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FT430 – Microbiologia de Alimentos Lista de exercícios 1 Aula 1: Fatores intrínsecos e extrínsecos 1. Quais são os fatores intrínsecos e extrínsecos que controlam o desenvolvimento microbiano do salame embalado a vácuo, durante sua vida de prateleira? Explique como esses fatores afetam os micro-organismos. Figura 1. Processamento de salame (produto cárneo fermentado). Resposta: - Fatores intrínsecos: - Componentes antimicrobianos → atuam no controle da multiplicação de micro-organismos indesejáveis. - pH → pH mais baixo devido a ser um produto fermentado. - Presença de micro-organismos → culturas starter promovem a fermentação gerando ácidos que podem afetar a multiplicação de outros micro- organismos. - Fatores extrínsecos: - Umidade relativa – embalagem → protege o produto da troca de umidade com o ambiente. - Atmosfera – embalagem a vácuo → atua no controle de micro- organismos aeróbicos. Aula 2: Fungos e micotoxinas 1. A estrutura da parede celular e membrana celular dos fungos se difere das bactérias por apresentarem componentes específicos nesses micro-organismo. Com isso, quais são os dois componentes principais presentes na parede e membrana celular dos fungos que não estão presentes em bactérias? Resposta: Quitina na parede celular e ergosterol na membrana celular. 2. Por que os fungos são capazes de se desenvolver melhor do que as bactérias em alimentos como sucos e geleias? Resposta: Pois os fungos atuam em uma maior faixa de atividade de água e pH, do que as bactérias, podendo se desenvolver em alimentos com pH e Aw menor. Além disso são capazes de tolerar baixo pH, temperaturas e Aw e também possuem uma tolerância a conservantes. 3. Explique o que são micotoxinas e porque deve ser realizado o monitoramento destas em alimentos. Resposta: Micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por alguns fungos filamentosos. São metabólitos tóxicos que podem intoxicações agudas e crônicas em indivíduos que ingerem esses compostos. 4. Um laboratório de análise de alimentos realizou análise da presença de Aspergillus em amostras de paçoquinha para exportação, e não detectaram o fungo. Devido a ausência do fungo, as amostras estariam livres de micotoxinas? Explique. Resposta: Não, pois a ausência do fungo não representa a ausência de micotoxina. O fungo pode ser destruído no processo, porém as micotoxinas são termorresistentes e podem permanecer no produto. 5. De acordo com a figura abaixo, defina qual das imagens (A, B, C) corresponde aos micro-organismos: Aspergillus sp. Fusarium sp. e Rhizopus sp. Resposta: A – Rhizopus sp.; B – Fusarium sp.; C – Aspergillus sp. 6. Em uma indústria de refrigerantes foi detectada a presença de leveduras em amostras de produto final. Explique o porque da presença desse micro- organismo baseado nas características desse produto. Resposta: As leveduras podem crescer em refrigerantes devido ao pH baixo do produto e por serem unicelulares apresentam uma dispersão facilitada em produtos líquidos. Aula 3: Bactérias lácticas 1. Quanto à caracterização de bactérias lácticas: I. O gênero Lactobacillus compreende espécies homo e heterofermentativas. II. Leuconostoc sp., em no ágar sacarose, pode produzir um hexopolissacarideo, a dextrana. III. No teste de catalase as bactérias lácticas são negativas por não apresentarem a enzima catalase que decompõe o peróxido de hidrogênio (H2O2), em O2 e água. IV. Todas as bactérias lácticas são micro-organismos mesófilos e sua temperatura ótima de crescimento está em torno de 35°C. V. As bactérias lácticas são resistentes a pH baixo, sendo muito utilizada na fabricação de alimentos como iogurte, salame e picles. Assinale a alternativa correta: a) I, II, IV e V estão corretas. b) III, IV e V estão corretas. c) I, II, III e V estão corretas. d) Todas estão corretas. 2. Assinale abaixo a alternativa VERDADEIRA: a) Algumas espécies de bactérias lácticas são Gram positivas, entretanto o Leuconostoc é um micro-organismo Gram negativo. b) Os fermentos lácteos são culturas de bactérias lácticas selecionadas que são utilizadas na produção de alimentos. c) As bactérias lácticas são micro-organismos consideradas microaerófilas facultativas, tendo seu crescimento afetado pela presença de oxigênio. d) O único produto produzido no metabolismo de bactérias lácticas é o ácido láctico. 