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Meios de cultura utilizados em micologia - fatores que influenciam o desenvolvimento dos fungos - bom desenvolvimento depende de fatores ambientais/físicos e de exigências nutricionais inerentes de cada espécie Condições mínimas necessárias para o desenvolvimento dos fungos: Fatores nutricionais: - macro elementos - fontes de carbono, fosforo, magnésio, nitrogênio, potássio, etc - micro elementos - fluentes de Zn, Fe, Mo, Cu Fatores físicos: - ph, temperatura, umidade, luminosidade Cultivo dos fungos em laboratório: - isolamento primário + identificação correta do microrganismo = condição indispensável - cada microrganismo deve estabelecer o microambiente ideal para sua reprodução e para seu crescimento, através de sua atividade metabólica - não existe um meio de cultivo ideal que favoreça o crescimento de todas as espécies fúngicas - vários meios para garantir a recuperação - a seleção do meio deve levar em consideração o tipo amostra e o fungo a ser investigado Variedade de meios de cultivo pode ser utilizada para atender a diversos fins: 1- Isolamento primário do fungo 2- Identificação de gêneros e espécies 3- Manutenção de micotecas 4- Testes de susceptibilidade frente a diversos antifúngicos 5- Extração de metabólitos Meios básicos para isolamento: Agar sabourad dextrose: - principal meio de cultivo usado em micologia - cultivo primário - meio qualitativo e seletivo - sabourad: Raymond Sabouraud em 1904 - modificações foram propostas: extrose e cloranfenicol Agar sabourad dextrose/modificações: SDA dextrose, modificado por Emmons: - eleva o pH final do meio de 5,9 para 7,0 - seleciona os fungos e exclui as bactérias - favorece o crescimento e condiogenesis - favorece o isolamento de fungos incapazes de crescer na presença de alta concentração de dextrose: Blastomyces dermatidis Marina Reuter Pierote - retirada total dextrose: dificulta o pleomorfismo das colônias fúngicas (muda sua forma) -> favorece a manutenção da micoteca - composição de Sabouraud dextrose: peptona, dextrose (fonte de carboidrato), agar bacteriológico, água destilada Aspecto da colônia em ágar Sabouraud: - colônias das leveduras são glabrosas (sem pelos), sendo as suas texturas cremosas, membranosas e úmidas, não formando hifas aéreas Agar MYCOSEL: - agar Sabourad com cloranfenicol e cicloheximida, com função de inibir o crescimento de fungos contaminantes do ar e bactérias - CIcloheximida inibe: - Fusarium, Aspergillus, Scorpulariopsis - Cryptococcus neoformans - algumas espécies de cândida Meios de cultura: identificação taxonômica: Agar batata dextrose: - utilizado em indústrias de alimentos - utilização na realização de microcultivos para identificação de espécies e armazenamento de cepas fúngicas - induz esporulação dos fungos -> formação de estruturas reprodutivas Agar aveia: - utilizado na realização de microcultivos para identificação de Fusarium, Acremonium, CLadosporium, Paecilomyces, Phialophora, Scapulariopsis etc - principalmente fungos que tem produção de conídios maiores (macroconídios) Agar CZAPECK: - nitrato de sódio, fosfato bipotassico, sulfato de magnésio, cloreto de potássio, sulfato ferroso, sacarose, ágar e água destilada - utilizado para espécies de Aspergillus e Peniciliium, já que as descrições de pigmento, textura e estrutura micromorfologicas são classicamente realizadas a partr de seu cultivo neste meio - primeiramente era um meio liquido depois virou um meio sólido Agar extrato de malte: - para identificar espécies de Acremonium, Aspergillus, Clodosporium, Paecilomyces, Penicillium, Scopulariopsis, etc - rico em carboidratos e substancias nitrogenadas - utilizado mais p/ fungos filamentosos Agar cenoura e batata: Marina Reuter Pierote - utilizados para estimular a conidiogenesis de fungos demaceos Agar lactrimel: - produção de pigmento (dermatófitos) - mel, leite e farinha de trigo Agar arroz: - estruturas de reprodução de Microsporum Agar TRichophynton – 1-7: - diferenciação de espécies de Trichophynton Meio de Dixon: - isolamento do gênero Malassezia Meios de cultura: triagem de cândida: Chromagar cândida: - para Candida tropicalis e Candida albicans Meios de cultivo para estimulação da fase teleomorfa: AGgar V8 Meiio de Gordokowa – estimula produção de ascos dos gêneros Pichia e Saccaromyces Agar acetato de sódio (agar kleyn) – formação de ascos do gênero Saccharomyces Meio de Takashio – formação de estruturas sexuadas de dermatófitos *induzir forma sexuada dos fungos Meio de cultivo para conservação dos fungos filamentosos: GPYA: glicose, peptona e extrato de levedura Garantia de qualidade: - preencher corretamente a planilha de controle de qualidade de meios de cultivo (data, responsável, lote etc) - seguir rigorosamente recomendações do fabricante descritas no frasco - balanças calibradas - avaliar se o meio suporta crescimento adequado das cepas controle de leveduras/ fungos filamentosos (cada novo lote) - vidraria utilizada para preparação dos meios de cultivo deve ser selecionada cuidadosamente c/ base no sistema de distribuição - precisão do ph é muito importante em alguns casos - água nunca deve ser utilizada para hidratar os meios – deve ser destilada e nunca água corrente - verificar controle: cultivo sem fungo - esterilização – alguns meios não podem ser autoclavados – devem ser filtrados Marina Reuter Pierote
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