Micropropagação de mirtáceas brasileiras

Prévia do material em texto

Letícia Frabetti Cardoso de Mello Tucunduva
Gomes
Orientador: Prof. Dr. Francisco de Assis Alves
Mourão Filho
MICROPROPAGAÇÃO DE MIRTÁCEAS BRASILEIRAS:
DESENVOLVIMENTO DE PROTOCOLO PARA CULTIVO
IN VITRO DE UVAIA (Eugenia pyriformis) E
GRUMIXAMA (Eugenia brasiliensis)
Programa de Pós-graduação em Fitotecnia
SUMÁRIO Introdução
Iniciação Científica
Mestrado
Etapas da micropropagação
Tipos de explantes e rotas regenerativas
Reguladores vegetais
Meios de cultura
INTRODUÇÃO
Bioma Mata Atlântica
Fonte: Elaborado pela autora
Espécies Frutíferas
Família das Mirtáceas;
Importância ecológica (GRESSLER
et al., 2006), econômica e social;
Alto valor nutritivo, adaptação
climática e resiliência - “Fruit and
Vegetables – Your Dietary
Essentials”, FAO (TAGUCHI et al.,
2020).
Hotspot 
 (MYERS et al., 2000)
Fruto de uvaia
Eugenia pyriformis
Fruto de grumixama
 Eugenia brasiliensis
Frutos de uvaia
Eugenia pyriformis
Produção de mudas de qualidade
(NASCIMENTO et al. 2008); 
Sementes recalcitrantes 
(AMORIN et al., 2020);
Dificuldade na propagação
vegetativa.
INTRODUÇÃO
Desafios
Sementes de Uvaia
Micropropagação
Grumixama
Eugenia brasiliensis
Seção transversal de
Grumixama apresentando calogênese. Brotação de uvaia
INICIAÇÃO CIENTÍFICA
Banho Ultrassônico
Transmissão de ondas para a
solução;
Cavitação;
Avaliar o efeito de diferentes
tempos de desinfestação, com e
sem banho ultrassônico (40 kHz), 
Explantes de Campomanesia phae
contaminados 
Antibióticos
Verificar o efeito do uso de antibióticos
no meio de cultura, sobre a
contaminação bacteriana, a oxidação e
o desenvolvimento de explantes;
Cefotaxima sódica e Timentin®.
Contaminação de explantes
Avaliação de métodos de
assepsia.
Procedimento de assepsia dos explantes
MESTRADO
Objetivos
 Desenvolver protocolo de micropropagação
para as espécies uvaia (E. pyriformis) e
grumixama (E. brasiliensis), utilizando-se, como
explantes, segmentos nodais de plântulas
germinadas in vitro e segmentos nodais e
folhas de plantas matrizes. 
Verificar a eficiência do uso de
antioxidantes na redução da oxidação
fenólica dos explantes; 
Avaliar o efeito de diferentes reguladores
vegetais nas fases de multiplicação e
enraizamento;
Determinar a melhor posição para a
introdução dos explantes (horizontal ou
vertical);
Verificar o melhor substrato para a
aclimatização das plantas
micropropagadas.
Avaliar a resposta de discos foliares à
diferentes reguladores visando a indução
de embriogênese;
A MICROPROPAGAÇÃO
 Cultura de Tecidos Vegetais
Ciência de desenvolver células, tecidos ou
órgãos isolados da planta-mãe em um meio
artificial (GEORGE; HALL; KLERK, 2008)
Micropropagação
Processo de propagação de plantas por meio
das técnicas de cultura de tecidos (GEORGE;
HALL; KLERK, 2008)
Totipotência das células
vegetais
Células vegetais tem a
capacidade de dar origem a
uma planta completa
(Gottlieb Haberlandt, 1902)
Gottlieb Haberlandt
(1854-1945)
Plantas matrizes: pulverização, poda,
fertirrigação;
Coleta dos explantes.
Introdução in vitro
Assepsia;
Preparo do explante;
Introdução in vitro.
ETAPAS DA MICROPROPAGAÇÃO
Plantas matrizes
 em estufa 
Preparo das plantas matrizes e
coleta dos explantes
Segmentos nodais de plantas matrizes
Procedimento de assepsia dos explantes
Introdução de segmento nodal em
tubo de ensaio
Ramos de grumixama 
Segmentos nodais de plântulas germinadas in vitro
Coleta das sementes
Desinfestação 
Árvores localizadas na ESALQ e na
Fazenda Areão; 
Armazenamento sob refrigeração
(±5°C).
Descascadas manualmente;
1 min em etanol 70%;
20 min em hipoclorito de sódio;
(NaClO) com 1,25% de cloro ativo.
Germinação 
Meio MS com 1/2 da concentração de
sais;
90 dias em sala de luz. 
Coleta de sementes de
grumixama e uvaia
Assepsia das sementes
descascadas
Semente germinando
ETAPAS DA MICROPROPAGAÇÃO
ETAPAS DA MICROPROPAGAÇÃO
Multiplicação
Preparo para o estabelecimento em
ambiente natural
Os explantes são induzidos a gerar
propágulos, tais como brotações e
embriões, capazes de dar origem a
uma nova planta.
