LAB-PAP-179-TIPAGEM SANGUÍNEA LÂMINA E TUBO

Prévia do material em texto

PROTOCOLO DE AULA PRÁTICA 
Número: 
LAB-PAP-179 
CURSO: BIOMEDICINA E FARMÁCIA Aprovação: 
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA CLÍNICA 
Diretoria Acadêmica 
Ser Educacional 
ELABORADO POR: 
MARIANA ARAGÃO MATOS DONATO 
DATA: 
28/03/2013 
Revisão: 
00 
 
 1 / 2 
 
 Quando impresso este documento passa a ser cópia não controlada. 
Antes de imprimir, pense na Natureza. 
 
 
 NOME DA PRÁTICA: 
TIPAGEM SANGUÍNEA – LÂMINA E TUBO 
OBJETIVOS DA PRÁTICA: 
 Realizar teste de tipagem sanguínea em lâmina 
 
OBS.: A quantidade (qtd) material listada abaixo é estimada para apenas um grupo de alunos. A 
quantidade de grupos, por aula, deve ser definida pelo professor. Sugestão (04-06) aluno por grupo. 
QTD DESCRIÇÃO DAS VIDRARIAS QTD REAGENTES E SOLUÇÕES 
15 Lâminas 1 Reagente 1(ANTI-A) 
15 Tubos 1 Reagente 2(ANTI-B) 
 1 Reagente 3(ANTI-AB) 
 
 
 
QTD MATÉRIA-PRIMA/INSUMO OU ANALITO QTD EQUIPAMENTOS POR GRUPO 
05 Amostra(sangue com EDTA) 1 Geladeira * 
 1 Micropipetas automáticas com capacidade de 
50 µL 
 
 
 
 
MÉTODO EXPERIMENTAL/PROCEDIMENTO 
 
Teste em lâmina: 
1 - Preparar uma suspensão de glóbulos a 40% no próprio soro, plasma ou solução salina à 0,9%. 
2 – Colocar uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da lâmina e uma gota de reagente Anti-B no lado 
direito. Em uma segunda lâmina, colocar uma gota de reagente Anti-AB. Realizar os testes à temperatura 
ambiente (20º a 25º C). 
3 – Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a cada reagente. 
4 – Misturar o reagente com a suspensão de glóbulos em uma área de 2x3 cm. Movimentar delicadamente a 
lâmina para promover a mistura e examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. A aglutinação se 
inicia em poucos segundos. Não observar a lâmina por mais de 2 minutos, quando não houver aglutinação. 
Alternativamente, pode-se realizar o teste em lâmina utilizando-se uma suspensão de glóbulos à 10% em 
solução salina à 0,9%. 
 
Teste em tubo: 
1 - Preparar uma suspensão a 3-5% do glóbulo a ser testado em solução salina à 0,9%. 
2 – Adicionar uma gota de reagente Anti-A, Anti-B e Anti-AB respectivamente em três tubos de ensaio e 
identificá-los. 
3 – Acrescentar uma gota da suspensão de hemácias 3-5% a cada tubo. Misturar bem o conteúdo. 
4 - Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm. 
5 - Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a presença ou não de aglutinação. 
6 - Graduar e registrar o resultado. 
A força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária para se obter um sobrenadante claro e um botão 
nitidamente delineado que possa ser ressuspendido facilmente. 
 
PROTOCOLO DE AULA PRÁTICA 
Número: 
LAB-PAP-179 
CURSO: BIOMEDICINA E FARMÁCIA Aprovação: 
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA CLÍNICA 
Diretoria Acadêmica 
Ser Educacional 
ELABORADO POR: 
MARIANA ARAGÃO MATOS DONATO 
DATA: 
28/03/2013 
Revisão: 
00 
 
 2 / 2 
 
 Quando impresso este documento passa a ser cópia não controlada. 
Antes de imprimir, pense na Natureza. 
 
 
As centrífugas devem ser calibradas individualmente para se obter o tempo e velocidade ótimos de 
centrifugação. 
Nota: OS TESTES PARA CLASSIFICAÇÃO ABO NUNCA DEVEM SER INCUBADOS À 37° C. 
 
INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO 
POSITIVO: excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos glóbulos pelo reagente indica a presença do 
antígeno correspondente. Igualmente, a aglutinação da amostra pelo reagente Anti-A,B indica a presença dos 
antígenos A e/ou B, caracterizando não se tratar de grupo O. 
NEGATIVO: excluindo-se as limitações do teste, a ausência de aglutinação no teste indica ausência do antígeno 
correspondente. 
 
LIMITAÇÕES DO TESTE 
Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem ocorrer com amostras de sangue de 
subgrupos A e B ou após estocagem prolongada. 
Resultado falso-positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do cordão de recém-nascidos. 
As variáveis relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica, suspensões muito concentradas ou diluídas, 
centrifugação ou incubação inadequadas, solução salina à 0,9% contaminada ou vidraria suja podem causar 
falsas reações positivas ou negativas. 
As anomalias sorológicas inerentes à amostra podem causar reações inesperadas ou discrepância entre 
tipagem direta e reversa. 
O Grupo ABO de um indivíduo só pode ser determinado se existir uma concordância exata entre a classificação 
direta e classificação reversa. 
O reagente foi otimizado para as técnicas descritas. Outros procedimentos devem ser validados pelo usuário. 
CONTROLES 
1- O resultado obtido na tipagem ABO em adultos deve ser confirmada pela prova reversa com reagente de 
células A1 e B (Rh negativos). 
2- É importante que a reatividade e especificidade do reagente sejam confirmadas a cada dia de uso utilizando-
se um controle positivo, de preferência hemácia A2B e um controle negativo, hemácia do grupo O. 
DESEMPENHO 
Os anticorpos Anti-A, Anti-B, Anti-A,B (Monoclonal Murino) aglutinam especificamente hemácias humanas na 
presença dos antígenos correspondentes. 
A especificidade do produto é determinada através da inclusão de um painel de hemácias, representando os 
antígenos com freqüência igual ou superior a 1% na população. 
Para assegurar reatividade adequada, na análise final para liberação do lote, os reagentes são testados com 
hemácias positivas para o antígeno correspondente. Em se tratando do reagente Anti-A, incluem-se amostras do 
fenótipo A2B.