Enterobactérias

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—----------------------------- Enterobactérias —------------------------------
Cap 15 Microbiologia Médica; aula 28/09/22
➢ Diferenciadas por: especificidade de
metabolismo, estruturas antigênicas e hibridização e
sequenciamento de ácidos nucleicos.
➢ São bacilos gram negativos cujo habitat é o
trato gastrointestinal de animais, também conhecidos
como coliformes. São anaeróbias facultativas;
fermentam glicose, na maioria dos casos com produção
de gás, podendo fermentar também outros tipos de
carboidratos.
obs.: bacilos gram-negativos curtos incluem gêneros
Vibrio, Campylobacter e Helicobacter.
➢ São catalase positivas, oxidase negativas e
reduzem nitrato a nitrito. Podem ser imóveis ou móveis
com flagelos peritríquios e crescem adequadamente em
ágar MacConkey; não são exigentes nutritivamente, mas
meios específicos são usados somente para fins de
diferenciação.
➢ Tem estrutura antigênica complexa, que
varia dependendo da espécie e podem produzir
diferentes toxinas.
❖ Antígeno O: constitui a parte mais
externa do LPS (ou endotoxina) da parede celular,
chamado antígeno somático por ser comum entre as
espécies; resistente ao calor e álcool.
❖ Antígeno K: em algumas espécies são
polissacarídeos, em outras, são proteínas. Presentes na
cápsula, podem estar associados à virulência e à
aderência da bactéria ao sítio de infecção.
❖ Antígeno H: presentes no flagelo. As bac
flageladas, como Escherichia e Salmonella, possuem, ao
contrário das imóveis, como Klebsiella e Shigella.
Fazem parte da microbiota normal → Podem estar em
pequena quantidade nos tratos respiratório e genital.
Em geral, não provocam doenças e podem contribuir
para o funcionamento normal do intestino. E coli é a
mais comum; espécies menos comuns incluem os
gêneros Proteus, Enterobacter, Klebsiella, Morganella,
Providencia, Citrobacter e Serratia.
➢ Algumas bac se tornam patogênicas quando
atingem tecidos fora do trato intestinal e algumas são
patogênicas oportunistas (infeccionam em momentos
de imunossupressão). São elas: E. coli, K. pneumoniae,
Citrobacter spp, Proteus spp, Enterobacter aerogenes.
São patógenos primários → bactérias capazes de causar
doenças sempre. São elas: Shigella, Salmonella, Yersinia,
K. pneumoniae, E. coli.
—----------------- Escherichia coli —------------------
→ Bac mais comum da microbiota intestinal.
● Positiva para: indol, lisina descarboxilase e
fermentação do manitol. Produz gás a partir da glicose.
● Fazem hemólise em ágar sangue, a colônia tem
morfologia de “brilho” iridescente em meio diferencial
Ágar EMB.
→ Constitui 90% dos casos de infecção urinária em
mulheres jovens, que pode resultar em bacteremia e
sepse.
→ As E. coli que provocam diarreia são classificadas de
acordo com seus mecanismos de virulência, descritos a
seguir:
● EPEC (enteropatogênica): se adere aos
enterócitos do intestino delgado e é capaz de modular a
actina, destruindo a arquitetura das microvilosidades.
Desarranjos do citoesqueleto são acompanhados por
uma resposta inflamatória e quadro clássico de diarréia.
● EHEC (enterohemorrágica)/STEC (Shiga
Toxin-producing E. coli): lesão vascular característica
1
de suínos, transmissão por alimentos como carne crua e
verduras contaminadas. Produz diarréia hemorrágica,
colite e Síndrome hemolítica-urêmica (SHU), A toxina
shiga-like tem absorção sistêmica e pode ser fatal.
● ETEC (enterotoxigênica): produz diarréia
aquosa conhecida como “diarréia do viajante”, pela
secreção de toxina que fica contida no enterócito
infectado, não há absorção sistêmica.
● EAEC (enteroagregativa): forma biofilme nos
intestinos delgado e grosso, causando diarreia aquosa. O
biofilme facilita a captação de alguns nutrientes.
● EIEC (enteroinvasiva): produz diarréia
sanguinolenta e colite erosiva; tem capacidade de
migração de uma célula para a adjacente por meio de
movimentação da sua própria actina.
