Aula 2 Microbiologia

Prévia do material em texto

1 Microbiologia Geral – Susana Figueiredo LCB 
Microscopia 
• É a capacidade que o microscópio possui 
de distinguir dois pontos adjacentes 
• Na prática, corresponde à menor distância 
que pode existir entre dois pontos para 
que apareçam individualizados (entidades 
separadas) 
• Quanto menor a distância entre os pontos, 
maior o poder de resolução 
 
Sendo: 
 
 
 
• O grau de ampliação de um microscópio 
corresponde ao produto de ampliação de 
cada uma das lentes 
• Ampliação total: 40x, 100x, 400x, 1000x 
 
 
 
 
 
• 3 sistemas de lentes: 
o Condensador 
o Objetivas 
o Oculares 
 
• Permite observar a maioria dos 
microrganismos 
• Usa luz visível 
• A amostra aparece mais escura do que o 
fundo brilhante 
• Usado normalmente para observar a 
morfologia microbiana 
• Ideal para preparações coradas (células 
mortas) 
• Permite observar preparações a fresco 
(células vivas) 
• Desvantagem: baixo contraste entre as 
células e o meio exterior e entre as 
estruturas intracelulares e o citoplasma 
 
Ocular com aumento de 10x e objetiva com 
aumento de 40x: 
Temos um aumento de 400x 
- Poder resolutivo do olho humano: 0,2 mm 
- Poder resolutivo do microscópio ótico: 0,2 µm 
A utilização de óleo de imersão na objetiva de 
100x permite igualar o índice de refração, 
evitando a dispersão da luz e aumentando a 
resolução 
 
2 Microbiologia Geral – Susana Figueiredo LCB 
 
 
• Permite a observação de microrganismos 
muito finos 
o Treponemas, borrelias e 
leptospiras 
• Condensador especial com “anel “que 
fecha a luz (daí o campo ser escuro) 
o Um disco opaco bloqueia a entrada 
direta de luz na objetiva 
• Usa luz visível 
• Aumenta o contraste de uma amostra 
transparente 
• Permite observar células vivas 
• Desvantagem: não permite observar 
detalhes intracelulares 
 
• Permite observar a mobilidade, fagocitose 
e outras atividades celulares 
o Usado para ver o crescimento de 
culturas celulares eucarióticas 
• Condensador e objetivas diferentes 
o Sistema ótico especial 
o Condensador encima e objetivas 
embaixo 
▪ Microscópio invertido 
• Usa luz visível 
• Distingue pequenas diferenças de 
densidade e índice de refração 
• Maior contraste 
• Permite observar células vivas e alguns 
detalhes intracelulares 
 
 
• Fonte de iluminação: luz UV 
• Fluorocromos (tornam amostra 
fluorescente) 
o Laranja de acridina 
o Rodamina 
o Fluoresceína 
• A imagem forma-se com base na luz 
fluorescente emitida pelo fluorocromo (na 
célula) após excitação 
• Importante para: 
o Diagnóstico clínico 
▪ Ensaios de 
imunofluorescência 
▪ Doença do legionário, 
sífilis, tuberculose, raiva, 
herpes e outras doenças 
causadas por 
microrganismos de difícil 
cultivo 
 
 
 
Anticorpos preparados com 
fluorocromos possibilitam a rápida 
identificação de microrganismos com 
desenvolvimento lento/difícil em 
laboratório 
 
3 Microbiologia Geral – Susana Figueiredo LCB 
o Distinção entre células viáveis e 
mortas 
 
 
 
• Funcionamento semelhante ao do 
microscópio de fluorescência 
• Aplicação na ciência: 
o Obtenção de imagens de amostras 
vivas 
o Informação computorizada 
tridimensional para pesquisa 
biológica, análise química e de 
materiais 
o Áreas mais importantes: 
▪ Neuroanatomia 
▪ Neurofisiologia 
• Microscópio confocal de varrimento a 
laser: 
o Imagens com elevada resolução 
através de cortes óticos 
o Permite fazer a reconstrução 
tridimensional da topografia das 
células 
o Imagem formada devido a eletrões 
que interagem com a superfície das 
amostras e são refletidos 
 
 
• Fonte de luz: feixe de eletrões 
• Amostra tratada com metais pesados para 
obter áreas bem definidas 
o Zonas escuras: maior densidade de 
eletrões 
o Zonas claras: menor densidade de 
eletrões 
• Maior poder de resolução e ampliação que 
o ótico 
• Imagem formada devido a eletrões que 
passam através da amostra 
• Imagem bidimensional 
• Ampliação máxima 1 000 000x e P.R 0,2 
nm 
 
4 Microbiologia Geral – Susana Figueiredo LCB 
• Usado para observar vírus e ultra 
estrutura interna de células 
 
• Permite observar detalhes superficiais dos 
microrganismos no seu todo com um 
relevo tridimensional 
o Usado para observar as 
características da superfície 
externa de células e vírus 
• Imagem formada devido a eletrões que 
interagem com a superfície da amostra e 
são refletidos 
• Imagem tridimensional 
• Produz imagem num ecrã de tubos de 
raios catódicos 
• Ampliação máxima de 100 000x e P.R 
5nm