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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS CURSO: FARMÁCIA DISCIPLINA: BIOQUIMICA CLINICA NOME DO ALUNO: CAROLINA CAPUCI CIPRIANI RA: 0424252 POLO DE MATRÍCULA: SANTOS - BOQUEIRÃO POLO DE PRÁTICA: SANTOS – RANGEL DATA DAS AULAS PRÁTICAS: 02/09/2023 E 16/09/2023 SANTOS , 23 DE SETEMBRO DE 2023 ATIVIDADE OBRIGATÓRIA RESULTADOS E DISCUSSÃO A disciplina de Bioquímica Clínica no curso de Farmácia desempenha um papel importante, fornecendo conhecimento para a compreensão e avaliação de parâmetros bioquímicos presentes em amostras de material biológico. Primeiramente, a coleta de material biológico é um passo crucial. Se não fizermos direito, os resultados podem sair errados, uma coleta inadequada leva a resultados imprecisos, portanto, aprendemos como fazer isso da forma certa. Portanto, compreender as técnicas de coleta apropriadas é fundamental para garantir a precisão das análises bioquímicas. Segundo Arenas (2019), o plasma sanguíneo é um dos componentes do sangue e representa cerca de 55% do volume desse tecido. Correspondendo à parte líquida que reúne os elementos celulares: hemácias ou eritrócitos, leucócitos e plaquetas Outro aspecto relevante é a fotometria, uma técnica que usa luz para medir substâncias nas amostras, isso ocorre porque algumas substâncias absorvem luz em diferentes quantidades. O perfil renal, que inclui a avaliação de ureia, creatinina e ácido úrico, é de grande importância na avaliação da função dos rins. Essas substâncias são indicadores de distúrbios renais e podem fornecer informações valiosas sobre a capacidade dos rins. Ureia é uma substância produzida pelo fígado que permite analisar o funcionamento não só do fígado, como também principalmente dos rins. O exame de ureia serve para avaliar e monitorar a saúde destes órgãos. Essa substância é resultado do nosso metabolismo reagindo às proteínas ingeridas na alimentação (SARZEDAS, 2011). Creatinina é um resíduo gerado em decorrência da degradação da creatina, utilizada como energia nos músculos (WILLIAMS,2000). A urianálise é outra parte importante, onde analisamos a urina para ver sua cor, densidade, pH e se há componentes incomuns, como proteínas ou sangue, isso nos ajuda a verificar a saúde do sistema urinário. No que diz respeito ao fígado, o perfil hepático entra em cena, avaliando enzimas hepáticas e bilirrubina. Isso é fundamental para detectar problemas no fígado, como hepatites ou cirrose. O perfil pancreático e o perfil lipídico são outras áreas de destaque na bioquímica clínica, pois fornecem informações sobre a função do pâncreas e os níveis de lipídios no organismo, respectivamente. O perfil pancreático avalia a presença de enzimas pancreáticas no sangue, enquanto o perfil lipídico inclui a determinação de parâmetros como colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos, sendo fundamental para a avaliação do risco cardiovascular. Por fim, a análise dos sais minerais também é abordada nesta disciplina, uma vez que esses elementos desempenham papéis essenciais em numerosos processos bioquímicos no organismo. A deficiência ou excesso de sais minerais como cálcio, fósforo, sódio e potássio pode levar a uma série de distúrbios e afetar o equilíbrio eletrolítico do corpo. Os minerais são elementos necessários em pequenas quantidades para o funcionamento do organismo e da manutenção da saúde. Eles representam de 4 a 5% do peso corporal em mulheres e homens adultos. Estão presentes, principalmente, nos vegetais, cereais e