Microbiologia Básica - Aula prática 3

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Microbiologia
Aula Prática 3
Pesquisa de fungos
Objetivos da aprendizagem:
 Conhecer as características dos principais fungos causadores de infecções 
em seres humanos.
 Compreender o preparo do meio de cultura Ágar Sabouraud- meio para 
crescimento de fungos
 Identificar macroscopicamente e microscopicamente as estruturas de uma 
cultura de fungos.
Presença de Microrganismos no ambiente
Instruções: 
 O meio de cultura Ágar Sabouraud será preparado pelo acadêmico;
 O preparo será de acordo com o rótulo estipulado pelo fabricante;
 Preparo de 200 mL de ágar;
 Importância do ambiente estéril.
Procedimento 1: Preparo do meio Ágar 
Sabouraud
Instruções:
 As lâminas a fresco de fungos corados com lactofenol azul de algodão 
serão confeccionadas pelos acadêmicos;
 Em seguida, cada acadêmico com o auxílio do microscópio óptico 
realizará a visualização e exploração da lâmina;
 Após observar cada imagem, esquematize em seu caderno 
identificando as estruturas observadas, através de um desenho, a 
imagem visualizada no microscópio.
Procedimento 2: Coloração a fresco com Lactofenol
Azul de Algodão
PROCEDIMENTO 1: Preparo de Ágar Sabouraud
 Para o preparo de 200 mL de Ágar Sabouraud:
Desenvolvimento da Prática
Fonte: http:shutterstock.com.br acesso em maio.2019
-Calcular a quantidade de meio para o 
volume final de acordo com as 
orientações do fabricante 
- Pesagem, diluição e aquecimento
- Micro ondas- fusão do ágar 
- Autoclave a 121ºC por 15 min.
Aula Prática 3
Procedimento 1
Vídeo 1
Preparo de Ágar Sabouraud (Pesagem e diluição)
PROCEDIMENTO 1: Preparo de Ágar Sabouraud
 Autoclavação:
- Prevenir a contaminação;
- Utilizar uma rolha de algodão para fechar o meio de cultura
- Autoclave- aquecimento a 121ºC por 15 min.
- Eliminação de células vegetativas e esporos.
Desenvolvimento da Prática
Aula Prática 3
Procedimento 1
Vídeo 2
Preparo de Ágar Sabouraud (Embalagem, Autoclave)
PROCEDIMENTO 1: Preparo de Ágar Sabouraud
 Distribuição do meio nas placas de Petri:
- Cada placa de Petri: Volume de 20 mL;
- Solidificar com a tampa para cima;
- Manter em estufa ou geladeira com o fundo para cima
Desenvolvimento da Prática
Aula Prática 3
Procedimento 1
Vídeo 3
Preparo de Ágar Sabouraud (Distribuição do meio nas placas)
PROCEDIMENTO 2: Coloração a fresco com Lactofenol Azul de Algodão
 Preparar uma suspensão em NaCl 0,85% de Candida spp.;
 Colocar uma gota de lactofenol azul-algodão sobre a lâmina;
 Retirar uma alíquota da suspensão de levedura e colocar sobre a gota 
de azul-algodão e homogeneizar;
 Cobrir com a lamínula.
Desenvolvimento da Prática
Aula Prática 3
Procedimento 2
Vídeo 4
Preparo da lâmina com lactofenol azul-algodão
PROCEDIMENTO 2: Microscopia- observação das leveduras 
 Observar a lâmina no microscópio óptico utilizando os aumentos de 
4x, 10x e 40x.
 Desenhar as estruturas observadas: 
Desenvolvimento da Prática
40X
Aula Prática 3
Procedimento 2
Vídeo 5
Microscopia 
PROCEDIMENTO 2: Inoculação em meio de cultura- estrias por 
esgotamento
 Semear a suspensão microbiana na superfície da placa de Petri 
contendo o meio Ágar Sabouraud
 Utilizando alça bacteriológica (Alça de Níquel) previamente 
esterilizada
Desenvolvimento da Prática
http://bit.ly/2JOzqcq Acesso em maio de 2019.
Estrias por esgotamento
Aula Prática 4
Procedimento 2
Vídeo 6
Semeadura 
Resultados esperados
Procedimento 1: Preparo de meio de cultura 
 Meio de cultura: mistura de nutrientes, incluindo fontes de carbono, 
nitrogênio, sais minerais e água que propiciam o crescimento in vitro 
de microrganismos (Reprodução e sobrevivência).
 Classificação: composição, estado físico (líquido, semi-sólido e 
solidificado), finalidade
 Estéreis
Resolução comentada
Procedimento 1: Ágar Sabouraud- Análise Macroscópica 
Resolução comentada
http:shutterstock.com.br acesso em maio.2019
Procedimento 2: Análise microscópica de estruturas fúngicas
Resolução comentada
http://bit.ly/2EKIsTX acesso em maio de 2019.
http://bit.ly/2EKDZjV acesso em maio de 2019.
Procedimento 2: Análise microscópica de estruturas fúngicas
Resolução comentada
Aspergillus fumigatus
http://bit.ly/2Im7N7o acesso em maio de 2019.
http://bit.ly/2Wmjipc acesso em maio de 2019.
Procedimento 2: Análise microscópica de estruturas fúngicas
Resolução comentada
http://bit.ly/2ww91rp acesso em maio de 2019.
http://bit.ly/2ww9vxC acesso em maio de 2019.
Penicillium spp.