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Questões de aprofundamento de conteúdo
Aula cultura de Secreção vaginal e uretral
1. Porque a coleta para pesquisa de Neisseria gonorrhoeae é tão importante para a
determinação do seu diagnóstico laboratorial? Como deve ser mantida esta
amostra?
Porque o gonococo é sensível a dessecação e não suporta bem a refrigeração.
Deve ser mantida em meio de transporte adequado ou processado logo após a sua
coleta
Deve ser mantida no meio de transporte Amies - contém fosfatos inorgânicos e carvão
ativado além de solução salina balanceada. Essas características deram ao meio uma
eficácia superior ao meio de Stuart. Prazo máximo 8 horas
Agar Thayer-Martin modificado
2. Qual o meio de transporte adequado para coleta de Neisseria gonorrhoeae e por quê?
Amies - contém fosfatos inorgânicos e carvão ativado além de solução salina balanceada.
Essas características deram ao meio uma eficácia superior ao meio de Stuart. Prazo
máximo 8 horas
3. O que é observado na bacterioscopia do exame direto a fresco de uma cultura de
secreção vaginal e uretral?
Visualização de Trichomonas vaginalis e candida spp.
4. Como deve ser feita a bacterioscopia pelo método de Gram de uma secreção vaginal?
Devem ser preparados logo após a coleta do exsudato, usando um swab ou alça
bacteriológica.
Deve-se girar o swab sobre a lâmina, em vez de esfregá-la, o que permite a distribuição
das células sem que se rompam.
Devem ser secados naturalmente e fixados imediatamente pelo calor e corados pelo
método de Gram.
5. Como deve ser relatado o achado bacterioscópico de uma cultura de secreção vaginal?
Quantificar no material analisado a presença ou ausência de diplococos Gram-negativos
com características de Neisseria em:
raros (+)
poucos (++)
moderados (+++)
muitos (++++)
descrever se o micro-organismo são extra-celulares ou intra-celulares, quantidade de
neutrófilos e de células epiteliais.
Observação: No inicio da doença intracelular, no decorrer extracelular.
6. Quais os cinco requisitos básicos que devem ser observados para o isolamento de
Neisseria gonorrhoeae?
1. Semeadura imediata no meio de transporte ou Thayer Martin modificado ;
2. Atmosfera de CO2 em torno de 5 a 10%;
3. Teor de umidade em 90%;
4. Incubação a 35°C ± 2 graus;
5. Meios adequados.
7. O meio Agar Thayer- Martin modificado é o utilizado para isolamento de Neisseria
gonorrhoeae. Quais as suas características?
Ágar Thayer- Martin modificado
- Base Ágar GC + 5 a 10% de sangue de carneiro + isovitalex + antibióticos (vancomicina,
colistina, nistatina e trimpetoprim)
Base agar GC, 5 a 10 % de sangue de carneiro, isovitalex e VCNT (Vancomicina, Colistina,
Nistatina e trimetoprim)
- isovitalex (suplemento de enriquecimento)
Contém vitamina B12, l-glutamina, adenina, guanina, ac. Paraminobenzóico, l-cistina,
dextrose, nitrato férrico, tiamina, cisteína, cocarboxilase.
8. Quais as provas que determinam o diagnóstico presuntivo de Neisseria gonorrhoeae?
Diplococos reniformes gram-negativos, intra ou extra-celulares, oxidase positiva, catalase
positiva
9. Quais as provas que determinam o diagnóstico confirmatório?
Semeio em Agar chocolate enriquecido: colônias pequenas e brilhantes, viscosas e
fortemente aderidas ao meio
Oxidação dos açúcares (CTA)
10. Quais as características do meio Cystine Tripcase agar (CTA)? O que ele identifica?
Concentração dos açúcares por tubo 1%
Meio semi sólido:
contendo 0,25 % de ágar, cistina, peptona e vermelho de fenol como indicador.
Neisseria gonorrhoeae oxida só glicose
11. Como são identificadas as colônias de Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma
hominis no meio agar A-7 diferencial de Shepard modificado por Silva – Mycogen?
Microscopia:
Colocar a placa invertida no platô do microscópio.