3. Explique qual a principal diferença no metabolismo de bactérias lácticas homofermentaticas e heterofermentativas. Resposta: A principal diferença são os produtos finais produzidos, onde as bactérias homofermentativas vão produzir ácido láctico, e as heterofermentativas além do ácido láctico vão produzir etanol e CO2. Aula 4: Pseudomonas 1. Uma indústria de produtos lácteos identificou características de deterioração em algumas peças de queijo fresco. Ao analisarem os produtos, a equipe do controle de qualidade verificou que o produto apresentava alguns pontos azuis em diversas partes do produto, e ao realizarem análises microbiológicas identificaram a presença de Pseudomonas spp. Explique quais as possíveis causas da deterioração e porque esse micro-organismo se desenvolveu nesse produto. Resposta: Pseudomonas spp. é psicrotrófico, podendo se desenvolver em produtos refrigerados. Além disso apresentam linhagens proteolíticas e lipolíticas, podendo utilizar as os substratos contidos nos queijos, e algumas espécies produzem pigmentos, podendo originar a coloração azul. É um micro- organismo que produz biofilme, podendo persistir nas indústrias de alimentos. 2. Como é possível diferenciar as espécies P. aeruginosa e P. fluorescens em análises microbiológicas? Resposta: Através da presença de pigmentos fluorescentes em ágar Pseudomonas. Aula 5: Bacillus e Clostridium 1. Assinale as alternativas como verdadeiras ou falsas. a) (F) Os esporos bacterianos apresentam a mesma estrutura dos esporos fúngicos. b) (V) Algumas espécies do gênero Bacillus, além de serem patógenos humanos também causam deterioração em alimentos, como por exemplo o B. cereus. c) (V) Alicyclobacillus é uma bactéria capaz de sobreviver em ambientes ácidos, sendo deteriorador de sucos de frutas. Pode produzir um odor medicinal nesses produtos, devido a produção de guaiacol. d) (V) Micro-organismos do gênero Clostridium são bactérias estritamente anaeróbias, podendo se desenvolver bem em alimentos embalados à vácuo. e) (V) C. botulinum pode causar duas doenças em humanos relacionada a alimentos, o botulismo alimentar e o botulismo infantil. 2. Explique por que o B. subtillis pode causar deterioração em pães. Resposta: Esse micro-organismo é produz enzimas amilases podendo ocasionar a hidrólise do amido de produtos de cereais, causando a deterioração chamada de “rope”, uma deterioração pegajosa que forma uma espécie de “fios” no produto. 3. Quais as diferenças das síndromes diarreica e emética causada por B. cereus? Resposta: A síndrome diarreica é caracterizada pela formação da toxina no intestino delgado do indivíduo infectado, causando sintomas de gastroenterite. Para gerar essa síndrome o tempo de incubação do micro-organismo é maior, e ela está mais associada ao consumo de carnes e derivados. Já a síndrome emética é caracterizada pela ingestão da toxina pré-formada no alimento. O tempo de incubação do micro-organismo é menor, e esta mais associada ao consumo de produtos amiláceos. 4. Por que é recomendado acidificar conservas vegetais para valores de pH < 4,5? Resposta: Pois é o pH limitante para o crescimento de Clostridium spp., visto que é um micro-organismo anaeróbio estrito, podendo se desenvolver em alimentos enlatados. Aula 6: Staphylococcus sp. e Listeria sp. 1. O ágar Baird Park(BP) é um meio seletivo, muito utilizado na microbiologia de alimentos. Foi utilizado esse meio para análise de leite cru, e após a incubação foram observadas colônias negras com um halo transparente ao redor. Qual o provável micro-organismo foi isolado e porque ocorreu o aparecimento do halo transparente? Resposta: S. aureus. Devido a hidrólise da lecitina - a adição de gema de ovo ao meio permite a observação da atividade da enzima lecitinase, produzida pelo micro-organismo. A produção dessa enzima é verificada pela presença de um halo de hidrólise da lecitina ao redor das colônias. Após 24h de incubação, este halo aparece como um anel de precipitado branco, devido à formação de sais de cálcio e magnésio com ácidos graxos liberados pela ação da enzima. 2. Quais os objetivos das análises de S. aureus em alimentos? Resposta: A contagem de S. aureus em alimentos pode ser feita com dois diferentes objetivos: Confirmar o envolvimento do alimento em surtos de intoxicação alimentar e/ou realizar o controle de qualidade higiênico-sanitária dos processos de produção de alimentos, condição em que S. aureus serve como indicador de contaminação pós-processo. 