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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS CURSO: FARMÁCIA DISCIPLINA: BIOQUÍMICA METABÓLICA NOME DO ALUNO: MATHEUS VINÍCIUS DA MATA RA: 2249342 POLO DE MATRÍCULA: SOROCABA - ÉDEN POLO DE PRÁTICA: SOROCABA – ÉDEN DATA DAS AULAS PRÁTICAS 16/09/2023 30/09/2023 SOROCABA, 05 DE OUTUBRO DE 2023 1. Atividades obrigatórias respondidas e vistadas 2. Resultados e discussões 2. 1. Aula 1, roteiro 1 Determinação da glicemia Para esse primeiro experimento foi necessário utilizar 3 tubos de ensaio. O primeiro chamado de branco conteve apenas 20 mL reagente pH 7,5, tampão fosfato, glicose oxidase, peroxidase, 4-aminoantipirina do kit de determinação enzimática da glicemia. No tubo dois a amostra de 20 mL soro fisiológico com mais 20 mL do reagente. No tubo três, 20 mL da solução padrão do kit e 20 mL do reagente. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 505 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 0,287 Teste: 0,234 Abs. Teste/Abs. Padrão x 100 = 0,234/0,287 x 100 = 81,5 mg/dL, o que significa que o indivíduo não tem diabetes mellitus, pois somente consta acima de 99 mg/dL. 2.2. Aula 1, roteiro 2 Determinação da glicosúria Para esse procedimento foi coletado uma amostra de urina de dois pacientes, denominados como amostra A e amostra B. Nesse teste foi utilizado a tira de teste para glicosúria, ela foi emergida na amostra de urina e depois feito a sua leitura colorimétrica usando o padrão de cores da própria embalagem. Nesse momento foi constatado que o paciente B apresentou glicose na urina, enquanto os outros testes ficaram em níveis normais como no paciente A. Esse teste geralmente está relacionado com diabetes mellitus, mas pode estar relacionado com outras doenças também. Ao final, o material biológico foi descartado em um vaso sanitário e a recipiente encaminhado para o descarte correto. 2.3. Aula 1, roteiro 3 Determinação de colesterol total no sangue Utilizando de um kit, a análise seguiu como feita na aula 1 roteiro 1, porém aqui usou-se enzimas colesterol esterase e colesterol oxidase, que após reações, formam produto de cor vermelha, que pode ser dosado em absorbância 500 nm, por essa razão utilizou-se o espectrofotômetro. Novamente foi necessário três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 10 mL do reagente. No segundo denominado como teste, foi adicionado 20 mL da amostra e 20 mL do reagente. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 20 mL da solução padrão do kit e 20 mL do reagente dele. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 500 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 0,493 Teste: 0,277 Abs. Teste/Abs. Padrão x 200 = 0,277/0,493 x 200 = 112,3 mg/dL, o que significa que o indivíduo tem quantidades de colesterol adequadas. 2.4. Aula 2, roteiro 1 Determinação de TG no sangue Para a determinação de triglicerídeos, a mesma técnica com o espectrofotômetro foi utilizada. Foram utilizados kits que usam a enzima lipase lipoproteica, liberando-os das lipoproteínas, e, após reações, o produto tem a cor avermelhada. Novamente foi necessário três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 10 mL do reagente. No segundo denominado como teste, foi adicionado 20 mL da amostra e 20 mL do reagente. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 20 mL da solução padrão do kit e 20 mL do reagente dele. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 505 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 0,597 Teste: 0,780 Abs. Teste/Abs. Padrão x 200 = 0,780/0,597 x 200 = 153 mg/dL, o que significa que o indivíduo tem quantidades de triglicerídeos adequadas. 2.5. Aula 2, roteiro 2 Determinação de proteínas totais e albumina sanguínea Para essa determinação foi necessário a utilização do kit, e em primeiro foi feita a análise da albumina sanguínea. Novamente foi necessário três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 10 mL do reagente. No segundo denominado como teste, foi adicionado 20 mL da amostra e 20 mL do reagente. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 20 mL da solução padrão do kit e 20 mL do reagente dele. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 545 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 357 Teste: 827 Abs. Teste/Abs. Padrão x 3,8 = 827/357 x 3,8 = 8,8 g/dL, o que significa que o indivíduo tem grandes quantidades de de proteínas no sangue, quando o normal é de 3,5 a 5,5 g/dL. Para a determinação de proteínas totais, usou-se três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 40 µl de água destilada, mais 20 mL do reagente biureto. No segundo denominado como teste, foi adicionado 40 µl da amostra e 20 mL do reagente biureto. