Extracao de DNA solo Qiagen

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CEN0167 – Biodiversidade e Conservação 
 
 
Extração de DNA – DNeasy PowerSoil Pro Kit (Quiagen) 
Notas: 
- Solução CD2 deve ser armazenado de 2 a 8 C na chegada. Todos os demais reagentes devem 
ser armazemados a temperatura ambiente (15- 25 C). Se a solução CD3 estiver precipitada, 
aqueça a 60 C para dissolver a precipitação. Todos os passos da extração devem ser realizados 
a temperatura ambiente. 
1. Dar Spin no Tubo PowerBead Pro brevemente para assegurar que as beads estão no 
fundo do tubo; 
2. Adicionar 250 mg de solo e 800 ul da solução CD1, (para células, precipitar 1.5-3.0 ml de 
suspensão e add 800ul da solução CD); 
3. Vortex na velocidade máxima por 10 minutos; 
4. Centrifugar o tubo PowerBead Pro a 15.000 g por 1 min; 
5. Transferir o sobrenadante (500 – 600 ul) para um novo tubo de 2 mL. O sobrenadante 
pode conter partículas de solo; 
6. Adicionar 200 ul da solução CD2 e agitar por 5 segundos (Vortex) e centrifugar por 
15.000 g por 1 minuto; 
7. Transferir o sobrenadante (500 – 600 ul) para um novo tubo de 2 ml; 
8. Adicionar 600 ul da solução CD3 e agitar 5 segundos (Vortex); 
9. Passar o conteúdo para a coluna (MB Spin Column) e centrifugar a 15.000 g por 1 minuto 
10. Descartar o fluído e repetir este passo até a centrifugação de todo o conteúdo 
11. Colocar a coluna dentro de um novo tubo de 2 mL 
12. Adicionar 500 ul da solução EA e centrifugar a 15.000 g por 1 minuto 
13. Descartar o fluído e voltar a coluna para o mesmo tubo 
14. Adicionar 500 ul da solução C5 e centrifugar a 15.000 g por 1 minuto 
15. Descartar o fluído e colocar a coluna dentro de um novo tubo de 2 mL e centrifugar o 
tubo vazio a 15.000 g por 2 minutos 
16. Cuidadosamente transferir a coluna para novo tubo de 1,5 mL e eluir utilizando 50 a 100 
ul da solução C6 no centro do filtro da membrana 
17. Deixar a tem. Ambiente por 2 minutos e centrifugar a 15.000 g por 1 minuto 
18. Descartar a coluna e armazenar o DNA a -20 C 
Referência: 47016: DNeasy PowerSoil Pro Kit (Quiagen)