3. Qual objetivo do teste da coagulase na análise de Staphylococcus? Resposta: Verificar a produção da enzima coagulase. Diferenciar espécies (S. aureus, S. intermedius e S. hyicus são coagulase positivos). 4. Ao realizar o teste de motilidade para Listeria innocua, o que pode ser observado após a incubação? Resposta: Motilidade típica em guarda-chuva. 5. Assinale as alternativas como verdadeiras (V) ou falsas (F). a. (F) L. monocytogenes podem se multiplicar em uma ampla faixa de temperatura e são classificadas como mesófilos. Fermentam glicose com produção de ácido, porém não produzem gás e são consideradas móveis a 25ºC e imóveis a 35ºC. b. (F) L. innoccua é uma espécie patogênica com características de colônias, em meios seletivos, semelhantes a L. monocytogenes. c. (F) Ao observar uma lâmina de S.aureus ao microscópio podemos observar sua morfologia na forma de cocos com coloração rosa devido a ser um micro- organismo Gram-negativo. d. (V) O meio Oxford para Listeria apresenta diversos antibióticos que servem para inibir a microbiota do alimento. Além disso, o meio também apresenta esculina, tornando-se um meio ideal para desenvolvimento de micro-organismos do gênero Listeria, pois as espécies desse gênero são capazes de hidrolisar esse componente. e. (V) O meio DNase é utilizado para verificar se Staphylococcus sp. é capaz de produzir a enzima desoxiribonuclease. 6. Explique como ocorre a intoxicação alimentar por Staphylococcus. Resposta: Ocorre através da ingestão da enterotoxina pré-formada no alimento, devido à exposição do alimento contaminado a condições que favoreçam a produção da enterotoxina. Aula 7: Vibrio e Campylobacter 1. Micro-organismos do gênero Campylobacter possuem duas características importantes para seu crescimento. Quais são elas? Resposta: São termofílicos e microaerófilos. 2. Assinale as alternativas em verdadeiras ou falsas. a) (F) Bactérias do gênero Vibrio são micro-organismos estritamente halófilos, necessitando de concentrações em torno de 2% de NaCl para seu crescimento. b) (V) Além de possuir espécies que causam doenças veiculadas por alimentos, o gênero Vibrio possui espécies que também causam infecções de pele, como por exemplo o V. vulnificus. c) (V) Somente os sorogrupos O1 e O139 de V. cholerae causam a doença cólera. Os demais causam gastroenterite. d) (V) Os principais modos de transmissão de Campylobacter jejuni são através alimentos contaminados, especialmente frangos crus ou mal cozidos, leite cru, água não clorada e contato com animais infectados. Aula 8: Enterobactérias I 1. A partir da aula teórica e prática, relacione as colunas de acordo com as provas bioquímicas de enterobactérias. a) Teste de oxidase b) Teste Vogues-Proskauer (VP) c) Teste vermelho de Metila (MR) d) Teste de citrato e) Teste de Indol f) Teste TSI (e) O resultado é detectável a partir da formação de um anel vermelho após a adição do reagente de Kovacs. (d) Quando positivo apresenta a alcalinização do meio, indicada pelo azul de bromotimol. (a) Esse teste é caracterizado pela presença da enzima citocromo oxidase, permitindo a identificação rápida da família Enterobacteriaceae. (c) Detecção da produção de ácidos e outros produtos a partir da fermentação da glicose. (f) Caracterizado pela capacidade do micro-organismo de utilizar os carboidratos com ou sem a produção de gás. (b) A formação do complexo cor róseo-avermelhada é caracterizada a partir da reação de diacetil em presença de oxigênio ao reagir com KOH. 2. Assinale a alternativa INCORRETA. a) A fermentação da lactose é uma característica importante para caracterizar bactérias da família Enterobacteriaceae, visto que todos os micro-organismos desse grupo são capazes de fermentar a lactose. b) E. coli pode ser encontrada no trato intestinal de animais de sangue quente. c) A febre tifoide é uma doença causada por S. Typhi e S. Paratyphi. Outros sorotipos de Salmonella causam gastroenterite. d) Salmonella sp. é capaz de se multiplicam em temperatura de refrigeração. Aula 9: Enterobactérias II 1. Assinale a alternativa correta. a) Micro-organismos do gênero Shigella são amplamente distribuídas na natureza, sendo o seu controle muito difícil. b) Algumas espécies de Shigella são altamente infecciosas, sendo produtoras de toxina Shiga. c) Y. enterocolitica é um micro-organismo termófilo, não sendo capaz de se multiplicar em temperatura de refrigeração. d) C. sakazakii é capaz de se multiplicar em alimentos de baixa atividade de água.
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