alimentos de origem animal (BORDIGNON, 2003). DESCRIÇÃO DOS RESULTADOS ROTEIRO: 01 AULA: 01 – COLETA DE MATERIAIS BIOLOGICOS. DATA DA AULA: 02/09/2023 Para realizar a coleta de sangue, é necessário seguir um protocolo rigoroso para garantir a integridade das amostras e a segurança do paciente. Geralmente, uma agulha é inserida em uma veia periférica, como a do braço, e o sangue é coletado em tubos de ensaio ou seringas apropriadas. A escolha entre soro, plasma ou sangue total depende do tipo de análise a ser realizada, pois cada componente contém informações distintas. Portanto, dominar as técnicas de coleta de material biológico é fundamental para obter resultados precisos e confiáveis em diagnósticos médicos e estudos científicos. TAMPA ANTICOAGULANTE SETOR MATERIAL ROXO EDTA Hematologia Vidro ou plástico AMARELO Gel separador com ativador de coágulo Sorologia bioquímica Vidro ou plástico VERDE Citrato de Sódio. Hematologia (coagulação) Vidro VERMELHO Siliconizado sem anticoagulante. Sorologia e bioquímica Vidro ou plástico Siliconizado sem anticoagulante. Fluoreto de sódio + EDTA. Sorologia e bioquímica Bioquímica Vidro ou plástico Vidro ou plástico CINZA ROTEIRO: 02 AULA: 01 - PRINCIPIOS DE FOTOMETRIA. DATA DA AULA: 02/09/2023 Preparamos 2 tubos de ensaios, e com o auxílio de uma pipeta automática: No Tubo que classificamos como B (branco) colocamos 1,5mL de água destilada e 2,5mL de reagente de biureto, no Tubo P (padrão) misturamos 1,0mL de albumina (8 mg/mL), 0,5mL de água destilada e 2,5mL de reagente de biureto, em seguida agitamos e levamos em banho maria à 37ºC por 15 minutos. Passando o tempo determinado levamos para a leitura no espectrofotômetro para obtenção do comprimento de onda máximo do tubo padrão, as cubetas foram preenchidas, e o equipamento zerado com o branco em cada intervalo de leitura, segue os resultados: Resultados após analise no espectofotômetro: Comprimento de onda λ Absorbância 400nm 0,672 420nm 0,461 450nm 0,218 470nm 0,237 500nm 0,384 520nm 0,587 550nm 1,056 580nm 1,697 600nm 2,102 630nm 2,397 650nm 1,703 680nm 0,51 700nm 0,173 Gráfico : Curva com Padrão de Albumina/Biureto 0,672 0,461 0,218 0,237 0,384 0,587 1,056 1,697 2,102 2,397 1,703 0,51 0,173 y = 0,0781x + 0,3914 R² = 0,155 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 40 0 nm 42 0n m 45 0n m 47 0 nm 50 0 nm 52 0 nm 55 0 nm 58 0 nm 60 0 nm 63 0 nm 65 0 nm 68 0 nm 70 0 nm curva de absorbância ROTEIRO: 01 AULA: 02 – PERFIL RENAL – UREIA, CREATININA E ÁCIDO ÚRICO DATA DA AULA: 02/09/2023. Procedimento: A) Ureia: Utilizamos um Kit Ureia CE Labtest, usamos o método Uréase. Separamos 3 tubos de ensaio, identificado como B (branco), T (teste) e P (padrão). Com uma pipeta automatica, adicionamos 1mL de uréase tamponada, no tubo B, no tubo T adicionamos 0,01mL (10µl) da amostra mais 1mL de uréase tamponada, e no tubo P 0,01mL (10µl) do padrão mais 1 mL de uréase tamponada, após, colocamos em uma estante e colocamos em banho- maria à 37ºC por 5 minutos, passando esse tempo adicionamos mais 1,0mL de oxidase nos 3 tumos, homogeineizamos e levamos em banho maria por mais 5 minutos, e após foi feita a leitura no espectrofotômetro ajustado a 600nm em comprimento de ondas. Zeramos com o branco, e uma nova leitura foi feita com o Padrão, onde o resultado foi de 0,701 Abs, e uma nova leitura foi feita com o Teste resultando em em 0,321Abs. A partir do cálculo obtivemos o resultado 32,05mg/dl mostrando que a urina analizada esta dentro dos padrões de referência, que são: Adultos, 15 a 