CQM Pirogênios

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ANÁLISE DE VITAMINAS,
PIRÔGENOS IN VITRO E
IN VIVO. 
MSc. Kamila Leal Correa
Controle de qualidade microbiológico
Definição: são compostos orgânicos não sintetizados
pelo organismo, sendo incorporados através da
alimentação;
CQ:
-Evitar ou reduzir a oxidação;
-Remover traços de metais;
-Evitar a luz e Manter a temperatura;
-Reduzir o contato com oxigênio;
-Usar antioxidantes;
Análise de vitaminas
Os pirogênios são substâncias
orgânicas responsáveis por muitas
das reações febris (ex: injetáveis);
São substâncias capazes de induzir
elevações térmicas;
O pirogênio endógeno é produzido
pelo próprio organismo em
resposta ao pirogênio exógeno. 
Pirogênios In vivo
Os pirogênios exógenos são
provenientes de bactérias, fungos e
vírus (endotoxinas bacterianas);
O teste de pirogênio determina a
presença ou ausência de pirogênios em
formas parenterais;
FDA, USP E FARMACOPEIA EUROPEICA;
A esterilidade de um produto não
implica que ele seja livre de pirogênios;
Testar formas estéreis;
Análise de Pirogênios
Pirogênios 
Elevação de temperatura de coelhos após
administração intravenosa da solução teste, provocada
pela presença de Pirogênio;
Limitações: Alta variabilidade, falso positivo, fármacos
antipiréticos, tóxicos e outros;
Efeito bifásico de febre: 
Pirogênio exógeno: 1 hora 
Pirogênio endógeno: 3 horas
Pirogênios In vivo
Pirogênios In vivo
1885: Sangue do caranguejo Limulus polyphemus
apresentava formação de coágulo em gel,
associada a doenças provocadas por bactérias
marinhas (Gram-negativas). 
Levin e Bang: lise dos amebócitos do caranguejo
acelerava a reação de formação de gel.
No geral: teste de pirogênio em coelhos (RPT), o
lisado de amebócito de Limulus (LAL) e o teste de
ativação de monócitos (MAT).
Pirogênios In vitro
Gel-Clot (End-Point);
Cromogênico (End-Point);
Cromogênico (Kinetic);
Turbidimétrico (End-Point);
Turbidimétrico (Kinetic);
Métodos de ensaio:
Cromogênico: Intensidade da
 coloração amarela inverso ao
 log da [endotoxina];
Pirogênios In vitro
Pirogênios In vitro
Refere-se à sua capacidade de causar dano em
um órgão determinado;
Alterar os processos bioquímicos;
Alterar um sistema enzimático;
1.
2.
3.
Toxicidade
Método de Draize é um teste realizado em coelhos,
que determina a irritação ocular induzida;
Procedimento de Draize
Teste consiste em imobilizar e manter o olho do animal aberto para que seja
possível pingar substâncias. Pode causar dor, vermelhidão nas córneas,
inchaço, hemorragia ocular e cegueira;
 
Procedimento de Draize
Substância sólida,
líquida ou aerossol
Dose única no saco
conjuntival;
1, 24, 48 e 72 horas,
7, 14 e 21 dias;
Teste em membrana corion-alantóide de ovo
embrionado de galinha (HET-CAM);
 Teste de opacidade e permeabilidade de córnea
bovina (BCOP);
 Ensaios de citotoxicidade como o teste de
hemólise (Red Blood Cell - RBC);
1.
2.
3.
Irritação ocular
Nesse teste as cobaias têm o pelo raspado e a pele
levemente esfolada para receber o produto;
São observados por dez a quinze dias consecutivos para
concluir se há danos na pele;
Pode causar vermelhidão, coceira, irritação na pele,
inflamações e queimaduras;
Passagem de fita para deixar a pele sensível;
1.
2.
3.
4.
Irritação dérmica
Acerca dos medicamentos parenterais e líquidos estéreis, assinale a alternativa
INCORRETA.
1.
a) Injetáveis são preparações estéreis, livres de pirogênios e destinadas à administração
parenteral.
b) Pirogênios são substâncias orgânicas produtoras de febre que decorrem de contaminação
microbiana e são responsáveis por muitas das reações febris que ocorrem em pacientes após
uma injeção.
c) Independente do método de esterilização empregado, as preparações farmacêuticas que
precisam ser estéreis têm que passar por testes de esterilidade para confirmar a ausência de
microrganismos.
d) Esterilização por: vapor, calor seco, filtração, gás e radiação ionizante são exemplos de
métodos empregados para esterilizar produtos farmacêuticos.
e) O teste USP para endotoxinas bacterianas utiliza o lisado de amebócito de Limulus (LAL) e
é considerado menos sensível e eficaz que o teste com coelhos.
Questões sobre o tema
O teste de pirogênio determina a presença ou ausência de pirogênios em produtos farmacêuticos parenterais, e é regulado por
várias normas de organizações como a agência de vigilância sanitária americana (Food and Drug Administration-FDA), a
Farmacopeia dos EUA (USP) ou a Farmacopeia Europeia (EP). A esterilidade de um produto não implica que ele seja livre de
pirogênios. Portanto, os medicamentos que supostamente são estéreis também devem ser testados quanto à presença de
pirogênios para prevenir reações febris em pacientes. Sobre o teste analise as assertivas e marque a correta:
1.
I. Uma endotoxina, lipopolissacárido (LPS), é um componente necessário e libertado por bactérias Gram negativas com o propósito
de manter a integridade das suas paredes celulares. A endotoxina é o principal componente da parede celular e é extremamente
importante para a sobrevivência celular.
II. O ensaio de lisado de amebócitos de Limulus (LAL) é recomendado pelas empresas farmacêuticas internacionais como método de
determinação de toxinas bacterianas tanto em matérias-primas utilizadas para produção de medicamentos como para testar
produtos finais.
III. Uma das principais vantagens do ensaio LAL assenta em que os caranguejos dos quais se extrai a hemolinfa para preparar o
reagente LAL continuam vivos. Este feito contribui para que o ensaio de LAL substitua em grande escala o método de deteção de
pirogênios através de controlos da febre do coelho. 
A) F,F,F. B)V,F,V. C) V,F,F. D)V,V,V. E)F,F,V
Questões sobre o tema
http://www.wakopyrostar.com/inicio-br/
BRITISH PHARMACOPEIA;
EUROPEAN PHARMACOPEIA; 
FARMACOPÉIA BRASILEIRA; 
JAPANESE PHARMACOPEIA; 
PINTO, KANEKO & PINTO. Controle Biológico de Qualidade de Produtos Farmacêuticos,
Correlatos e Cosméticos (2014);
UNITED STATES PHARMACOPEIA;
ANDRADE, F. R. O.; SOUZA, A. A.; ARANTES, M. C. B.; de PAULA, J. R.; BARA, M. T. F. Análise
Microbiológica de matérias primas e formulações farmacêuticas magistrais. Revista
Eletrônica de Farmácia, v. 2, p. 38-44, 2005;
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Referências
"Tudo o que vale a pena
leva tempo."
Autor desconhecido