PROTOCOLO-5-Sistema-CHEF-DRIII-PFGE

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PROTOCOLO 5: Instruções para o uso do sistema de PFGE CHEF-DRIII (BioRad) 
 
1- Antes de ligar o aparelho certifique-se: 
a) De que o aparelho esteja conectado à rede elétrica na voltagem correta e no 
sistema de proteção elétrica (nobreak) adequado; 
b) O ar condicionado da sala do equipamento esteja regulado entre 18-20ºC; 
c) O tampão de eletroforese adequado (TBE ou TAE) deve já estar preparado, 
diluído e, de preferência, resfriado em geladeira; 
d) A cuba de eletroforese esteja nivelada; 
e) Nenhuma mangueira esteja dobrada ou desconectada do sistema; 
2- Abra a tampa da cuba e despeje o tampão (+/- 2,2 litros) com cuidado, evitando 
respingar nos plugues dos eletrodos; 
3- Ligue os componentes do sistema na seguinte ordem: 1º fonte (CPU), 2º bomba 
(Pump) e 3º unidade esfriadora (Cooler); 
4- Ajuste a velocidade da bomba para “70”; 
5- Verifique se o tampão está circulando e se não há bolhas nas mangueiras. Em 
caso de bolhas, movimente as mangueiras até retirá-las; 
6- Ajuste a temperatura do tampão para 14ºC na interface da Fonte (CPU) e 
aguarde a temperatura do tampão se estabilizar; 
7- O gel de agarose deve ser preparado utilizando o molde e a base (preta com 
quatro furos) em uma superfície nivelada; 
8- Depositar, com cuidado, o gel de agarose (aderido à base) no centro da cuba, 
certificando-se de que não haja “rebarbas” de agarose que podem entupir o 
sistema; 
9- Ajustar os parâmetros da corrida na interface da fonte (CPU); 
10- Ao iniciar a corrida verificar a corrente, que deve estar entre 80-150mA. Em 
caso de valores diferentes destes, o tampão deverá ser refeito; 
11- Ao fim da corrida o sistema deve ser desligado na sequencia inversa: 1º 
unidade esfriadora (Cooler), 2º bomba (Pump) e 3º Fonte (CPU); 
12- A seguir, o tampão deve ser drenado com o auxílio de uma mangueira; e os 
eletrodos lavados com H2O destilada, também retirada por meio do dreno; 
13- Deixar a tampa da cuba aberta para secar completamente os eletrodos.