Utilizar a objetiva de 10X
Identificar as colônias:
M. hominis - forma de ovo frito
U. urealyticum - granulações escuras com aspecto de “bom-bril” .
Fazer a contagem (varredura).
Contagem igual ou superior a 50 colônias equivale a 105 UFC/ mL.
12. Quais os substratos específicos para Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma
hominis?
Fatores de crescimento, para Ureaplasma urealyticum é necessária a uréia, já para o
Mycoplasma hominis é requerido a uréia.
13. Quais as características gerais de Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma hominis?
● São membros da classe Mollicutes, família Mycoplasmataceae
● É uma das menores bactérias conhecidas que causam doenças em humanos
● Não possuem parede celular
● Contém colesterol na composição de sua membrana
● Tem forma cocóide
● Causa de UNG
● a Ureia é fator de crescimento para U. urealyticum e a arginina pro M.hominis
14. Quais as características gerais da Chlamydia trachomatis?
1. São intracelulares obrigatórios
2. Forma ovóide que varia em tamanho durante o ciclo reprodutivo
3. Possui estrutura semelhante às de bactérias Gram-negativas
4. A parede celular não contém ácido murâmico
5. Agente etiológico da Uretrite ou cervicite inespecífica, ou Uretrite não gonocócica
(UNG)
6. Adesinas fixam-se a receptores nas membranas celulares do hospedeiro
7. Têm um ciclo vital exclusivo
15. Determine o ciclo evolutivo da Chlamydia trachomatis?
1. O corpo elementar é captado por fagocitose nas células suscetíveis do hospedeiro
2. A partícula elementar reorganiza-se em um corpo reticulado maior, não infeccioso
3. O corpo reticulado divide-se nitidamente por fissão binária, formando corpos de
inclusão
4. Após 48 horas, a multiplicação cessa e os corpos reticulados condensam-se
tornando-se novos corpos elementares infecciosos
5. Os corpos elementares são, então liberados da célula por citólise, terminando na
morte da célula do hospedeiro
16. Quais as diferenças básicas do corpúsculo elementar e do corpúsculo reticular?
Corpúsculo elementar: 300 a 400nm, forma infectante, resiste ao meio extracelular
Corpúsculo reticular: 800-1000nm, forma replicativa, metabolicamente ativa e não
infectante, intracelular
17. Como é feito o diagnóstico laboratorial para pesquisa de Chlamydia trachomatis?
● cultura: Isolamento em cultura de células McCoy (padrão ouro)
A cultura é realizada com inoculação de amostras em monocamadas de células de
McCoy Chlamydia trachomatis cresce e forma inclusões intracitoplasmáticas que
são visualizadas 48h a 72h após a incubação
● imunofluorescência direta (DFA) - corpos elementares de cor verde brilhante, em
forma de círculo perfeitos
Positivo: 5 ou mais corpúsculos fluorescente por esfregaço
Indeterminado: Fluorescência sem corpúsculo perfeitos
Negativo: 50 células epiteliais sem corpúsculos fluorescentes
● PCR
● Teste rápido Chlamydia (Imuno rápido Chlamydia) - É um teste imunocromatográfico
de detecção de antígeno utilizando anticorpos específicos (um conjugado a um
corante e outro ligado a fase sólida). Princípio: após a extração da amostra se a
Chlamydia trachomatis (antígeno) estiver presente, se ligará ao conjugado anticorpo
corante formando um complexo antígeno-anticorpo. Este complexo flui pela área
absorvente da placa teste indo se ligar ao anticorpo na área da reação.
c
* De acordo com o Guia da Prática Clinica, publicado pelo CDC
Um diagnóstico é definitivo quando a cultura é positiva ou um teste não-cultural é
confirmado por um segundo teste não cultural. A associação de duas técnicas
não-culturais positivas é aceita como padrão-ouro expandido.
18. Quais as características gerais de Haemophilus ducreyi?
● Cocobacilos gram-negativos (variável) pleomórficos em cadeias ou cardume de
peixe
● Sensíveis a dessecação
● Requer fator X
● Anaeróbico facultativo, intracelular, com dimensões de um a 2μm por 0,5μm, com
extremidades arredondadas
19. Como é feito o diagnóstico laboratorial de Haemophilus ducreyi? Especifique a coleta,
o Gram, o meio de cultura e a incubação.