45mg/dl. B) Creatinina: No teste de creatina, utilizamos um Kit Creatinina, da Labtest, através do método picrato, com amostra soro plasma (EDTA e heparina). Em um tubo de ensaio, pipetou-se 100 µl da amostra, em 1,0 mL do reagente de trabalho, homogeneizou e em seguida colocamos em banho- maria a 37ºC por 3 minutos, após ajustamos o espectrofotômetro em 500 nm para a leitura. Identificamos os resultados das leituras como: A1 = 0,356 A2 = 0,377 Após a realização do cáuculo para creatinina, obtivemos o seguinteresultado de 1,08mg/dl, mostrando que o resultado esta dentro dos valores de referência: Homem: 0,9 a 1,3mg/dl - Mulher: 0,6 a 1,1mg/dl. C) Ácido Úrico: usamos um Kit ácido úrico liquiform da labtest, com amostra de soro ou plasma (heparina). Identificamos 3 tubos de ensaios, no B(branco) adicionamos 1mL do reagente, no T( teste) adicionamos 0,02ml (20µl) da amostra mais 1mL do reagente, e no P(padrão) 0,02mL (20µl) do padrão mais 1ml do reagente, misturou-se e colocamos por 5 minutos em banho- maria a 37ºC, preparamos o espectrofotômetro, ajustando em 505nm em comprimento de onda. O resultado da leitura do teste foi 0,046 Abs. e a leitura do padrão foi de 0,049 Abs. Com esses resultados efetuamos o cálculo para o ácido úrico onde o resultado foi de 5,62mg/dl. Interpretando os resultados, os valores encontrados dentro das referências, foram: Homem: 2,5 a 7,0mg/dl - Mulher: 1,5 a 6,0mg/dl. ROTEIRO: 02 AULA: 02 – PERFIL RENAL – UROANALISE. DATA DA AULA: 02/09/2023. Durante as práticas realizadas, exploramos as técnicas e metodologias empregadas para a análise de componentes da urina, como a presença de proteínas, glicose, células sanguíneas, sedimentos e eletrólitos, permitindo uma compreensão profunda da saúde renal e sua importância diagnóstica na detecção de diversas condições clínicas. Procedimento: Efetuamos a coleta de urina de 4 alunos para análise e acondicionamento em tubos cônicos com tampa, onde obtivemos os seguintes resultados: Exame Físico: COR AMARELO VOLUME 40 mL ASPECTO LÍMPIDO Exame Físico-químico após 1 minuto: Densidade Boa Proteínas Negativo pH 5.0 Presença de Sangue Negativo Glicose Negativo Nitrito Negativo Bilirrubina Negativo Leucócitos Positivo Realizamos a análise física, pelos resultados a urina apresentou coloração amarelo cítrico sendo considerado normal. Depois realizamos o exame físico químico, onde utilizamos o Kit Urocolor - Check, mergulhamos a fita nos tubos com amostra de urinas, aguardamos 1 minuto para fazermos a interpretação, conforme quadro. Após iniciamos o exame de sedimento, retirou-se a urina do tubo, deixando apenas 10mL de urina de cada amostra, levou-se para uma centrifuga na rotação número 6 para sedimentação durante 10 minutos, passando esse período verificamos que sedimentou no fundo do tubo, e com uma pipeta de pasteur, foi retirado o sobrenadante, deixando apenas 1mL dentro, agitou-se os tubos para quebrar os sedimentos. Com uma pipeta automatica colheu-se a amostra de urina e efetuou-se o preenchimento da câmara de Neubauer, a parte inferior com a urina do tubo 1 e a superior com a urina do tubo 2, levou-se para análise microscópica iniciando com a menor objetiva, aumentando até chegar na maior objetiva, onde visualizamos leucocitos, células epiteliais e cristal de oxalato de cálcio. ROTEIRO: 01 AULA: 03 – PERFIL HEPÁTICO. DATA DA AULA: 16/09/2023. Durante as atividades laboratoriais conduzidas, exploramos técnicas específicas para avaliar a função pancreática e hepática, utilizando esses marcadores como indicadores essenciais. As