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 40 µl da solução padrão do kit e 20 mL do reagente biureto. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 630 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 192 Teste: 266 Abs. Teste/Abs. Padrão x 4 = 266/192 x 4 = 5,5 g/dL, o que significa que o indivíduo tem um pouco abaixo do valor de referência que é 6 a 8 g/dL. 2.6. Aula 2, roteiro 3 Determinação de proteínas totais e albumina na urina Nesse procedimento, foi necessário relembrar a função renal e as substâncias que são reabsorvidas e excretadas pelos rins. Para isso, foi necessário recolher urina em recipiente limpo, sem vestígios de sabão ou ácidos. Imergir a tira na urina recente, devidamente misturada, esperar alguns instantes e remover o excesso para efetuar a leitura cromática utilizando as referências de cores estabelecidas pelo fabricante. Os resultados obtidos foram: Cor: amarelo claro. Ph: 6,0. Ausência de proteína/albumina. 2.7. Aula 3, roteiro 1 Determinação de ácido úrico no sangue Para essa aula, o objetivo foi relembrar a fórmula geral dos nucleotídeos e as bases nitrogenadas. Para isso, usou-se três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 3 mL do reagente do kit. No segundo denominado como teste, foi adicionado 60 µl da amostra e 3 mL do reagente. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 60 µl da solução padrão do kit e 3 mL do reagente. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 505 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 0,153 Teste: 0,193 Abs. Teste/Abs. Padrão x 6 = 0,193/0,153 x 6 = 7,56 mg/dL, o que significa que o indivíduo está um pouco acima do valor de referência máximo paratodos os sexos e idades. Homem: 3,4 a 7,0 mg/dL e mulheres: 2,4 a 5,7 mg/dL. 2.8. Aula 3, roteiro 3 Determinação de bilirrubinas no sangue. Para esse procedimento, foi necessário quantificar as bilirrubinas totais, direta e indireta numa amostra de soro. Para isso, usou-se três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 3 mL de água destilada, 300 µl de ácido sulfanilico e 150 µl da amostra. No segundo denominado como direta, foi adicionado 3 mL de água destilada, 300 µl do reagente e 150 µl da amostra. No terceiro tubo chamado total, foi adicionado 3 mL de acelerador e 150 µl da amostra. Contudo, os resultados não apresentaram números fidedignos, uma vez que os valores representados pelo espectrofotômetro marcaram resultados negativos. 2.9. Aula 4, roteiro 2 Determinação de ferro no sangue Para esse procedimento, foi necessário relembrar as funções, metabolismo e fontes alimentares do ferro, para isso usou-se três tubo de ensaio. No primeiro chamado de branco, foi adicionado 3 mL de tampão, 750 µl de água destilada e mais 750 µl de ferrozine. No segundo denominado como teste, foi adicionado 3 mL de tampão, 750 µl de amostra, e 750 µl de ferrozine. No terceiro tubo chamado padrão, foi adicionado 3 mL de tampão, 60 µl de amostra, 750 µl de padrão e 750 µl de ferrozine. Com as três amostras nos tubos, os mesmo foram levados a banho maria em 37 °C pelo timer de 10 minutos, logo após as soluções foram levadas para o espectrofotômetro a 560 nm com o auxílio do professor. Com isso, obteve-se os seguintes resultados que foram interpretados seguindo padrões já estabelecidos: Branco: 0 Padrão: 0,435 A1: 0,037 A2: 0,085 A1-A2/Abs. Padrão x 500 = 0,037-0,085/Abs. Padrão x 500 = 55 mg/dL. No caso da paciente ser do sexo feminino, o resultado demonstra que os níveis de ferro sérico no sangue estão dentro da faixa normal. Já no caso do paciente do sexo masculino, observa-se uma leve redução nos níveis de ferro sérico, sugerindo a recomendação de uma dieta com maior teor de ferro. 2.10. Aula 4, roteiro 3 Determinação do ferro no sangue Para esse procedimento, foi necessário relembrar as funções, metabolismo e fontes alimentares do cálcio. Seguindo assim, separou-se duas cubetas identificadas como A (amostra) e P (padrão), adicionando nas duas 1 mL do reagente do kit. Fez-se a leitura da cubeta A no espectrofotômetro e zerou. Adicionou-se na cubeta A 0,02 mL da amostra e anotou-se o resultado. Após retirar, introduziu-se a segunda cubeta P, zerou-se e depois adicionou-se 0,02 mL da solução padrão. Obtendo assim os seguintes resultados e cálculos: Branco: 0 Amostra: 1,328 Padrão: 1,150 Abs. Amostra/ Abs. Padrão x 10 1,328/1,150 x 10 = 11,5 mg/dL, que significa que o valor de referência não está dentro dos padrões, uma vez que a média para adultos está em 8,8 a 11 mg/dL. 3. Referências Livro texto de bioquímica metabólica. Curso de Farmácia, Universidade Paulista, UNIP, 2023. Acesso em: 02 out. 2023 Manual de orientações aulas práticas. Curso de Farmácia, Universidade Paulista – UNIP, 2023. Acesso em: 02 out. 2023.
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