Aula 2_Meio de cultura

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Microbiologia Clínica - Meios de Cultura 
 
Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o crescimento 
bacteriano, em condições de laboratório. 
- A maioria das bactérias. pode ser cultivada em laboratório, utilizando-se meios nutrientes; 
- Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências mínimas de 
substâncias nutrientes; 
 
Características Básicas dos Meios de Cultura: 
 
- Para o preparo do meio de cultura, devem ser observados o pH, a pressão osmótica, o grau de 
umidade, temperatura, como também as exigências nutritivas. Estas incluem fonte de carbono, de 
sais minerais, de energia, de nitrogênio, de fósforo e, em alguns casos, substâncias que os micro-
organismos não podem sintetizar, como vitaminas e aminoácidos. 
 
- Fonte de Carbono e Nitrogênio; 
- Fonte de Energia; 
- Sais Minerais; 
- Fatores de Crescimento; 
- Condições Físicas; 
- Esterilização. 
 
Observações 
 
- Ao preparar um meio de cultura, uma solução não estéril não pode ser mantida a temperatura 
ambiente por mais de uma hora, devido à possibilidade de evaporação da água como também de 
crescimento bacteriano, que pode contaminar o meio, alterando a sua composição inicial; 
 
- Para autoclavar, é importante cobrir as tampas dos frascos usando papel alumínio ou papel Kraft e 
prender para proteger contra recontaminação e evaporação da estocagem posterior. Afrouxar as 
tampas dos frascos (e dos tubos) com tampas de rosca, permitindo a entrada do vapor (tampas 
semiabertas); 
 
- Não encher demasiadamente a autoclave, para que não venha a interferir na exaustão de ar e na 
entrada de vapor; 
 
- Os tubos não precisam estar esterilizados caso o meio seja distribuído antes de autoclavar. Após a 
autoclavação, as vidrarias e os outros materiais devem ser estéreis para a distribuição do meio; 
 
- Os meios de placa devem ser embalados em filme de plástico PVC a fim de evitar o ressecamento. 
 
Classificação dos Meios de Cultura: 
 
De acordo com seu conteúdo químico, os meios de cultura podem ser sintéticos ou complexos. 
 
1. Meio de Enriquecimento: 
 
- Geralmente líquido, de composição química rica em nutrientes, com a finalidade de permitir que as 
bactérias contidas em uma amostra clínica aumentem em número. 
Ex.: Caldo Brain Heart Infusion (BHI) e Caldo Tetrationato. 
 
 Amostras em Caldo BHI 
 
2. Meio de Transporte e Conservação: 
 
- Consiste em um meio isento de nutrientes, contendo um agente redutor (Tioglicolato ou cisteína). 
Geralmente mantém o pH favorável, previne a desidratação de secreções durante o transporte. e 
evita a oxidação e auto-destruição enzimática dos patógenos presentes. 
Ex.: Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e Caldo Tioglicolato. 
 
 Meios de cultura de transporte 
 
3. Meio Seletivo: 
 
- A finalidade deste tipo de meio é selecionar as espécies que se deseja isolar e impedir o 
desenvolvimento de outros germes (adição de corantes, antibióticos e outras substâncias com 
capacidade inibitória para alguns germes). 
Ex.: Agar Manitol Salgado e Agar SS 
 
 Agar Manitol Salgado 
 
4. Meio Diferencial: 
 
- Possibilita a distinção entre vários gêneros e espécies de microrganismos, por possuir substâncias 
que permitem uma diferenciação presuntiva, evidenciada na mudança de coloração ou na morfologia 
das colônias. 
Ex.: Agar Eosin Methilene Blue (EMB), Agar McConkey e Agar Hektoen 
 
 
Ágar Eosina Azul de Metileno 
 
5. Meio Indicador: 
- é utilizado no estudo das propriedades bioquímicas das bactérias, auxiliando, assim, sua 
identificação. O mais simples é aquele usado no estudo das reações de fermentação. 
Ex.: Agar Triple Sugar Iron (TSI) e Agar Citrato de Simmons. 
 
 
Agar TSI com diversas cepas inoculadas 
 
Seleção dos Meios de Cultura: 
 
- A escolha dos meios de cultura, para o processamento inicial das amostras é muito importante e 
está condicionada à flora patogênica desse local; 
 
- Em geral é usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer condições de crescimento a 
todos os patógenos possíveis de estarem presentes; 
 
- Para cada caso em particular, existem os meios utilizados rotineiramente na semeadura primária; 
 
- Atualmente, o procedimento mais utilizado é a aquisição de meios pré-fabricados e fornecidos de 
forma desidratada, onde é necessária apenas a pesagem criteriosa da quantidade necessária ao 
volume desejado, seguido de dissolução e esterilização. 
 
