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CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL IDENTIFICAÇÃO 1. Acadêmico: 2. Matrícula: 3. Curso: 4. Turma: 5. Disciplina: : Imunologia Clínica 6. Tutor(a) Externo(a DADOS DA PRÁTICA 1. Título: VDRL 2. Semestre: 8ºsemestre 3. Data: 17/03/2024 INTRODUÇÃO A sífilis é uma doença causada pela bactéria Treponema pallidum. Conhecida há muito tempo pela humanidade, somente com a descoberta da penicilina por Alexander Fleming, em 1928, foi possível vislumbrar um tratamento efetivo contra essa infecção sexualmente transmissível (IST). O VDRL é um teste muito utilizado em triagens, devido a sua simplicidade de execução e baixos custos. Tem uma fase qualitativa (reagente ou não reagente) e uma semiquantitativa, em que é possível realizar a titulação para os resultados positivos. Apesar de ser um teste não específico, é muito útil também para o acompanhamento dos pacientes durante o tratamento, pois a diminuição dos títulos indica que está havendo sucesso. Além disso, permite a avaliação de reinfecções. OBJETIVOS • realizar um teste antigênico não treponêmico; • reconhecer o processo de titulação para resultados semiquantitativos; • avaliar os resultados de teste não treponêmico; • interpretar os resultados e correlacioná-los com doenças clínicas. MATERIAIS • microscópio; placa escavada ou placa de Kline; • pipetas automáticas para dispensar 20 µL e 50 µL; • solução salina (0,9% NaCl); • agitador mecânico ajustável a 180rpm; • suspensão antigênica. • materiais para limpeza de bancada: hipoclorito a 1%, papel absorvente e álcool 70%. CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD METODOLOGIA SEGURANÇA DO EXPERIMENTO :Higienize as mãos na pia. Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”: jaleco, luvas, óculos de proteção e máscara. Higienize a bancada com hipoclorito de sódio. Em seguida, passe o álcool 70%. REALIZANDO O TESTE QUALITATIVO Pipete 50 µL do controle positivo, transfira o controle positivo para o poço 1 da placa escavada. Em seguida, descarte e troque a ponteira. Pipete 50 µL do controle negativo e transfira para o poço 2 da placa escavada, descarte e troque a ponteira. Pipete 50 µL da amostra sorológica, transfira a amostra para o poço 3, descarte e troque a ponteira. Regule a micropipeta para 20 µL, pipete 20 µL do reagente de VDRL, transfira o reagente de VDRL para o poço 1, descarte e troque a ponteira. Pipete 20 µL do reagente de VDRL para o poço 2, descarte e troque a ponteira. Pipete 20 µL do reagente de VDRL para o poço 3, descarte e troque a ponteira. Mova a placa escavada para o agitador orbital e prenda com o gancho. Configure o agitador para 180 rpm por 4 minutos e inicie a agitação da amostra clicando no botão “ON” do menu Speed e, em seguida, clicando no botão “ON” do menu Time. Retire a placa do agitador e mova-a para o microscópio óptico. VISUALIZANDO A PLACA ESCAVADA NO MICROSCÓPIO Ligue o microscópio. Visualize os poços com controle positivo, controle negativo e a amostra na objetiva de 10x e depois na de 40x. Atente-se à instrução para movimentação do revólver ou para efetuar as configurações de posicionamento dos parafusos, condensador ou diafragma. Visualize a reação e avalie os resultados. REALIZANDO O TESTE SEMI-QUANTITATIVO Observação: Esse teste só será realizado caso a amostra tenha resultado positivo para o teste qualitativo. Mova a placa escavada para a bancada. Regule a micropipeta para 50 µL. Pipete50µL da solução salina e transfira para o poço 5. Descarte a ponteira. Transfira 50 µL da solução salina para os poços 6, 7, 8, 9 e 10, sempre substituindo a ponteira. Pipete50 µL da amostra sorológica e transfira para o poço o 5 (diluição 1:2) e homogeneíze a amostra. REALIZANDO DILUIÇÃO SERIADA Pipete 50 µL da solução do poço 5 para o poço 6 (diluição 1:4) e homogeneíze amostra. Pipete 50 µL da solução do poço 6 para o poço 7 (diluição 1:8) e homogeneíze a amostra. Pipete 50 µL da solução do poço 7 para o poço 8 (diluição1:16) e homogeneíze a amostra. Pipete 50 µL da solução do poço 8 para o poço9(diluição 1:32) e homogeneíze a amostra. Pipete 50 µL da solução do poço 9 para o poço 10 (diluição 1:64) e homogeneíze a amostra. Pipete 50 µL da solução do poço10, descarte e troque a ponteira. Regule a micropipeta para 20 µL. Pipete 20 µL do reagente de VDRL, transfira o reagente de VDRL para o poço 5, descarte e troque a ponteira. Pipete 20 µL do reagente de VDRL nos poços 6, 7, 8, 9 e 10, sempre trocando a ponteira. Mova a placa escavada para o agitador orbital e prenda como gancho. Configure o agitador para 180 rpm por 4 minutos e inicie a agitação da amostra clicando no botão “ON” do menu Speed e, em seguida, clicando CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD no botão “ON” do menu Time. Retire a placa do agitador e mova-a para o microscópio óptico. VISUALIZANDO A PLACA ESCAVADA NO MICROSCÓPIO Ligue o microscópio. Visualize os poços com a amostra diluída na objetiva de 10x e depois de 40x. Atente-se à instrução que, para movimentação do revólver ou para efetuar as configurações de posicionamento dos parafusos, condensador ou diafragma. Visualize a reação e avalie os resultados. Limpe a bancada. CONCLUINDO O EXPERIMENTO Higienize a bancada com hipoclorito de sódio e, em seguida, passe o álcool 70%. RESULTADOS E DISCUSSÕES O ensaio de ELISA para diagnóstico de HIV permite a detecção de anticorpos ou antígenos específicos em amostras de plasma ou soro de pacientes com suspeita de infecção. A utilização de kits comerciais permitiu facilitar o procedimento manual da técnica. No entanto, sempre é necessário ter cuidado no procedimento para chegar a um resultado confiável. REGISTRO FOTOGRÁFICO REFERÊNCIAS Algetec – soluções tecnológicas em educação. LABORATÓRIO DE IMUNOLOGIA CLÍNICAVDRL.Disponívelem:https://uniasselvi.grupoa.education/sagah/object/defau lt/71712568.Acesso em:17/03/24.