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Enzimas Prof. Marta Citelli Definição Proteínas especializadas que catalisam as reações biológicas e não são consumidas e nem modificadas durante a reação que catalisam Promovem alterações nos alimentos – benéficas e prejudiciais Catalisador – aumenta velocidade das reações Diminui a energia de ativação São essenciais para as reações químicas acontecerem Para que a reação aconteça, os substratos devem alcançar um nível energético maior que seu estado habitual: estado de transição ou complexo ativado Características gerais Cofator X coenzima X grupo prostético mol orgânicas Minerais 4 Características gerais Proteínas globulares de diferentes tamanhos A atividade catalítica depende da integridade da conformação nativa – desnaturação = perda de atividade Alta especificidade pelo substrato Sítio ativo – responsável pela ligação da enzima ao substrato – determina a especificidade da enzima pelo substrato Atuam em pequenas concentrações e em condições suaves de pH e temperatura Fonte de enzimas – tecidos animais (renina (produção de queijos), lipases pancreáticas) e vegetais (bromelina-abacaxi, papaína-mamão, ficina-figo) e cultura de microrganismos (lipase – Aspergillus niger) REAÇÃO ENZIMÁTICA SUBSTRATO PRODUTO ENZIMA ENZIMA Características gerais 8 Características gerais 9 Características gerais 10 Características gerais 11 Características gerais 12 A ligação do substrato altera a conformação da enzima 13 Classificação das enzimas Local de ação: Intracelulares – podem ser liberadas com o rompimento da célula Extracelulares – secretadas pelas células –maior parte das enzimas preparadas em escala industrial Ex: são usados fungos e bactérias que tem mecanismos de aumentar a produção de uma determinada enzima- que depois será usada na industrialização de alimentos Fatores que influenciam a atividade enzimática pH As enzimas apresentam um pH ótimo de atividade A ionização de aa pode provocar modificações na conformação da enzima Ligeiras mudanças de pH podem levar a desnaturação da enzima Temperatura A elevação da temperatura acelera as reações químicas Desnaturação pelo calor – perda da atividade catalítica As modificações nas enzimas são facilmente determinadas analiticamente – as enzimas são apropriadas como indicador de tratamentos térmicos – pasteurização – peroxidase do leite Leite=tratamento UHT Enzimas importantes em alimentos Carboidrases Proteases Lipases Oxidoredutases Enzimas importantes em alimentos Carboidrases Isomerases Amilases Pectinases Celulases e hemicelulases Lactases Invertases Enzimas importantes em alimentos - carboidrases Amilases Hidrolisam o amido em açúcares solúveis α-amilase – atua sobre ligações glicosídicas α-1,4 produzindo dextrinas (+ glicose e maltose) β-amilases – dextrina em maltose Importante enzima na panificação (farinha de trigo) Farinha de qualidade – contém boa combinação das amilases Permitem a continuidade da fermentação na produção de pães Teor de α-amilase na farinha é influenciado pelo fator sazonal – complementação da farinha com enzimas’ Ramificação Linar Glicose isomerase Transforma glicose em frutose (isômeros ópticos) Empregada para potencializar o sabor doce (2X mais doce que a glicose) poder edulcorante Preparação de xaropes de amido ricos em frutose Enzimas importantes em alimentos - carboidrases cetona Aldeido Frutose industrializada: comer com moderação, associado com doenças como diabetes, resistência a insulina Invertase Hidrólise da sacarose – glicose + frutose Açúcar invertido – reação de Maillard Poder adoçante maior que a sacarose; diabéticos Enzimas importantes em alimentos - carboidrases Pectinases – enzimas capazes de reconhecer ligações glicosídicas do tipo α-1,4 entre unidades de ácido galacturônico Degradam substâncias pécticas – hidrólise das ligações glicosídicas de um ácido galacturônico e outro Substâncias pécticas: Protopectina Ácido péctico Pectina Clarificação de sucos de frutas – substâncias pécticas são responsáveis pela consistência, turbidez e viscosidade dos sucos de frutas Ex: suco de maça feita em casa fica espessa, na indústria isso é indesejável então é acrescentado pectinases, enzimas que degradam substancias pécticas que faz o suco ficar mais fluido Pectinases –reduz viscosidade e aumenta rendimento dos sucos – aparência cristalina e redução em até 50% o tempo de filtração Enzimas importantes em alimentos - carboidrases Agem como fibras pois não digerimos e funções como fibras goiaba Enzimas importantes em alimentos - carboidrases Amadurecimento dos frutos – protopectina (forma insolúvel) fruta verde = firmeza do fruto Hidrólise da protopectina gerando pectina e ácido péctico = amadurecimento Fruto verde amadurecimento maduro Protopectina Insolúvel Fruto verde Firmeza Hidrólise progressiva de protopectina Amolecimento do fruto Formação de pectina e ácido péctico Proteases Hidrolisam as ligações peptídicas das proteínas Ex: hidrólise parcial do glúten = massa com textura macia Leite – coalho (quimosina e a pepsina) na fabricação de laticínios Flor do cardo Proteases da carne – intervém no