● DAEC (adesão difusa): ainda não completamente
compreendida.
INFECÇÕES DE TRATO RESPIRATÓRIO → E. coli, K.
pneumoniae e Proteus. Essas são enterobactérias
encontradas em cultura de urina, por ex. Lembrar que
dos cocos Gram +, S. saprophyticus e S. aureus também
causam esse tipo de infecção.
obs.: o Ágar CLED é o meio usado para urocultura,
porque inibe a formação do véu de Proteus.
Azul → Proteus
vulgaris
Amarelo → E.coli
SEPSE → E. coli, quando as defesas do indivíduo não
estão adequadas. Lembrar que outras bactérias
causadoras de sepse incluem S. agalactiae.
MENINGITE→ E. coli, sendo que 75% dos casos são
relativos às E-coli que apresentam o antígeno K1.
Lembrar que Neisseria meningitidis, Streptococcus
pneumoniae e Haemophilus influenzae também podem
causar meningite.
—--------------------- Shigella —---------------------
● Imóveis, não fermentam lactose, raramente
produzem gás.
● Infecções são geralmente
limitadas ao trato gastrointestinal,
porém ao sofrerem autólise, liberam
a toxina Shiga, que ao ser levada para
o interior da célula exerce sua
atividade tóxica inibindo a síntese
proteica, o que resulta na morte celular e complicações
renais (nefrotóxica) e do SNC. Um mecanismo de
invasão do intestino grosso pode causar disenteria com
sangue nas fezes.
● Semeadura em meios diferenciais (ex Ágar
MacConkey e EMB) e seletivos (ex Ágar SS). Os
microrganismos lactose negativos devem ser semeados
em Ágar TSI.
➢ Negativa para LDC.
➢ Alcalinizam a área inclinada em TSI.
—-------------------- Salmonella —-------------------
● Móveis, produzem H2S.
fermentam glicose e manose sem
produção de gás; não fermentam
lactose nem sacarose.
● Pode estar presente em
alimentos de origem animal (carne
de aves, ovos e derivados). Causa quadros de entero-
colite (cefaléia, náuseas, vômitos e diarréia profusa que
se resolve em 3 dias). S. thyphi é a causadora da febre
tifóide.
● Pode ser semeada em Ágar SS, XLD ou
desoxicolato-citrato.
● Positiva para: H2S, motilidade.
2
—-------------- Outras enterobactérias —--------------
Klebsiella→ o gênero está entre os dez principais
causadores de infecções hospitalares, é um patógeno
oportunista; forma colônias mucóides.
➢ Positiva para VP e LDC.
Yersinia → associada à retocolite ulcerativa, peste
negra, enterocolite. Geralmente transmitida por animais
domésticos, provoca diarréia acompanhada de febre e
leucócitos nas fezes.
➢
fermentam lactose, são móveis e algumas contém
cápsulas que produzem colônias mucóides. Causam
amplo de infecções hospitalares.
➢ Positiva para VP e LDC;
➢ Negativa para Urease.
Enterobacter → fermentam lactose, são móveis e
algumas contém cápsulas que produzem colônias
mucóides. Causam amplo de infecções hospitalares.
➢ Positiva para VP e LDC;
➢ Negativa para Urease.
Citrobacter → associada à infecções em
imunodeprimidos, pode causar sepse.
➢ Positiva para Citrato;
➢ Negativa para LDC.
Proteus → causam infecções apenas quando deixam o
trato intestinal; são altamente móveis, o que contribui
para invasão do trato urinário e aparecimento de efeito
característico no ágar, conhecido como “swarming” ou
“véu de Proteus”.
➢ Positiva para triptofano (faz a desaminase);
➢ Produz urease.
Obs.: existem bacilos gram-negativos curtos, que
incluem gêneros Vibrio, Campylobacter e Helicobacter,
não discutidos aqui. Também existem bacilos
gram-negativos relacionados ao trato respiratório, que
incluem Haemophilus, Bordetella e Legionella.
—-------------Diagnóstico diferencial —--------------
→ Bacterioscopia: bacilos Gram negativos. Lembrar que
bacilos não tem arranjos. Sempre verificar pureza da
colônia, porque amostras de urina e fezes tem muitos
contaminantes.
● ÁGAR MacConkey: seletivo para Gram negativas
(contém cristal-violeta como inibidor) e diferencial para
fermentadoras de lactose.
