Meios de cultura para o isolamento e identificação de fungos patogênicos

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• Cultivo artificial dos microrganismos; 
• Principais nutritivos indispensáveis ao seu 
crescimento; 
• As exigências estão relacionadas à: 
o Uma fonte de carbono; 
o Uma fonte de nitrogênio; 
o Uma fonte de energia; 
o Uma fonte de sais minerais. 
• Alguns microrganismos também necessitam de 
fatores de crescimento (substâncias que eles não 
podem sintetizar): 
o Vitaminas e aminoácidos. 
• Alguns microrganismos apresentam exigências 
nutricionais complexas, indefinidas, razão pela 
qual não têm sido cultivados em meios artificiais; 
• Deve-se inicialmente esteriliza-los. 
 
• Quanto a origem dos constituintes (natureza): 
o Sintéticos (quimicamente definidos): 
meios que apresentam composição 
química exata conhecida; 
o Semi-sintéticos (Complexos): meios que 
apresentam alguns compostos com 
composição química não conhecida; 
o Naturais: meios que apresentam 
composição química não conhecida; 
o Alguns compostos naturais de composição 
química não conhecida são: extrato de 
carne, peptona, extrato de levedura, 
sangue, soro, leite, extrato de solo, etc. 
 
• Quanto ao estado físico (consistência): 
o Sólidos: meios que possuem agentes 
solidificantes; 
o Ágar (1,2 a 2,0%) – funde à temperatura 
inferior à da ebulição da água, 
permanecendo líquido até a temperatura 
de 40oC; 
o Gelatina (12 a 15%); 
o Semi-sólidos: meios com pequena 
quantidade de ágar ou gelatina; 
o Líquidos: meios que não contêm agentes 
solidificantes. 
 
• Quanto ao tipo: 
o Meios de Rotina: apresentam os 
nutrientes básicos necessários ao 
desenvolvimento de vários 
microrganismos. Cultivo de fungos em 
geral - Ágar Sabouraud (peptona + glicose 
+ ágar) e BDA (batata + dextrose + ágar); 
o Meios Seletivos: substâncias químicas são 
adicionadas para favorecer o crescimento 
de um grupo de microrganismos e inibir 
outros; 
o Meios com antibióticos (estreptomicina, 
cloranfenicol, etc.) - cultivo de fungos, 
evitando o crescimento de bactérias; 
o Meios com fungicidas (cicloheximida) – 
inibem parcialmente o crescimento de 
fungos contaminantes presentes no ar, 
pois esses fungos tem crescimento rápido. 
o Meios diferenciais: são incorporados 
reagentes ou substâncias químicas que 
possibilitarão diferenciar os vários tipos de 
microrganismo em uma placa com ágar. 
Candida spp. (Candida Medium, 
ChromAgar, Biggy Agar, etc); 
o Meios para reações fisiológicas e 
bioquímicas: indicam os tipos de 
compostos usados pelo microrganismo e 
também quais os compostos produzidos 
por eles. 
 
• No preparo do meio de cultura pode ser utilizado 
um meio sintético comercializado totalmente 
pronto na forma desidratada ou os ingredientes 
separadamente. 
1. Pesar ou medir as substâncias separadamente; 
2. Dissolver cada ingrediente em volume apropriado de 
água destilada; 
3. Aquecer para dissolver (fundir) o ágar. O ágar não é 
considerado fonte de 
nutrientes para os microrganismos; 
4. Determinar o pH do meio fluido, ajustando se for 
necessário. Pode-se aferir o pH por indicadores ou 
potenciômetros. Valores baixos de pH suprimem 
bactérias e favorecem fungos. Para baixar o pH 
adiciona HCl e para aumentar NaOH; 
5. Distribuir em recipientes adequados (tubos, 
Erlenmeyers, garrafas) e fechar o recipiente com 
algodão envolvido em gaze, etc.; 
6. Codificar o recipiente, identificando-o com a sigla do 
nome do meio e data; 
7. Esterilizar o meio em autoclave a temperatura e 
tempo indicado para cada tipo de meio. 
 
• Tubo de ensaio: após sair da autoclave colocar o 
tubo contendo o meio a ser solidificado inclinado, 
sobre um suporte, à temperatura ambiente (meio 
inclinado) ou colocar para esfriar na posição 
vertical (meio em camada ou coluna alta). 
• Erlenmeyer, Balão de fundo chato, etc.: no caso de 
meio sólido, pode fazer a distribuição do meio nas 
placas de Petri logo após o resfriamento parcial dos 
recipientes saídos da autoclave ou na ocasião 
oportuna. Neste caso, fundir o meio, resfriá-lo até 
40-45 oC (evitar a formação de água condensada 
na tampa da placa de Petri) e verter na placa 
previamente esterilizada. 
• Meios líquidos ou semi-sólidos não necessitam de 
manejos especiais. O meio de cultura pode ser 
guardado a temperatura ambiente ou em 
refrigeração até o uso. 
• Ágar Batata (BDA): Indicado para o cultivo e 
manutenção de fungos filamentosos; 
 
• Ágar Czapeck (CZ): Indicado para o cultivo de 
fungos dos gêneros Aspergillus e Penicillium; 
 
• Extrato de Malte Ágar (EMA): Cultivo de 
endofíticos e fungos do solo; 
 
• Ágar Sabouraud (SAB): Indicado para cultivo e 
manutenção de fungos filamentosos; 
 
• Amido Ágar (AA): Avaliação da produção de 
amilase; 
 
• Caseína Ágar (CA): Avaliação da produção de 
protease; 
 
• Micoses superficiais: 
o Candida spp., Epidermophyton spp., 
Microsporum spp. 
o Ágar Sabouraud + cloranfenicol e 
cicloheximida. 
• Lesões esporotricóides Sporotrix schenckii, 
Blastomicose, Criptococose, Paracoccidioides 
brasiliensis, Cryptococcus neoformans; 
o Ágar Sangue; 
o Ágar Sabouraud dextrose + cloranfenicol + 
ciclohexemida. 
 
 
 
• Tornar livre de microrganismos; 
• Processo que promove completa eliminação ou 
destruição de todos os tipos de microrganismos: 
vírus, bactérias, fungos, protozoários e esporos 
bacterianos; 
• Usada para artigos críticos e semicríticos. 
 
Esterilização por métodos físicos 
• Calor úmido: autoclave; 
• Calor seco: estufa; 
• Radiações ionizantes: cobalto, raio gama etc; 
• Radiações não ionizantes: ultravioleta; 
• Flambagem; 
• Filtração.