
X = 9,50166 μg de P em 5 mL
5 mL (ST) 9,50166 μg de P
100 mL (ST) X
X = 190,0332 μg de P
2,4655 g MPS → 0,1703 g Cz → 0,1 g Cz → 50 mL (SM) → 10 mL → 100 mL (ST) → 5 mL(leitura)
X 190,0332 μg de P
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8. Cálculos
‰ PI:
10 mL (SM) 190,0332 μg de P
50 mL (SM) X50 mL (SM) X
X = 950,166 μg de P
2,4655 g MPS → 0,1703 g Cz → 0,1 g Cz → 50 mL (SM) → 10 mL → 100 mL (ST) → 5 mL(leitura)
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8. Cálculos
‰ PI:
0,1 g Cz 950,166 μg de P
0 1703 g Cz X0,1703 g Cz X
X = 1.618,13 μg de P
2,4655 g MPS → 0,1703 g Cz → 0,1 g Cz → 50 mL (SM) → 10 mL → 100 mL (ST) → 5 mL(leitura)
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8. Cálculos
‰ PI:
2,4655 g MPS 1.618,13 μg de P
36 18 g MPS X36,18 g MPS X
X = 23.745,26 μg de P em 100g AV
23 745 d P 100 AV23,745 mg de P em 100 g AV
0,023 g de P em 100 g AV (%)
0 02 % d P PI0,02 % de P no PI ou
2,4655 g MPS → 0,1703 g Cz → 0,1 g Cz → 50 mL (SM) → 10 mL → 100 mL (ST) → 5 mL(leitura)
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8. Cálculos
‰ PI:
0,1 g Cz 950,166 μg de P
2 5 g Cz X2,5 g Cz X
X= 23.754,15 μg P em 100 g AV
0 023 g P em 100 g AV (%)
2,4655 g MPS → 0,1703 g Cz → 0,1 g Cz → 50 mL (SM) → 10 mL → 100 mL (ST) → 5 mL(leitura)
0,023 g P em 100 g AV (%)
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8. Cálculos
‰ MS:
34,40 % MS 0,023 % P
100 00 % MS X100,00 % MS X
X = 0,067 % de P na MS ou
0,1 g Cz 950,166 μg de P
7,27 g Cz X
X= 69 077 1 μg P em 100 g MS
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X= 69.077,1 μg P em 100 g MS
0,069 g P em 100 g MS (%)
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Dúvidas?
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