➢ E-coli: a colônia cresce rosa
➢ Demais bac: colônia incolor.
● OXIDASE: todas são NEGATIVAS. A prova tem
finalidade de excluir outras fermentadoras, que são
positivas.
● ÁGAR SIM (sulfeto, indol e motilidade):
➢ Motilidade: semeadura em picada.
➢ INDOL: avaliação da presença da enzima
triptofanase, que converte triptofano em indol. É
adicionado oReativo de Covas, que interage com indol,
formando um anel vermelho na borda do meio semeado
com bac positivas.
➢ Sulfeto de Hidrogênio: diferencial
para Salmonella; ocorre escurecimento do meio.
● Caldo Uréia de Stuart: A enzima urease degrada
a ureia em amônia, um composto alcalino.
Adicionando-se o indicador de pH vermelho de fenol, no
caso de urease positiva, o meio muda de cor âmbar para
roxo.
3
● Ágar Fenilalanina
A enzima fenilalanina desaminase libera um grupo ácido;
com adição do cloreto férrico, o meio originalmente
incolor torna-se ácido, e passa a mostrar alguma parte
esverdeada após adição do indicador cloreto férrico.
● Ágar Lisina
A enzima lisina descarboxilase converte
lisina em cadaverina, um composto
básico. O meio originalmente amarelo
fica roxo quando positivo.
● Ágar Citrato de Simmons
Detecta presença de bactéria capaz de usar citrato
como fonte de carbono. Caso a colônia metabolize
citrato, com adição de azul de bromotimol, fica azul.
● Vermelho de metila
Detecta bactérias conhecidas como fortes
fermentadoras de glicose, que acidificam o meio a
valores de pH abaixo de 4,5.
As demais bactérias produzem ácido apenas o suficiente
para reduzir o pH a 4,5 a 6.
● Voges Proskauer (VP)
Avalia capacidade de conversão de glicose em acetoína,
com indicador de pH vermelho de metila.
O meio originalmente amarelo, quando positivo, tem cor
avermelhada na parte superior.
→ VP positivas: Gêneros Klebsiella, Enterobacter e
Serratia.
→ VP negativas: Gêneros Salmonella, Shigella, Proteus,
Morganella, Citrobacter, Kluyvera, Providencia e E. coli.
INViC → Combinação dos testes de indol, vermelho de
metila, VP e citrato.
● TSI (Tríplice açúcar e ferro) (0,1% Glicose,
1%Lactose e 1% Sacarose).
Meio sólido, inclinado, com adição de glicose na porção
inferior e sacarose e lactose no ápice.
Análises realizadas:
- Fermentação: o maio originalmente vermelho
passa a ter coloração amarela quando positivo.
- Formação de gás: aparecimento de bolhas ou
rompimento do ágar.
- Formação de H2S: o meio fica enegrecido
quando positivo; possibilita diferenciação de E-coli e
Salmonella.
1 2 3 4 5 6
- Fazer a interpretação dos tubos sabendo que o
tubo 1 é o controle
Resp.: 2 = bactéria não fermentadora de carboidrato.
3= bac fermentadora de glicose, não fermentadora de
lactose e sacarose. Possivelmente
4= bac fermentadora de glicose, lactose e maltose,
produtora de gás. Possivelmente E -coli
5= Salmonella fermentadora de lactose e sacarose
6= Salmonella não fermentadora de lactose e sacarose
obs.: bac que fermentam lactose, em geral também
fermentam a sacarose.
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Exercícios
QUESTÃO 34 Os coliformes totais são indicativos de práticas
de higiene e sanificação aquém dos padrões requeridos para o
processamento de alimentos. A detecção desse grupo de
bactérias comumente é realizada pelo teste presuntivo
presença/ausência, pelo fato de que esses micro-organismos:
(A) são oxidase negativos.
(B) fermentam a lactose, produzindo gás e ácido.
(C) crescem na temperatura de 44-45 ºC.
(D) crescem na presença de sais biliares
97. O teste do indol é utilizado na identificação de
enterobactérias que apresentam a enzima:
a) Catalase b) DNase. c) Triptofanase d) Coagulase.
98. O teste da fenilalanina tem como resultado a:
a) Produção de ácidos.
b) Produção de aminas.
c) Produção de aminoácidos.
d) Produção de ácido fenilpirúvico.
