DOSAGEM DE PROTEÍNAS DO LEITE PELO MÉTODO DO BIURETO

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA
MOLECULAR BQI 101 – Laboratório de Bioquímica I
Relatório da Aula Prática Nº 6
DOSAGEM DE PROTEÍNAS DO LEITE PELO MÉTODO DO BIURETO
Caio Henrique Alvarenga Pascoal Matr: 108366
Julia Araujo Moura da Costa Matr: 100728
Marcela Calegário Matr: 114122
Número de Turma: 14 Horário da aula: Quinta às 8h
Viçosa (MG), 18 / 10 / 2023
INTRODUÇÃO:
Proteínas são macromoléculas formadas por um ou mais polímeros de
aminoácidos. Elas atuam nas mais variadas funções do organismo, por exemplo,
relacionadas com a defesa, aceleração de reações químicas, transporte de
substâncias e comunicação celular.
Para realizar a quantificação das proteínas em uma solução deve-se escolher o
melhor método levando-se em conta a natureza da proteína, a presença de
interferentes, a rapidez, sensibilidade, custos, entre outros aspectos. A técnica
mais comum para quantificação de proteínas é o método de espectrofotométricos.
A espectrofotometria é baseada na absorção da luz pela substância a ser
quantificada. Quando um raio de luz monocromática atravessa a substância
capaz de absorver energia desse comprimento de onda específico, parte da luz
que incide é absorvida e outra parte emerge do outro lado.
A razão entre a intensidade da luz emergente (I) e a intensidade da luz incidente
(I₀) é chamada de transmitância (T).
Fórmula 1: Fórmula da transmitância
T = 𝐼𝐼₀
A transmitância depende da natureza da substância, de sua concentração e
também da espessura da solução atravessada pela luz. Essa relação é descrita
quantitativamente pela Lei de Lambert-Beer, em que para cada comprimento de
onda (𝜆), tem-se:
Fórmula 2: Lei de Lambert-Beer
T = 10-kcl
Sendo T a transmitância, k o coeficiente de extinção molar, c a concentração da
substância e I a espessura da solução atravessada pela luz.
O valor de - log de T é chamado de absorvância (A) ou densidade ótica (DO).
Sendo assim, segundo a Lei de Lambert-Beer, a absorvância é diretamente
proporcional à concentração da substância e à espessura da solução atravessada
pela luz.
Para determinação da transmitância ou absorvância de uma substância pode ser
utilizado tanto calorímetros como espectrofotômetros. Se uma determinada
solução não absorve energia, I e I₀ têm o mesmo valor, portanto T = 1, concluindo
então que qualquer solução que absorve energia terá T < 1.
OBJETIVOS:
Aplicar o método do Biureto para quantificação das proteínas do leite.
RESULTADOS E DISCUSSÃO:
Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é baseado
na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto), com
proteínas e peptídeos. O nome do método provém do fato de que a ureia
aquecida dará reação positiva, com desprendimento de amônia.
O reativo de biureto é uma solução de sulfato de cobre (CuSO4) e tartarato
duplo de sódio e potássio (KNaC4H4O6) que ao reagir com os íons cúpricos,
forma um produto de coloração violáceo. Esse reativo é utilizado na identificação
de compostos proteicos, pois as ligações existentes na molécula de biureto são
semelhantes às ligações peptídicas na formação de proteínas.
A reação do biureto é positiva para proteínas e peptídeos com três ou mais
resíduos de aminoácidos. A reação é também positiva para substâncias que
contêm duas carbonilas (-CONH2) ligadas diretamente ou através de um único
átomo de carbono ou nitrogênio. Dependendo da complexidade da proteína ou do
peptídeo em questão, a cor do produto da reação (presença do biureto) varia
substancialmente. Proteínas, normalmente, geram coloração violeta, peptídeos
dão coloração rosa. Quanto maior for a quantidade de proteínas no meio, maior
será a intensidade de cor.
N x y (a) x.y x^2 y^2
1 g/l 1 0,033 0,033 1 0,001089
2 g/l 2 0,07 0,14 4 0,0049
3 g/l 3 0,117 0,531 9 0,013689
4 g/l 4 0,155 0,62 16 0,024025
5 g/l 5 0,199 0,995 25 0,039601
∑ 15 0,494 2,319 55 0,083304
y= ax+b
a=
𝑛Σ𝑥.𝑦−Σ𝑥.Σ𝑦
𝑛Σ𝑥^2−(Σ𝑥)^2
b=
Σ𝑦.Σ𝑥2 − Σ𝑥 . Σ𝑥𝑦
𝑛Σ𝑥2−(Σ𝑥)2
a= = = 0,08375. 2,319− 15.0.494
5. 55−152
4,185
50 
b= = -0,15230,494. 55 − 15. 2,31950
R= = = 1,08364Σ𝑥𝑦
Σ𝑥2 . Σ𝑦2 
2,319
2,140
Y= 0,0837x - 0,1523
Am 1 = x = = 3,444 g/l0,136 +0,15230,0837
Água + Leite + HCL
Am 2 = x = = 3,133 g/l0,110 +0,1523 0,0837
Água + leite
Fator de diluição =
Fd1= = = 2,19 g/l𝑉𝑡𝑉𝑙
10𝑚𝑙 +10 𝑚𝑙 +1,9
10
Lactoproteina = Am 1 . Fd = 3,444 . 2,19 = 7,54 g/l
Fd 2= = 2019+11
Proteínas totais = 3,133 .20 = 62,66 ou 6,26%
Teor de caseína = 62,66 -7,54 = 55,12 g/l ou 5,51%−1
Teor de caseina nas proteina totais:
62,66 g/l proteínas totais —------ 100%−1
55,12 g/l de caseína —------- x−1
x = 87,96 % (p/p)
Logo, 87,96 % das proteínas do leite são caseínas.
