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Guia de Interpretação TM TM3M Petrifilm Placa para Contagem de Aeróbios TM TM3M Petrifilm Placa para Contagem de Aeróbios TM TMEste guia apresenta os resultados das placas 3M Petrifilm para Contagem de Aeróbios. Para mais informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda. TM TMA Placa 3M Petrifilm para Contagem de Aeróbios (AC) é um sistema de meio de cultura pronto para uso, que contém os nutrientes do Método Padrão, um agente geleificante solúvel em água fria, e um indicador que facilita a enumeração das colônias. As placas TM TM 3M Petrifilm AC são utilizadas para enumeração de bactérias aeróbias. Contagem de Bactérias Aeróbias = 152 Um corante indicador vermelho na placa dá cor às colônias. Conte todas as colônias vermelhas, independentemente de seu tamanho ou intensidade de cor. 1 Contagem = 0 TM TM A interpretação da placa 3M Petrifilm AC é muito TM TM fácil. A figura 2 mostra uma placa 3M Petrifilm AC sem colônias. Contagem = 16 TM TMA figura 3 mostra uma placa 3M Petrifilm AC com algumas colônias. Contagem = 143 TM TMA faixa ideal de contagem na placa 3M Petrifilm AC é de 25 a 250 colônias. Veja a figura 4. Contagem Estimada = 560 Quando o número de colônias é superior a 250, como na figura 5, a contagem deve ser estimada. Determine 2o número médio de colônias em um quadrado (1 cm ) e multiplique por 20 para obter a contagem total por TM TMplaca. A área inoculada em uma placa 3M Petrifilm 2AC é de, aproximadamente, 20 cm . 2 3 54 3Contagem = INC (Contagem estimada =10 ) TM TMA figura 6 mostra uma placa 3M Petrifilm AC com um número incontável de colônias. 3Contagem = INC (Contagem estimada = 10 ) Ocasionalmente, pode haver uma distribuição irregular de colônias, como mostrado na figura 8. Neste caso, o resultado também deve ser considerado incontável. 5Contagem = INC (Contagem estimada = 10 ) Quando as contagens são muito altas, toda a área de crescimento fica avermelhada, como mostrado na figura 7. Colônias individuais podem ser observadas nas bordas da área de crescimento. Este resultado deve ser considerado incontável. 7Contagem = INC (Contagem estimada = 10 ) TM TMNa figura 9, as colônias na placa 3M Petrifilm AC parecem contáveis à primeira vista. No entanto, um exame mais cuidadoso das bordas da placa mostra uma concentração muito elevada de colônias. Este INC (Incontável) Para obter uma contagem mais precisa, dilua mais a amostra. resultado também deve ser considerado incontável. 6 98 7 Liquefação do Gel e Partículas de Alimentos Contagem estimada = 160 Algumas espécies bacterianas liquefazem o gel das TM TMplacas 3M Petrifilm AC, como mostrado na figura 10. Quando isto ocorrer, determine a média de contagem em quadrados não afetados e estime a contagem total. Manchas vermelhas na área afetada não devem ser contadas. Contagem = 83 TM Devido ao fato de que as colônias na placa 3M TMPetrifilm AC são vermelhas, é fácil distingui-las das partículas de alimentos, que são opacas e com formas irregulares. 10 11 TM TM3M Petrifilm Placa para Contagem de Aeróbios Armazene os pacotes fechados a < 8°C (<46°F). Utilize-os antes do prazo de validade impresso nos pacotes. Em áreas de alta umidade recomenda-se deixar que os pacotes atinjam a temperatura Para fechar os pacotes abertos, dobre a 1 ambiente antes de serem abertos. Armazene os pacotes vedados a 25°C extremidade e vede com fita adesiva.2 (77°F) e umidade relativa de 50%. Não refrigere os pacotes abertos. Use as TM TMplacas 3M Petrifilm em até um mês, 3 após abertos. Prepare uma diluição 1:10 (ou maior) do alimento. Pese ou pipete o alimento em um recipiente apropriado como um saco de stomacher, frasco de diluição ou outro Adicione a quantidade necessária de um 4 recipiente estéril. dos seguintes diluentes estéreis: Tampão fosfato Butterfield (Tampão Fosfato IDF, 0,0425 g/L de KH PO ajustado ao pH 7,2), 2 4 água peptonada 0,1%, diluente salina peptonada (método ISO 6579), solução salina (0,85 – 0,90%), caldo letheen sem Misture ou homogenize a amostra, 5 bissulfato, ou água destilada. utilizando métodos de rotina.6 TM TMColoque a placa 3M Petrifilm em uma Com uma pipeta posicionada superfície plana. Levante o filme superior.7 TM perpendicularmente à placa 3M TMPetrifilm , coloque 1 ml da amostra no Solte o filme superior, deixando-o cair8 centro do filme inferior. . Instruções de Uso Armazenamento Preparo da Amostra Não deslize o filme.9 Inoculação Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, LIMITAÇÕES DE GARANTIA, LIMITAÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE, consulte a bula do produto. Não utilize tampões que contenham citrato, bissulfito ou tiossulfato, pois eles podem inibir o crescimento. Ajuste o pH da amostra diluída entre 6,6 e 7,2: • para produtos ácidos, use NaOH 1N • para produtos alcalinos, use HCl 1N Com o lado côncavo para baixo, coloque o difusor no filme superior Delicadamente pressione o difusor 10 sobre o inóculo. para distribuir o inóculo na área circular. Não gire nem arraste o Retire o difusor. Espere um minuto, 11 difusor. no mínimo, para o gel solidificar.12 Incubação Interpretação Incube as placas com o lado transparente para cima, em pilhas de até 20 placas. Pode ser necessário umidificar a estufa para minimizar a TM TMAs placas 3M Petrifilm podem 13 perda de umidade. ser contadas em um contador de colônias comum ou outro sistema de amplificação. Consulte o Guia de Interpretação para a leitura dos As colônias podem ser isoladas para 14 resultados. identificação futura. Levante o filme 15 superior e retire a colônia do gel. O tempo e temperatura de incubação variam de acordo com o método. Os métodos aprovados mais comuns são: Método Oficial AOAC® 986.33 & 989.10• (leite e produtos lácteos) Incube 48h ± 3h a 32°C ± 1°C Método Oficial AOAC® 990.12• Incube 48h ± 3h a 35°C ± 1°C Método Validado AFNOR 3M 01/1-09/89• Lado LISO Incube 72h ± 3h a 30°C ± 1°C Lado com REBAIXO Food Safety www.3mfoodsafety.com.br