6) COVEST - Biomédico UFPE - 2015 Um estagiário do
laboratório de Microbiologia Clínica recebeu uma lâmina
contendo esfregaço de Escherichia coli e uma lâmina
contendo esfrega o de Staphylococcus aureus para serem
coradas pela coloração de Gram (cristal violeta, lugol, álcool,
fucsina diluída). Após fixar os esfregaços pelo calor, o
estagiário realizou a coloração o, porém inverteu a ordem da
utiliza o dos corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta,
lugol). Qual foi o resultado da coloração observada ao
microscópio para E. coli e S. aureus, respectivamente?
A) Bacilos vermelho claros e cocos vermelho-escuros.
B) Bacilos vermelho-claros e bacilos violeta-escuros.
C) Bacilos e cocos vermelho-claros.
D) Bacilos e cocos violeta-escuros.
E) Cocos vermelho-claros e cocos violeta-escuros
QUESTÃO 36 (UnB/CESPE) - Considerando os aspectos da
infecção por Salmonella, que ainda constitui um sério
problema de saúde pública, assinale a opção correta.
A) A infecção por Salmonella limita-se à luz intestinal, e os
sintomas sistêmicos são causados pela absorção de toxinas.
B) O ágar McConkey é um meio de cultura em que se pode
observar o crescimento de Salmonella.
C) Por se tratar de um anaeróbio restrito, deve-se ter o
cuidado de fornecer oxigênio e gás carbônico à cultura de
Salmonella.
D) Contaminação por Salmonella ocorre exclusivamente por
ingestão de água contaminada, uma vez que as condições de
armazenamento de alimentos destroem esse microrganismo.
QUESTÃO 93 (CEV/URCA) - O maior objetivo dos cuidados
médicos frente a pacientes com processo infeccioso é a
instituição de uma antibioticoterapia eficaz. A qual depende
da compreensão adequada da interação de múltiplos fatores
relacionados ao paciente, ao agente etiológico e aos
antimicrobianos utilizados. Dentre os meios de cultura abaixo,
são indicados para uma rotina de urocultura com crescimento
bacteriano:
a) Ágar Batata e MacConkey;
b) Caldo BHI e CLED;
c) Ágar Teague modificado e MacConkey;
d) MacConkey, Agar CLED, Agar Mueller-Hinton;
QUESTÃO 162 (CONSULPLAN) - Qual destas enterobactérias
que, via de regra, apresenta o teste de motilidade negativo?
A) Citrobacter.
B) Enterobacter.
C) Klebsiella.
D) Proteus.
E) Salmonella.
QUESTÃO 163 (CONSULPLAN) - “Colônias planas, secas que
fermentam a lactose em ágar de MacConkey e grandes, cinza,
β-hemolíticas em Ágar sangue, que são oxidase negativas e
indol-positivas”. Esta é a descrição da identificação de:
A) Proteus mirabillis.
B) Escherichia coli.
C) Salmonella spp.
D) Yersinia spp.
E) Pseudomonas aeruginosa.
QUESTÃO 191 (CONSULPLAN) - Qual dessas reações
bioquímicas é usualmente positiva para a maior parte das
espécies de bactérias do gênero Enterobacter?
A) Oxidase de Kovacs.
B) Produção de Indol.
C) Teste de ONPG.
D) Hidrólise da gelatina a 22°C.
E) Fermentação do Eritritol.
QUESTÃO 192 (CONSULPLAN) - Assinale a alternativa que
mostra um teste capaz de diferenciar a maioria dos sorotipos
do grupo I de Salmonella da maioria das bactérias do gênero
Shigella:
A) Vermelho de metila.
B) Produção de sulfeto de hidrogênio (TSI).
C) Voges-Proskauer.
D) Hidrólise da ureia.
E) Motilidade.
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72 Acerca do Ágar Salmonella-Shigella (SS), analise as
afirmativas e marque V para as verdadeiras e F falsas.
( ) O Ágar SS possui componentes que inibem
micro-organismos Gram negativos.
( ) A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o
micro- organismo é lactose positiva e bactérias que não
fermentam a lactose.
( ) A presença de tissulfato de sódio e citrato férrico permitem
a detecção de H2S evidenciado por formação de colônias de
cor negra no centro.