CONCLUSÕES:
A partir do experimento com métodos biureto e espectrometria é possível
efetuar a curva padrão, assim determinado teores de proteína, de caseína do
leite.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
https://www.todamateria.com.br/proteinas/#:~:text=As%20prote%C3%ADn
as%20s%C3%A3o%20as%20macromol%C3%A9culas,unidos%20atrav%C
3%A9s%20de%20liga%C3%A7%C3%B5es%20pept%C3%ADdicas.
https://brasilescola.uol.com.br/biologia/proteinas.htm
https://www.todamateria.com.br/proteinas/#:~:text=As%20prote%C3%ADnas%20s%C3%A3o%20as%20macromol%C3%A9culas,unidos%20atrav%C3%A9s%20de%20liga%C3%A7%C3%B5es%20pept%C3%ADdicas
https://www.todamateria.com.br/proteinas/#:~:text=As%20prote%C3%ADnas%20s%C3%A3o%20as%20macromol%C3%A9culas,unidos%20atrav%C3%A9s%20de%20liga%C3%A7%C3%B5es%20pept%C3%ADdicas
https://www.todamateria.com.br/proteinas/#:~:text=As%20prote%C3%ADnas%20s%C3%A3o%20as%20macromol%C3%A9culas,unidos%20atrav%C3%A9s%20de%20liga%C3%A7%C3%B5es%20pept%C3%ADdicas
RESOLUÇÃO DOS EXERCÍCIOS DO CADERNO DIDÁTICO:
Questão 1) A lei de Lambert-Beer estabelece uma relação entre a concentração
de uma solução e sua absorvância. Ela diz que a transmitância da solução (razão
entre intensidade da luz emergente e a intensidade da luz incidente) de uma
substância que absorve luz depende diretamente da concentração e da
espessura da solução que atravessou a luz.
A fórmula dessa lei é: T = 10 elevado a -kcl, sendo T a transmitância, k uma
constante, c a concentração da substância e l a espessura da solução que
atravessa a luz.
As soluções padrão utilizadas durante o experimento obedecem a lei de
Lambert-Beer, já que o tom violeta das amostras aumentaram de intensidade ao
mesmo tempo de aumentava a concentração.
Questão 2) 540nm foi o comprimento de onda utilizado pois é o comprimento
ideal de absorvância do biureto, já que é esse o valor que permite passar apenas
a faixa de comprimento de energia desejada.
Questão 3) Sempre se utiliza um branco na dosagem colorimétrica para reduzir a
ação de interferências fotométricas, pois os brancos indicam a interferência de
outras espécies na amostra.
Questão 4) A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de
absorbância (A) e os de concentração. A curva-padrão possui a utilidade de
definir a quantidade de uma certa propriedade em uma amostra desconhecida a
partir de dados de uma amostra que possui essa propriedade conhecida.
Para realizar o cálculo da curva padrão, é necessário realizar alguns
procedimentos. Primeiramente, deve-se realizar o experimento e anotar
corretamente seus resultados. Deve-se obter também a equação da reta,
podendo ser adquirida por calculadora científica, papel milimetrado ou até mesmo
por programas de computadores. Após isso, deve se relacionar, na equação da
reta, os valores de absorvância (A) e concentração.
Questão 5) Houve as diluições para que o leite atendesse a lei de Lambert-Beer,
já que antes da diluição a concentração do leite era muito elevada.
Questão 6) Pois o volume de leite que foi usado na amostra 2 é maior que o
volume de leite usado na amostra 1, logo, o fator de diluição da amostra 2 é
maior, já que fator de diluição é a razão entre volume final e inicial da amostra.
Questão 7)
a) y = ax + b
y = 0,05x + 0,002
x = 0215 + 0,002 / 0,05
X = 4,34Fator diluição = Volume total / volume do leite
Fator diluição = 54 mL / 20 mL
Fator diluição = 2,7
Logo, a concentração de proteínas é 11,718 mg/mL já que 4,34 x 2,7 = 11,718.
b) Com esse procedimento a caseína poderá ser quantificada, pois após a
filtração, o método de Biureto é utilizado para quantificar proteínas dessa
classificação.