informações obtidas a partir dessas análises desempenham um papel crítico no diagnóstico e acompanhamento de distúrbios pancreáticos e hepáticos, fornecendo insights valiosos para a prática clínica e a saúde do paciente. Procedimento: Doseamento de Gama-GT Usamos um Kit Gama_GT da biotecnia.Tipo de amostra: soro e plasma EDTA. Preparou-se o reagente, virando o frasco 2 no frasco 1, homogeneizou-se e incubou em banho-maria por 3 minutos à 37ºC, após identificamos o tubo de ensaio, em seguida pipetamos 2mL de reagente e 200µl da amostra de (soro), o tubo foram agitados; o espectrofotômetro foi zerado em 405nm com água destilada, inserimos na cubeta, e fizemos as leituras a seguir por 60s: A0= 0,873 120s:A1= 0,987 180s:A2= 0996 240s:A3= 1,009 Ao efetuar o cálculo obtivemos um resultado de 22,17u/l; de acordo com esse resultado, podemos interpretar que os valores estão dentro dos valores de referência que são: Homem: <55u/l – Mulher: ˂38u/l. Bilirrubinas: A bilirrubina por formação de diazobilirrubina vermelha com absorção em 525nm, para o procedimento foi utilizado um kit de bilirrubinas (Labtest), com amostra de soro. Identificamos 3 tubos de ensaio B (branco), BD (branco direto) e BT(branco total), com uma pipeta adicionamos nos tubos de acordo com a tabela acima, e nos 3 tubos acrescentou-se amostra com a concentração padrão (10mg/dl), aguardamos Branco Branco Direto Total Água destilada 1 mL 1mL Acelerador (1) 1mL Ácido Sulfanílico (2) 1mL Diazo Reagente 1mL 1mL Amostra 0,05mL 0,05mL 0,05mL por 5 minutos em temperatura ambiente, após foi determinada a absorbância das BD e BT, acertando o zero com o branco(B); sabendo-se que a absorbância do tubo padrão é de 0,337mg/dl, medimos a absorbância do tubo BD, onde o resultado foi de 0,045mg/dl, e absorbância do tubo BT é igual a 0,116mg/dl. Com esses resultados realizamos o cálculo cujo o resultado foi 1,33mg/dl, para bilirrubina direta, de 3,44mg/dl para bilirrubina total e de 2,11mg/dl para bilirrubina indireta. Podemos concluir com esse teste, que o paciente pode apresentar um quadro de icterícia, pois os valores estão acima dos padrões de referência, que são: Bilirrubina direta até 0,4mg/dl; bilirrubina total até 1,2mg/dl e bilirrubina indireta até 0,8mg/dl. ROTEIRO: 02 AULA: 03 – PERFIL PANCREATICO. DATA DA AULA: 16/09/2023 Procedimento - Doseamento de Glicose em jejum: Utilizamos um kit de glicose liquiform (Labtest). Identificamos 3 tubos de ensaio B(branco), T(teste) e P(padrão) onde foi adicionado em cada tubo os reagentes conforme tabela abaixo: Após fazermos as adições, levamos em banho-maria por 10 minutos, passando o tempo foi determinado a absorbância do tubo T e P em 500nm, calibrando com o Branco, os resultado obtidos foram: Abs Branco: 0,171 Abs Padrão: 0,254 Abs Teste: 0,227 Com esses resultados foram feitos os cálculos, onde o resultado foi 67,47mg/dl. Branco Padrão Teste STD 10µl TESTE 10µl R1 1000µl 1000µl 1000µl Portanto com esse resultado podemos concluir que o pacinte está com sua glicose normal, visto que os valores de referência são de: Normal 65 a 99mg/dl. ROTEIRO: 01 AULA: 04 – PERFIL LIPIDICO. DATA DA AULA: 16/09/2023 Procedimento: Triglicérides: Para realizarmos esse procedimento, utilizamos um kit de triglicérides liquiform (Labtest). Iniciamos o procedimento, identificando 3 tubos de ensaio B (branco), T (Teste) e P (Padrão), enos 3 tubos acrescentou-se amostra com a concentração padrão, conforme tabela abaixo: Branco Padrão Teste STD 10µl TESTE 10µl REAGENTE 1000µl 1000µl 1000µl Homogeneizamos e