( ) A adição da solução de iodo inibe a flora intestinal normal
de espécies fecais.
A sequência está correta em
A) V, F, F, V
B) V, V, V, F
C) F, F, F, V
D) F, V, V, V
E) F, V, V, F
QUESTÃO 497 (FUNCAB) - Qual, dentre os micro-organismos
abaixo, caracteriza-se por ser um bacilo gram negativo,
estritamente aeróbio, catalase positivo, oxidase positivo,
móvel através de flagelos polares, cujas colônias possuem um
brilho ou pigmento metálico e são adaptáveis a qualquer meio,
sendo um dos principais causadores de infecção hospitalar?
A) Proteus vulgaris
B) Escherichia coli
C) Pseudomonas aeruginosa
D) Klebsiella pneumoniae
E) Haemophilus influenzae
Questões que o Matheus enviou (gabarito no PDF)
1) As enterobactérias são bactérias que afetam o trato
gastrointestinal, causando
diarreias e vômitos, e, além disso, são a principal causa de
infecções oportunistas, incluindo septicemias, pneumonia,
meningite e infecções do trato urinário. A respeito da
identificação bioquímica das enterobactérias,assinale a
alternativa CORRETA:
A) As enterobactérias são bacilos anaeróbicos facultativos
Gram-negativos, não esporulados, apresentando motilidade
variável. São bacilos positivos para a oxidase e crescem em
diversos meios de cultura, incluindo meios alcalinos ricos em
peptona, meios enriquecidos e meios seletivos:
B) Algumas espécies, como E. coli, não fermentam lactose,
enquanto outras (Shigella, Salmonella e Yersinia) fermentam
lactose e glicose, com ou sem produção de gás.
C) As enterobactérias são positivas para a catalase, reduzem
nitrato a nitrito e crescem na presença de sais biliares.
D) Diferentes sorotipos de enterobactérias baseiam-se na
expressão de antígenos “O” (somático), “H” (flagelar) ou “K”
(capsular). Em atividades de rotina de bacteriologia clínica, a
identificação sorológica é sempre realizada.
2) A família Enterobacteriaceae constitui o maior e mais
heterogêneo grupo de bacilos Gram negativos de
importância clínica importantes, com mais de 40 gêneros e
150 espécies e subespécies já descritos. Esses gêneros foram
classificados com base, dentre outras, nas suas propriedades
bioquímicas. Sobre as características fisiológicas das
enterobactérias que podem auxiliar na caracterização,
assinale a alternativa CORRETA:
A) As enterobactérias apresentam necessidades nutricionais
simples, fermentam a glicose, reduzem nitrato, e são catalase
e oxidase positivas.
B) Espécies do gênero Shigella são importantes agentes de
infecções intestinais, dentre as características fisiológicas
usadas na identificação destaca-se: motilidade positiva e
descarboxilação dos aminoácidos lisina e ornitina negativas.
C) A sorotipagem do gênero Salmonella é um método de
subtipagem baseado na caracterização imunológica de duas
estruturas de superfície: antígeno O, que representa a porção
externa do lipopolissacárideo e antígeno Vi, que representa o
polissacárideo capsular presente em sorotipos específicos.
D) A capacidade de liberar sulfeto de hidrogênio a partir de
aminoácidos ou outros
compostos contendo enxofre é uma importante característica
na identificação de Proteus mirabilis, Proteus vulgaris,
Citrobacter freundii e espécies de Serratia.
E) A determinação da presença de fenilalanina desaminase é
útil na diferenciação preliminar de espécies de Proteus,
Morganella, Providencia e de outros bacilos Gram negativos.
3) As enterobactérias são a maior e mais heterogênea família
de bactérias Gram negativas de importância médica. Sobre a
temática, assinale a alternativa CORRETA:
A) Não fermentam a glicose, são catalase positivas, e não
reduzem nitrato a nitrito.
B) São anaeróbias, ou seja, crescem apenas em anaerobiose.
C) Shigella spp apresenta resultados positivos nos testes:
Urease, Citrato, Lisina,
Gás e Lactose.
D) São bacilos Gram-negativos, não esporulados, com
motilidade variável e oxidase negativos.
E) Nos testes de identificação bioquímica, apresentam
resultados negativos nos testes: Urease, Citrato, Lisina, Gás e
Lactose são característicos da Klebsiella pneumoniae.
