Análise de Eletroferograma

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LABORATÓRIO DE GENÉTICA FORENSE 
ANÁLISE DE ELETROFEROGRAMA 
 
ANÁLISE DE ELETROFEROGRAMA 
 
 
 
Os eletroferogramas são representações gráficas dos dados recebidos de um 
equipamento de sequenciamento de DNA e são conhecidos como cromatogramas. O 
sequenciamento de DNA faz parte da era das novas tecnologias em Biologia Molecular, 
que vêm permitindo avanços incríveis na compreensão de doenças. Consiste em uma 
técnica capaz de determinar a sequência exata de nucleotídeos em uma molécula de 
DNA (ácido desoxirribonucleico). Isso significa que, ao sequenciar um fragmento de 
DNA, será possível conhecer a sequência em que as quatro bases nucleotídicas (adenina, 
guanina, citosina e timina) ocorrem dentro dessa molécula de ácido nucleico. 
Por muito tempo, o DNA foi considerado uma molécula difícil de manipular. No 
entanto, em meados da década de 1980, Frederick Sanger e seus colaboradores 
conseguiram padronizar um método simples e relativamente rápido para sequenciar 
qualquer fragmento de DNA purificado. O sequenciamento de Sanger, também 
conhecido por método de didesóxi, foi utilizado para sequenciar diversos genomas, 
como os de E. coli, mosca-da-fruta, nematódeos, camundongos e humanos. 
Atualmente, com o avanço da tecnologia, novos métodos, mais baratos, eficazes 
e rápidos, estão disponíveis para sequenciar DNA. O mais recente é o sequenciamento 
de nova geração, também chamado de sequenciamento de segunda geração ou, 
ainda, Next-Generation Sequencing (NGS). Por meio dele, é possível executar o 
sequenciamento de um genoma inteiro em questão de dias. Sua velocidade, capacidade 
de gerar dados em larga escala e precisão, a um custo inferior aos métodos tradicionais, 
ganha cada vez mais espaço. Seu princípio básico está em sequenciar várias diferentes 
moléculas e fragmentos provenientes do mesmo genoma, diferentemente das 
metodologias de Sanger, em que uma única sequência de DNA, oriunda de um trecho 
específico, é obtida em cada reação. Todo esse avanço se deve à integração de 
ferramentas de nanotecnologia, robótica e informática em aparelhos de alto 
desempenho. 
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 A visualização dos registros gráficos ou eletroferogramas das sequências de DNA 
pode ser realizada com o programa Chromas 2.6.6, que é um visualizador gratuito de 
rastreamento para projetos simples de sequenciamento de DNA que não requerem a 
montagem de várias sequências. As imagens gráficas são formadas por picos coloridos 
emitidos durante o sequenciamento. Cada cor representa uma base nitrogenada: A – 
verde, T – vermelho, C – azul e G – preto, conforme mostrado na Figura 1. 
 
 
Figura 1 – O eletroferograma é a interpretação gráfica de uma sequência de DNA representada por picos luminosos. 
(Fonte: ESTRELA, 2018) 
 
Durante a análise do eletroferograma, é importante observar a altura e o 
espaçamento dos picos para verificar a qualidade da sequência e atestar a presença de 
mutações. Outro aspecto valioso na análise é a confiabilidade da sequência obtida, que 
pode ser medida por meio dos quadrados acima das bases nitrogenadas no gráfico. Um 
quadrado que esteja completamente preenchido vai representar uma chance de erro 
de 1 em 1.000, ou seja, a base que está representada no eletroferograma é muito 
confiável. Por outro lado, um quadrado vazio ou parcialmente preenchido significa baixa 
confiabilidade; podem ser picos oriundos de erros no sequenciamento ou que 
representam impurezas. 
É importante ressaltar que qualquer dúvida sobre a confiabilidade de uma 
sequência implica na repetição de todo o sequenciamento, sendo relevante também 
destacar a necessidade de realização de experimentos-piloto, com a repetição do 
sequenciamento nos sentidos direto e reverso, para certificar a confiabilidade e 
repetitividade dos resultados. 
 
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A Figura 2 apresenta dois exemplos de resultados de sequenciamento de 
qualidade boa e ruim, respectivamente. 
 
 
Figura 2 – Eletroferograma de sequência de DNA exemplificando reações de sequenciamento de boa qualidade (A) e 
má qualidade (B). (Fonte: Pixabay) 
 
A análise de sequências de DNA revolucionou o estudo de várias áreas de 
pesquisa, fornecendo para a ciência uma grande quantidade de informações sobre o 
papel da herança na suscetibilidade a doenças e em resposta a influências ambientais, 
abrindo novas perspectivas para a medicina, com base nas características genéticas de 
cada indivíduo, criando um vasto potencial para diagnósticos e terapias. 
A Genética Forense é uma das áreas que sofreu uma revolução com o avanço do 
sequenciamento e que vem crescendo muito nos últimos anos. Ela tem uma função 
importante em disputas legais, podendo ser aplicada na investigação de cenas de crimes 
para a identificação de criminosos, na identificação de restos humanos e em testes de 
paternidade. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
 
 
BROWN, T. A. Genética: um enfoque molecular. 3. ed. Rio de Janeiro: Guanabara 
Koogan, 1999. 
 
BRUNA, G. B. Biologia molecular e biotecnologia. Porto Alegre: SAGAH, 2018. 
 
ESTRELA, C. Metodologia científica: ciência, ensino, pesquisa. 3. ed. Porto Alegre: 
Artes Médicas, 2018. 
 
FERREIRA, M. E.; NETO, C. R. B. A importância da pesquisa genômica e o 
sequenciamento de DNA. ISSN 01020099 – Brasília, 2003. 
 
HEATHER, J. M.; CHAIN, B. The sequence of sequencers: The history of sequencing 
DNA. Genomics, 107(1), 2016. 
 
KLUG, W. S. et al. Conceitos de Genética. Porto Alegre: ArtMed, 2010. 
 
MENCK, C. M. Genética molecular básica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017. 
 
TURCHETTO-ZOLET, A. C.; et al. Guia prático para estudos filogeográficos. Ribeirão 
Preto: Editora SBG, 2013. 
 
 
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