Relatório 03 - Espectrometria de absorção (Espectrofotometria)

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UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS
ESCOLA SUPERIOR DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
ATIVIDADE AVALIATIVA
AULA PRÁTICA 03 –Espectrometria de absorção (Espectrofotometria)
Disciplina: Bioquímica (ESA-0222)
Turma: T01 (2021/01)
Prof. Dr. Hugo Valério Corrêa de Oliveira
INSTRUÇÕES:
- ATIVIDADE AVALIATIVA: entregar até às 23h59min do dia 26/10/2021.
- Os grupos devem ser compostos por 5 discentes.
- Redigir as respostas na folha de respostas, salvar em formato PDF e enviar para o e-mail: hvoliveira@uea.edu.br
- Redigir as respostas com suas próprias palavras, não sendo permitida a simples cópia e colagem de fragmentos de textos, tal como está escrito em outra fonte (ipsis litteris).
Data:26 /10/2021 
	Alunos
	Matrícula
	1. Alice Cavalcante Souza
	2022020007
	2. Elisson Amorim Rodrigues
	2022020014
	3. Giovanna Beatriz André Lopes
	2022020053
	4. Igor Teles Santiago
	2022020020
	5. Tuffi Gomes De Lima
	2022020079
1ª PARTE - Experimento de varredura Espectral: determinação do comprimento de onda onde a molécula de azul de metileno apresenta maior absorção da energia eletromagnética
QUESTÃO 1. (1,0 pt) Baseado nos resultados obtidos na aula prática, preencha a tabela 1!
Tabela 1. Análise do comprimento de onda com melhor faixa de absorção para o azul de metileno – “experimento de varredura espectral”.
	Comprimento de onda λ (nm)
	Absorbância (Abs)
	Transmitância (T)
	400
	0,000
	100
	500
	0,002
	99,6
	600
	0,041
	91,1
	640
	0,070
	84,8
	660
	0,114
	77,3
	680
	0,070
	85,1
	700
	0,008
	98,1
*Para esta varredura, utilizar a solução de azul de metileno na concentração 0,0002 mg/mL.
QUESTÃO 2. (2,0 pts) A partir dos valores apresentados na tabela 1, construa os seguintes gráficos e explique o que aconteceu!
2.1 Gráfico do comprimento de onda λ (para a solução 0,002mg/mL) em função da absorbância (Abs) – “varredura espectral”:
	X
	Y
	Comprimento de onda (λ)
	Absorbância
(Abs)
	400
	0,000
	500
	0,002
	600
	0,041
	640
	0,070
	660
	0,114
	680
	0,070
	700
	0,008
Explicação: De acordo com o conceito de absorbância, é a capacidade dos materiais em absorver radiações em frequências específicas, noutras palavras, toda solução possui uma característica de absorver determinada onda, como se fosse uma espécie de “digital” de cada substância. De modo mais específico, cada composto possui uma capacidade de absorver ao máximo uma cor do espectro, seja visível ou não, e essa faixa de cor do espectro tem determinado comprimento de onda.
Segundo o gráfico, para a solução com concentração de 0,002mg/mL, o comprimento de onda 660nm apresenta a melhor faixa de absorbância, pois os outros apresentam valores com menor taxa de Abs.
2.2 Gráfico do comprimento de onda λ (para a solução 0,002mg/mL) em função da transmitância (T%) – “varredura espectral”:
	X
	Y
	Comprimento de onda (λ)
	Transmitância
(T)
	400
	100
	500
	99,6
	600
	91,1
	640
	84,8
	660
	77,3
	680
	85,1
	700
	98,1
Explicação: De acordo com o conceito de transmitância, é a fração da luz incidente em um comprimento de onda específico que atrevessa uma amostra de matéria. Como a transmitância e a absorbância são grandezas inversamente proporcionais, a transmitância sendo a capacidade de determinado composto transmitir aquele comprimento de onda(luz), existirá uma transmitância onde haverá o máximo “passe” de luz em um composto.
Como a transmitância e absorbância tendem a ser “grandezas inversas”, desse modo, quanto maior a absorbância, menor a transmitância. Logo, para a solução com concentração de 0,002mg/mL, o comprimento de onda 660nm também apresenta a melhor faixa de transmitância, já que todos os outros valores de “X” têm uma taxa de transmitância maior.
2ª PARTE. Análise da concentração do composto (lei de Lambert-Beer)
QUESTÃO 3. (1,0 pt) Baseado nos resultados obtidos na aula prática, preencha a tabela 2!
Tabela 2 (PARTE 2). Análise de diferentes concentrações de azul de metileno em comprimento de onda de melhor faixa de absorção.