 Meios desidratados 
Classificação quanto ao estado físico 
 
- Líquidos ou caldos: utilizado para crescimento em massa. Promove crescimento indiscriminado 
com turvação do meio por dispersão e não a formação de colônias. Os nutrientes são dissolvidos em 
solução aquosa. Exemplos: Tioglicolato (THIO), Brain Heart Infusion (BHI). 
 
 
Caldos em diversas embalagens 
 
- Sólidos: para crescimento de colônias isoladas, permite a formação de colônias puras (1,5% a 2% 
de Ágar-ágar), formado por nutrientes mais Ágar (15g de Ágar / 1000mL de água destilada). 
 
 
Meio de cultura sólido em placas de Petri (ágar) 
 
- Semi-sólido: formado pelos nutrientes mais uma pequena porcentagem (0,5%) de Ágar 
(polissacarídeo proveniente de algas marinhas), para verificar a motilidade (mobilidade bacteriana). 
 
 
Esquema do crescimento bacteriano em meio fluido (semi-sólido) 
Exemplos de meios específicos 
 
Agar Batata 
– Leveduras 
 
Agar Bismuto Sulfito 
– Salmonella spp 
(centro negro, borda clara e brilho metálico) 
 
Ágar Cled 
– Gram Positivo e Gram Negativo 
 
EMB 
(Eosina Azul de Metileno) – Seletivo para Gram Negativo 
 
Agar Loeffler 
– isolamento de Corynebacterium diphtheriae 
 
Utilidades e Interpretação de Alguns Meios de Cultura 
 
- Ágar Nutriente (NA) 
 
Utilidades: análise de água, alimentos como meio de cultivo preliminar das amostras submetidas a 
exames bacteriológicos, isolamento para culturas puras, conservação e manutenção de culturas em 
temperatura ambiente, etc. 
Interpretação: Cor original: branco opalescente. Positivo: Crescimento na superfície; Negativo: 
Ausência de crescimento. 
 
 
 
- Ágar Sangue (AS) 
 
Utilidades: isolamento de micro-organismos não fastidiosos, verificar hemólise dos Streptococcus 
spp. e Staphylococcus spp., etc. 
Interpretação: Cor original: vermelho. Alfa hemólise: halo esverdeado ao redor das colônias 
semeadas (lise parcial dos eritrócitos). Beta hemólise: halo transparente (lise total). Gama hemólise 
(sem hemólise): ausência de halo (eritrócitos íntegros). 
 
 
 
 
- Ágar Chocolate (CHOC) 
 
Utilidades: para o crescimento de micro-organismos exigentes. Exemplos: Haemophilus spp., 
Neisseria spp. 
Interpretação: Cor original: castanho escuro (chocolate). Colônias de pequeno a médio, com 
pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. Colônias 
pequenas e delicadas, pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp. 
 
 
 
 
- Ágar MacConkey (MC) 
 
Utilidades: isolamento de bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores), verificação 
da fermentação ou não da lactose. 
Interpretação: Cor original: rosa avermelhado. Crescimento de bacilos Gram negativos. Colônias cor 
de rosa: fermentadoras de lactose. Incolores: não fermentadoras de lactose. Não crescem cocos 
Gram positivos. 
 
 
 
- Ágar Salmonella-Shigella (SS) 
 
Utilidades: selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella (em amostras de fezes, alimentos e 
água). 
Interpretação: Cor original: vermelho alaranjado. Colônias com centro negro ou incolores: suspeita 
de Salmonella. Incolores: suspeita de Shigella spp. Cor de rosa ou vermelho: suspeita de 
Escherichia coli ou Klebsiella spp. 
 
 
 
- Ágar Saboraud (AS) 
 
Utilidades: cultivo e crescimento de espécies de Candida spp, fungos filamentosos, em particular 
com associação a infecções superficiais e caracterização macroscópica do fungo filamentoso 
(colônia gigante). 
Interpretação: Cor original: amarelo claro opalescente. Após crescimento, identificar o micro-
organismo que cresceu.- Ágar Mueller-Hinton (MH) 
 
Utilidades: teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-
test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp. 
Interpretação: Cor original: amarelo palha. A zona do diâmetro é particular por antibiótico e 
organismo, comparado com diâmetros padronizados pelo CLSI, que determina se o micro-organismo 
é sensível, intermediário ou resistente.