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AULA_11_TRANSGENIA e CLONAGEM ACH4157 – Genética Molecular Melhoramento animal e vegetal vem sendo realizado há milênios pela interferência do homem; Essa interferência ocorreu sem conhecimentos genéticos (ou com utilização desses conhecimentos a partir do século XX); No entanto, a transgenia, embora um processo controlado, é vista com muito mais desconfiança; Essa desconfiança é comum e recorrente na história da humanidade, se apresentando a todo momento que uma nova tecnologia/ algo novo surge. • teosinto • milho MELHORAMENTO GENÉTICO 3 I- Transgenia • Metodologia utilizada para estudos em ciência básica e aplicada. • Pode ser realizada em animais, plantas, bactérias, fungos... Transgene: construção molecular (genética) transferido para o organismo hospedeiro Transgênico: organismo geneticamente modificado pelo transgene I- Transgenia- CONCEITO • Manipulação de material genético in vitro e transferência desse material para uma célula (organismo), que em algum momento vai conferir uma propriedade diferente à célula receptora. Material genético pode ou não ser proveniente de outra espécie; Material genético não necessariamente um gene, partes de um gene, ou composição de genes diferentes; Em geral, é desejável que o transgene seja transmitido às células descendentes. I- Transgenia- HISTÓRICO • A primeiro produto humano obtido por engenharia genética foi a insulina; • A metodologia foi desenvolvida por pequisadores da Genentech em 1978, para a produção de insulina humana em bactéria E coli; • Em 1982 a Genentech e Lilly assinaram um acordo para comercializar o produto que havia sido aprovado pelo FDA; I- Transgenia- HISTÓRICO • A diabetes era uma doença fatal até anos 20/30 do século passado, quando se descobriu a insulina; • A forma de tratamento era a obtenção de insulina a partir de extratos de pâncreas de porco ou vaca. I- Transgenia animal • 1. Tem início com a manipulação do DNA in vitro (obtenção de DNA recombinante). I- Transgenia animal • 2. O DNA recombinante precisa ser introduzido na célula hospedeira (célula germinativa). I- Transgenia animal • 3. O DNA recombinante precisa se integrar ao cromossomo e assim poder ser propagado de forma estável; • de forma aleatória. I- Transgenia animal • 3. O DNA recombinante precisa se integrar ao cromossomo e assim poder ser propagado de forma estável; • ou de forma direcionada. I- Transgenia animal • 4. A inserção estável e geração de uma linhagem precisa ser selecionada I- Transgenia animal • Aplicação II- Transgenia vegetal • PLASMÍDEO TI • O plasmídeo TI é natural da bactéria Gram- negativa do solo Agrobacterium tumefasciens; • Bactéria fitopatogênica, induz a formação de galhas (tumor vegetal) por meio do plasmídeo TI (~ 200kbs); • Infecção e o tumor envolve a transferência, integração e expressão de genes codificados por diferentes regiões do plasmídeo. II- Transgenia vegetal • CLONAGEM e TRANSFORMAÇÃO II- Transgenia vegetal • CLONAGEM e TRANSFORMAÇÃO II- Transgenia vegetal • CLONAGEM e TRANSFORMAÇÃO II- Transgenia vegetal • Transgenia em plantas focou inicialmente no maior rendimento da produção agrícola; • RESISTÊNCIA A INSETOS; • RESISTÊNCIA A VÍRUS; • RESISTÊNCIA A HERBICIDAS; • ESTRESSE AMBIENTAL; • RESISTÊNCIA A FUNGOS/ BACTÉRIAS PATOGÊNICAS. • Muitas dessas possibilidades já foram exploradas e constam como produtos comercializados. II- Transgenia vegetal • Criar variedades de plantas que possam ser utilizadas desde para diferentes culturas agrícolas até plantas ornamentais; • Utilização de plantas como biorreatores vivos para a produção de metabólitos/ proteínas recombinantes/ vacinas/ anticorpos; • Em estudos para entender a atuação de genes em processos fisiológicos, bioquímicos ou do desenvolvimento. III- Terapia gênica • Objetivo: correção de algumas doenças herdáveis a nível genético • Metodologia: inserção de genes alterados (sadios) para substituir ou compensar o mau-funcionamento dos alelos de um paciente • Tipos: • 1. Terapia de células somáticas • - endereçamento de material genético direto para as células ou células do paciente manipuladas in vitro e reintroduzidas; • - correção do fenótipo de uma doença em um tecido ou órgão do corpo. • 2. Terapia de linhagem germinativa • - manipulação de células da linhagem germinativa; • - se bem sucedida, alteração na descendência; • - prática não realizada, com muitas implicações éticas. III- Terapia gênica • Adenosina desaminase (ADA) • Doença genética recessiva, rara, causada por um gene; • Gene ADA não funcional induz imunodeficiência com poucas semanas de vida; • Gene fundamental nos linfócitos onde produtos tóxicos resultantes da degradação do DNA não são transformados em produtos menos tóxicos; • Tratamentos convencionais menos efetivos; • Terapia gênica começou nos anos 90 mas poucas outras doenças resultaram em tratamentos efetivos. IV- Clonagem • A clonagem é um mecanismo de propagação natural: • Bactérias; • Na biologia molecular, a clonagem de bactérias é o processo que implica da construção molecular até o isolamento de uma célula transgênica; • Gêmeos univitelinos. IV- Clonagem • A clonagem pode ser de dois tipos: • Clonagem reprodutiva; • Clonagem terapêutica IV- Clonagem Reprodutiva • É uma questão controversa, pouco justificável do ponto de vista ético; • Banida em humanos • Clonagem Reprodutiva foi utilizada para gerar a Dolly IV- Clonagem Terapêutica • Células tronco • São células pouco diferenciadas e originam células especializadas; • Células embrionárias são exemplo de células tronco. Mesmo em adultos, alguns tecidos apresentam células tronco. IV- Clonagem Terapêutica • Células totipotentes/ multipotentes podem ser utilizadas para gerarem diferentes tipos celulares, e eventualmente substituir célula no organismo. IV- Clonagem Terapêutica • Utilização de células diferenciadas • Células diferenciadas que são mantidas em cultura de células e tratadas para se desdiferenciarem e então; • Induzidas para gerar diferentes tipos tipos celulares. 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