	Concentração
(mg/mL)
	Absorbância
(ABS)
	Transmitância
 (T)
	0,0005
	0,082
	83,6
	0,001
	0,183
	69,3
	0,002
	0,387
	44,1
	0,004
	0,732
	19,1
	0,006
	1,110
	8,2
QUESTÃO 4. (2,0 pts) A partir dos valores apresentados na tabela 2, construa os seguintes gráficos e explique o que aconteceu!
4.1 Gráfico das diferentes concentrações de azul de metileno em função da absorbância selecionada:
	X
	Y
	Concentração (mg/mL)
	Absorbância
(Abs)
	0,0005
	0,082
	0,001
	0,183
	0,002
	0,387
	0,004
	0,732
	0,006
	1,110
Explicação: Conforme a lei de Lambert-Beer, relaciona a absorção de luz com as propriedades do material atravessado por esta. Sendo assim, a concentração de uma substância está diretamentente proporcional à absorbância. Ou seja, ao aumentar a quantidade de soluto por mL, aumentará a dificuldade da luz em atravessar a substância, aumentando assim a absorbância.
Pode-se notar no gráfico que a concentração da amostra é diretamente proporcional a absorbância, pois quanto maior a concentração for, maior a absorbância vai ser, como é visto na maior concentração 0,006mg/mL que tem a maior absorbância 1,110.
4.2 Gráfico das diferentes concentrações de azul de metileno em função da transmitância selecionada:
	X
	Y
	Concentração (mg/mL)
	Transmitância
(T)
	0,0005
	83,6
	0,001
	69,3
	0,002
	44,1
	0,004
	19,1
	0,006
	8,2
Explicação: Se determinada concentração aumenta, a capacidade daquela substancia de transmitir ou deixar “passar” a luz é diminuída. Ou seja, aumenta a quantidade de partículas que não deixarão a luz passar com facilidade.
No gráfico é observado que a concentração da amostra é inversamente proporcional a transmitância, pois quanto maior a amostra, menor será o valor da transmitância, como é visto em 0,006mg/mL com a maior concentração e a transmitância com a menor 8,2.
QUESTÃO 5. (4,0 pts) Com auxílio do programa Excel, construir uma curva padrão para as diferentes concentrações de azul de metileno (0,0005; 0,001; 0,002; 0,004; e 0,006 mg/mL) e, após isso, obtenha a equação da reta para calcular a concentração desconhecida de sua respectiva solução (A, B, C ou D).
Nota: fazer a curva padrão (regressão linear) SOMENTE aqui, nesta 5ª questão!!!
Tabela 2 (PARTE 2). Análise de diferentes concentrações de azul de metileno em comprimento de onda de melhor faixa de absorção.
	Concentração (mg/mL)
	Absorbância 
(ABS)
	0,0005
	0,082
	0,001
	0,183
	0,002
	0,387
	0,004
	0,732
	0,006
	1,110
	
	Absorbância 
(ABS)
	Amostra Desconhecida?
(A, B, C, D ou E)
	0,371
R = 0,999699955
Explicação: A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância (A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.
Cálculo da amostra “A”:Amostra Desconhecida “A” corresponde a concentração de 0,00200971922 mg/mL.
y = 185,2x – 0,0012
0,371 = 185,2x – 0,0012
185,2x = 0,371 + 0,0012
x = 0,3722 / 185,2
x = 0,00200971922
Curva Padrão
Absorbância	
5.0000000000000001E-4	1E-3	2E-3	4.0000000000000001E-3	6.0000000000000001E-3	8.2000000000000003E-2	0.183	0.38700000000000001	0.73199999999999998	1.1100000000000001	Concentração
Absorbância
Curva Padrão
Absorbância (Abs)	400	500	600	640	660	680	700	0	2E-3	4.100000	0000000002E-2	7.0000000000000007E-2	0.114	7.0000000000000007E-2	8.0000000000000002E-3	comprimento de onda 
absorvância 
Curva Padrão
Transmitância (T)	400	500	600	640	660	680	700	100	99.6	91.1	84.8	77.3	85.1	98.1	comprimento de onda 
transmitância 
Curva Padrão
Absorbância (Abs)	5.0000000000000001E-4	1E-3	2E-3	4.0000000000000001E-3	6.0000000000000001E-3	8.2000000000000003E-2	0.183	0.38700000000000001	0.73199999999999998	1.1100000000000001	concentração (mg/mL) 
absorbância 
Curva Padrão
Transmitância (T)	5.0000000000000001E-4	1E-3	2E-3	4.0000000000000001E-3	6.0000000000000001E-3	83.6	69.3	44.1	19.100000000000001	8.1999999999999993	concentração (mg/mL) 
transmitância