colocamos em banho-maria por 10 minutos a 37ºC, em seguida determinamos a absorbância do T e do P em ondas de 505 nm acertando o zero com o Branco (B), efetuamos as leituras e obtivemos os seguintes resultados: Abs Teste: 0,403 Abs Padrão: 0,444 Com esses resultados foram feitos os cálculos, onde o resultado foi 181,53mg/dl. Portanto com esse resultado podemos concluir que os resultados se encontram dentro dos valores de referência que são: <150mg/dl e sem jejum <175mg/dl. Colesterol HDL: Para esse procedimento utilizamos o kit de HDL colesterol Labtest); lipoproteínas de muito baixa densidade (V.L.D.L), e as lipoproteínas de baixa densidade (LDL). Iniciamos o procedimento, identificando 3 tubos de ensaio B (branco), T (Teste) e P (Padrão) e nos 3 tubos acrescentou-se amostra com a concentração padrão, conforme tabela abaixo: Levamos os tubos já com as misturas para centrifuga por 15 minutos a 3.500 rpm, em seguida separamoso sobrenadante, misturamos e levamos em banho-maria a 37ºC por 10 minutos e determinamos a absorbância do T e do P em 505nm. Efetuamos as leituras e obtivemos os seguintes resultados: Abs Teste: 2,721 / Abs Padrão: 1,171 Sabendo que a concentração do padrão é de 40mg/dl, foi feito o cálculo para colesterol HDL onde obtivemos o seguinte resultado: 63,65mg/dl. Portanto com esse resultado podemos concluir que os resultados se encontram dentro dos valores de referência que são: <150mg/dl e sem jejum <175mg/dl. ROTEIRO: 02 AULA: 04 – SAIS MINERAIS. DATA DA AULA: 16/09/2023. Procedimento - Fósforo: Para esse procedimento utilizamos o kit de fósforo liquiform (Labtest), Identificando 3 tubos de ensaio B (branco), T (Teste) e P (Padrão), e nos 3 tubos acrescentou-se amostra com a concentração padrão, conforme tabela abaixo: Tabela 1 Branco Padrão Teste ÁGUA DESTILADA 2,5 ml 2,5ml 2,5 ml TESTE 100µl PADRÂO 100µl CATALIZADOR 1 gota 1 gota 1 gota Branco Padrão Teste ÁGUA DESTILADA 100µl STD 100µl TESTE 100µl REAGENTE 1000µl 1000µl 1000µl Misturamos todos os reagentes da Tabela 1, nesse processo vamos acrescentou-se os componentes da tabela 2: Agitamos fortemente (nesta fase ocorre a turvação). Colocamos em banho- maria em água fria por 3 minutos, após o banho, adicionamos os componetes da tabela 3: Após a mistura da tabela 3, agitamos fortemente e colocamos mais uma vez em banho de água fria por mais 5 minutos. Passando esse tempo, acertamos o espectrofotômetro no zero com o branco e determinamos a absorbância do T e do P em 650nm. O resultado das leituras foram: Abs Teste: 0,163 / Abs Padrão 0,036. Com esses valores efetuamos o cálculo para o fósforo, onde obtivemos o resultado de 2,26mg/dl. Portanto com esse resultado podemos concluir que os resultados se encontram dentro dos valores de referência que são: Normal = 2,5mg/dl a 4,5mg/dl. Tabela 2 Branco Padrão Teste REAG.MOLIBDATO 1 gota 1 gota 1 gota Tabela 3 Branco Padrão Teste TAMPÃO 2 gotas 2 gotas 2 gotas REFERÊNCIAS ARENAS, Gessica Cantadori F. Plasma Rico em Plaquetas e Fatores de Crescimento. Biologa. São Paulo, 2009. SARZEDAS, Carolina Galvão. Uroanálise e Líquidos Corpóreos,2011. WILLIAMS, Melvin H. Creatina. Editora Manole Ltda, 2000. BORDIGNON, Clara Venilda Melchior. Os minerais do corpo: uma visão interdisciplinar. Arquivos do Mudi , v. 7, n. 2, p. 61-63, 2003. https://www.fea.br/wp-content/uploads/2021/06/Bioquimica-Clinica-5ed-Allan- Gaw.pdf FEA LIPAY, B. E. Biologia Molecular – Métodos e Interpretação. Rio de Janeiro: Grupo GEN, 2015. Disponível em: https://grupogen.vitalsource.com/books/9788527727679.