4) O teste do indol é utilizado na identificação de
enterobactérias que apresentam a enzima:
a) Catalase
b) DNase.
c) Triptofanase
d) Coagulase
5) O teste da fenilalanina tem como resultado a:
a) Produção de ácidos.
b) Produção de aminas.
c) Produção de aminoácidos.
d) Produção de ácido fenilpirúvico.
6) Quanto a estrutura antigênicas das Enterobacteriaceae,
pode-se afirmar:
a) Os flagelos, o LPS e as cápsulas são antigênicas.
b) Os flagelos são chamados antígenos H e as cápsulas,
antígenos capsulares ou
antígeno K.
c) As moléculas de LPS contém antígeno O que corresponde
ao polissacarídeo da
cadeia lateral da molécula.
d) Os antígenos representam a base da identificação
sorológica dos membros da família Enterobacteriaceae, que
6
muito contribui para o conhecimento da epidemiologia das
infecções e da patogenicidade de muitas delas.
e) Todas estão corretas.
7) Entre as cepas de Escherichia coli a principal causadora de
diarreia no primeiro ano de vida é:
A) EIEC
B) EHEC
C) EPEC
D) ETEC
8) A diarreia dos viajantes está associada a qual das cepas de
E. coli:
A) EIEC
B) EHEC
C) EPEC
D) ETEC
9) São características das Shigellas, EXCETO:
A) são imóveis
B) produtoras de gás
C) produtoras de toxinas
D) bacilos gram positivos
E) causadoras de gastroenterite
10) Qual prova bioquímica se baseia na formação de
cadaverina?
A) Fenilalanina desaminase.
B) Urease.
C) Citrato de Simmons.
D) Voges Proskauer.
E) Lisina descarboxilase.
11) Qual das bactérias abaixo é conhecida por produzir uma
das toxinas mais potentes de característica nefrotóxica, que
facilmente invade células multiplicando-se no seu interior e
que pode causar quadros graves de sepse com elevação
rápida da temperatura?
A) EPEC.
B) EIEC.
C) Salmonella Tiphy.
D) Shigella spp.
E) Proteus mirabilis.
12) A fermentação da lactose é uma prova bioquímica simples
que pode indicar espécies como Escherichia coli e pode ser
observada por:
A) Meio avermelhado no ápice do ágar TSI.
B) Enegrecimento do meio de cultura.
C) Crescimento de colônias mucoides.
D) Crescimento de colônias rosas/vermelhas em ágar Mac
Conkey.
E) Ruptura do ágar após crescimento de colônias.
13) O diagnóstico de enterobactérias se baseia na utilização
de meios seletivos e provas bioquímicas. Qual das
alternativas a seguir apresenta uma característica
metabólica que permite a diferenciação entre as espécies?
A) Escherichia coli é oxidase negativa.
B) Shigella spp é fermentadora de glicose.
C) Salmonella spp produz sulfeto de hidrogênio (H2S).
D) Klebsiella pneumoniae é catalase negativa.
E) Proteus é urease negativa.
14) A diferenciação das colônias bacterianas em amostras de
urina pode ser dificultada pela formação de um véu
produzido por cepas de Proteus spp. Qual o meio de cultura
mais indicado para urocultura, que inibe a formação do véu?
A) Ágar CLED.
B) Ágar Mac Conkey.
C) Ágar Sal-manitol.
D) Ágar Thayer-Martin.
E) Ágar EBM.
15) O ágar TSI (tríplice açúcar ferro) é uma técnica que
permite identificação da capacidade fermentativa bacteriana
de açúcares, produção de sulfeto de hidrogênio e formação
de gás. A coloração amarela na base do tubo indica:
A) Fermentação da lactose.
B) Fermentação da sacarose.
C) Fermentação da glicose.
D) Produção de sulfeto de hidrogênio.
E) Formação de gás.
16) O ágar Mac Conkey é seletivo devido à adição de cristal
violeta e sais biliares em sua composição e é indicado para
amostras que apresentam microbiota mista, como na
urocultura e na coprocultura. Qual das bactérias a seguir
pode ser isolada a partir desse ágar?
A) Staphylococcus aureus.
B) Enterococcus faecalis.
C) Streptococcus pneumoniae.
D) Escherichia coli.
E) Clostridium perfringens.
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