processo de maturação (naturalmente, após o abate tem o rigor mortis – musculo enrigessido, o glicogênio é consumido em reações anaeróbicas produzindo o acido lático que irão ativar proteases que promeve amaciamento da carne- descontraindo o músculo Papaína (mamão), bromelina (abacaxi) e ficina (figo) Ex: ao preparar uma carne dura de segunda, colocar um pouco do suco de mamão ou de abacaxi ou o figo esmagado por 10min dá maciez a carne Amaciante de carne – base de papaína, mas não é bom usar devido a outros ingredientes ruins como o glutamato de sódio Enzimas importantes em alimentos - Proteases Proteases De origem vegetal – papaína, bromelina e ficina De origem animal – renina, pepsina, tripsina, quimotripsina, catepsinas e calpaínas De origem microbiana – 40% das enzimas comerciais Enzimas importantes em alimentos - Proteases Lipases Hidrolisam as ligações éster dos TAG Produção de queijos – intensificam os aromas AGCC – aromas característicos de alimentos (ex: queijo) Enzimas importantes em alimentos - Lipases Lipases Responsáveis por deterioração de alimentos - rancidez hidrolítica (hidrólise de triglicerídeo e liberação de ácidos graxos de cadeia curta) No leite produzem ácido butírico (4C), capróico (6C) e caprílico (8C) Lipases fúngicas (Penicillium roquefortii, P. camembertii) Grãos, farinhas e farelos também sofrem rancidez hidrolítica pela presença natural de lipases Formação de mono e diglicerídeos pela ação de lipases na panificação – ação emulsificante Enzimas importantes em alimentos - Lipases Oxidoredutases Polifenol-oxidases Peroxidases Lipoxigenases Catalases Glicose-oxidases Xantina-oxidases Ascorbato-oxidases Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Inativar essa enzima evita a produção de ranço oxidativo As vezes a indústria adicionam mais lipoxigenase para que esse efeito de branqueamento seja ainda maior Fenolases – polifenol oxidases Atuam oxidando os compostos fenólicos (utilizando o oxigênio) – produzindo compostos pigmentados escurecimento enzimático Compostos fenólicos – relação com mecanismos de defesa nos tecidos vegetais contra patógenos e injúrias São benéficos para nós pois geram mecanismos de defesas nos individuos Responsáveis pelo escurecimento enzimático de frutas e hortaliças – são compostos oxidantes Ao ferir o alimento, o oxigênio interage com as enzimas que gera compostos pigmentados Contato substrato e enzima – fenolase oxida os compostos fenólicos – o-quinona – condensação – melanina Pode ser desejável – folhas de chá, ameixas secas Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Escurecimento enzimático Frutas e vegetais claros tornam-se escurecidos Compostos fenólicos presentes nos tecidos vegetaisÁcido clorogênico – maçã, batata, pera, café Tirosina – alface, cogumelo, batata Enzima fenolase (polifenol oxidase) – citoplasma das células Tecido das frutas e vegetais danificados (corte, retirada da casca, impacto, ataque de fungos) – contato substrato e enzima Fenolase oxida compostos fenólicos 0-quinona – condensação – melanina Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Escurecimento enzimático Perda do valor comercial – 50% da perda de frutas tropicais é devida à ação da enzima polifenol oxidase Perda nutricional - o-quinonas interagem com grupos amina e tiol, reduzindo a disponibilidade da lisina, metionina e tiamina Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Controle do escurecimento enzimático Condição para que ocorra a reação: enzima, substrato, oxigênio Refrigeração (0-4oC) – diminui energia cinética das moléculas, dificulta o acoplamento enzim-substrato Retarda o escurecimento Tratamento térmico – branqueamento – inativação da enzima Redução do contato com oxigênio – imersão em água(ex batata doce), embalagens com atmosfera modificada Agentes químicos Redutores: sulfitos, ácido ascórbico(vit C) – reduzem as o-quinonas a difenóis (sem coloração) Acidulantes: ácido cítrico, málico e fosfórico – mantém o pH do meio abaixo do valor ótimo da ação da fenolase Ex: Suco de laranja na salada de frutas evita o escurecimento enzimático – diminiu a velocidade das reações das polinol oxidases e ac ascórbico que reduz as o-quinonas fazendo que fiquem menos escuras Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Peroxidases Presente em abundância em tecidos vegetais Catalisa a oxidação de substratos orgânicos – provocada pelo peróxido de hidrogênio Proteção dos tecidos contra o efeito tóxico de H2O2 Responsável pelo off-flavor, mudança na cor (descoloração de carotenóides e antocianinas) e no teor de vitaminas de alimentos Maior resistência térmica – indicador para controle da inativação total de todas as enzimas – ex: branqueamento Controle da pasteurização do leite Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases Lipoxigenase Catalisam a oxidação de AG insaturados Efeito prejudicial nos alimentos – rancificação oxidativa dos lipídios Catalisam a oxidação de carotenóides e clorofila – formação de produto incolor – branqueamento de farinhas Enzimas importantes em alimentos - Oxidoredutases
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