Coleta: raspado da lesão ou da secreção
Gram: bacilos gram-negativos variáveis em cadeiras ou cardume de peixe
Cultura: ágar chocolate acrescido de 1% de Iso VitaleX ou fator V e X líquido e 3ug/mL de
vancomicina. 35+-7ºC por período de até 7 dias, crescimento estimulado por 5-10% de
CO2
Incubação: períodode 2 a 5 dias
Cerca de 2/3 dos isolados de Haemophilus ducreyi produzem ß- lactamase.
A Detecção de Haemophilus ducreyi também pode ser realizada por PCR.
20. Qual a principal consequência da infecção por Haemophilus ducreyi?
Formação dos bubões, úlcera de cranco mole
21. Como é feito o seu diagnóstico laboratorial de Trichomonas vaginalis?
Exame direto a fresco: visualização de trofozoítos móveis, coloração de gram, exame
colpocitológico pelo papanicolau, isolamento em meios de cultura específicos (Roiron,
Kupferberf, Diamond), pesquisa pela metodologia de sondas de DNA
23. Quais as características gerais de Candida albicans?
● Levedura
● Dimórfica podendo formar pseudomicélio ou um micélio verdadeiro
● Agente etiológico da candidíase vulvo-vaginal (80-92%)
● Cresce no pH normal da vagina
● Não é uma doença de transmissão exclusivamente sexual
24. Como é feito o seu diagnóstico laboratorial?
● Exame direto a fresco: KOH a 10%
● Cultura: Meio padrão Ágar Sabouraud
● Identificação de espécies: CHROMagar CANDIDA
26. Quais as Características gerais de Gardnerella vaginalis?
● Cocobacilo pleomórfico
● Gram-negativo a Gram-variável
● Anaeróbio facultativo
● Parte da microbiota vaginal normal de 20 a 40%
● Desequilíbrio dessa microbiota, ocorre um predomínio dessa bactéria (segundo
alguns autores em associação com outros microrganismos como Bacteróides,
Mobiluncus, Mycoplasmas etc
● Agente etiológico da vaginose bacteriana (vaginite inespecífica)
27. Como é feito o seu diagnóstico laboratorial?
Microscopia exame direto ou esfregaços corados. Aparecimento de ”Clue cell”
(células-guia).
Cultura - usa-se o ágar sangue humano que é um meio semelhante ao Thayer-Martin sem
os inibidores (vancomicina, colistina, nistatina) ou agar vaginalis. A incubação deve ser a
35oC ± 2 graus em um ambiente de 5% de CO2 por um período e 48 horas. As colônias se
apresentam pequenas e hemolíticas (hemolisam sangue humano mas não sangue de
carneiro).
28. Qual a diferença entre vaginose e vaginite?
Vaginite verdadeira infecção dos tecidos vaginais.
Vaginose as lesões dos tecidos não existem ou são muito discretas, caracterizando-se
apenas pelo rompimento do equilíbrio microbiano vaginal normal.
29. Qual o agente etiológico da vaginose bacteriana?
Gardnerella vaginalis
30. Quais os agentes etiológicos da vaginite?
Trichomonas vaginalis, Candida albicans
31. Qual o agente etiológico do cancro mole?
Haemophilus ducreyi
32. Qual a bactéria que é transmitida sexualmente e exala um odor de peixe cru?
Gardnerella vaginalis
33. Qual o agente etiológico do granuloma venéreo ou donovanose ?
Klebsiella granulomatis
34. Como é feito o diagnóstico da donovanose?
A K. granulomatis é de difícil isolamento em meios de cultura. Dessa forma, firma-se o
diagnóstico através obtenção de material da úlcera e visualização dos corpúsculos de
Donovan, que correspondem às bactérias no interior dos macrofagos.
35. Qual a bactéria que é transmitida sexualmente e forma ”Clue cell” ?
Gardnerella vaginalis
36. Quais dos agentes etiológicos das ISTs que é aeróbio?
Neisseria gonorrhoeae