Enraizamento;
Alongamento das brotações.
Aclimatização
Adaptação e transferência para o
ambiente externo.
Brotação de uvaia
Enraizamento de uvaia
(BROGIO, 2022)
Aclimatização de uvaia
(BROGIO, 2022)
TIPOS DE EXPLANTE E ROTAS REGENERATIVAS
Planta matriz
Meristema
Apice
caulinar
Seguimento
nodal
Tecido
somático Embriogênese 
indireta
Embriogênese 
indireta
Organogênese 
direta
Calogênese
Organogênese 
indireta
Cultura nodal
Cultura de
meristema
Cultura de
meristema
Principais métodos de micropropagação. Fonte: Adaptado de George, Hall e Klerk (2008).
TIPOS DE EXPLANTE E ROTAS REGENERATIVAS
Calogênese em Cereja-
do-Rio-Grande
Organogênese e embriogênese somática em
folha de Gaylussacia brasiliensis (Fritsche et
al., 2022) 
Embriões somáticos de Kalopanax
septemlobus em fase cotiledonar. 
(Park et al. 2015)
REGULADORES VEGETAIS
Substâncias químicas que atuam no
controle do crescimento das plantas,
influenciando a divisão celular, a
diferenciação e o alongamento dos
tecidos;
Ação semelhante a hormônios vegetais;
Principais reguladores: auxinas e 
citocininas;
Balanço de reguladores define o
desenvolvimento dos tecidos. 
Efeito de diferentes doses de reguladores em
Arabidopsis (Kakimoto et al., 2001)
MEIOS DE CULTURA
Função: fornecer substâncias necessárias
ao desenvolvimento in vitro de células,
tecidos e órgãos vegetais; 
Base nas necessidades minerais de plantas
inteiras, sofrendo algumas alterações para
atender as especificidades do cultivo in vitro;
Células cultivadas in vitro apresentam suas
vias metabólicas preservadas, mas alguns
processos, como a fotossíntese, possam
estar inativos;
 Composição: nutrientes minerais, sacarose,
vitaminas e reguladores vegetais.
Balança
pHmetro Componentes
Autoclave
VIDEO
PADLET
BIBLIOGRAFIA
ASSIS, S. M. P.; SILVEIRA, E. B.; MARIANO, R. L. R.; MENEZES, D.
Bactérias endofíticas: método de isolamento e potencial
antagônico no controle da podridão negra em repolho.
Summa Phytopathologica, Jaboticabal, v. 24, p. 216-220,
1998.
AMORIM, Isabela Pedroni; SILVA, João Paulo Naldi; BARBEDO,
Claudio José. As sementes de Eugenia spp. (Myrtaceae) e seus
novos conceitos sobre propagação. Hoehnea, v.47, São Paulo,
2020. 
GRESSLER, Eliana; PIZO, Marco A.; MORELLATO, L. Patrícia C..
Polinização e dispersão de sementes em Myrtaceae do Brasil.
Revista Brasileira de Botânica, São Paulo, v. 29, n. 4, p. 509-
530, dez. 2006. 
MISRA, Amarendra Narayan; MISRA, Meena. Em: Plants Tissue
Culture: Totipotency to Transgenic: Sterilizaton Techniques in
Plante Tissue Culture. Agrobios, 2012. 
FALKINER, F. R. Antibiotics in Plant Tissue Culture and
Micropropagation — What are We Aiming at? Developments
in Plant Pathology. Dordrecht: Springer Netherlands, 1997. p.
155–160. 
MURASHIGE, Toshio; SKOOG, Folke. A Revised Medium for a
Rapid Growth and Bioassays with Tobacco Tissues Cultures.
Plant Physiology, v.15, n.3, p.473-479, jul. 1962
MYERS, Norman; MITTERMEIER, Russell A.; MITTERMEIER
Cristina G.; FONSECA Gustavo A. B. da; KENT Jennifer.
Biodiversity hotspots for conservation priorities. Nature,
v.403, p.853–858, fev. 2000.
NASCIMENTO, Aline da Costa.; PAIVA, Renato; ABBADE, Letícia
Caravita; VARGAS, Daiane Peixoto; SOARES, Fernanda Pereira.
Micropropagação de Uvaieira (Eugenia pyriformis Cambess):
Efeitos do BAP e AIB. Revista Verde de Agroecologia e
Desenvolvimento Sustentável, Grupo Verde de Agricultura
Alternativa (Gvaa), Mossoró, v.3, n.2, p.20-26, abr./jun. 2008.
SAPTARI, R. T.; SINTA, M. M.; BUDIANI, A. In Vitro Propagation
of Anthurium Adreanum Cv. Nitta through Organogenesis.
AGRIVITA, Journal of Agricultural Science, v. 39, n. 2, p. 192–
200, 24 mar. 2017. 
TAGUCHI, M.; BEED, F. HASSAN, S.; TELEMANS, B. Growing
Green. Em: Fruit and Vegetables – Your Dietary Essentials:
The International Year of Fruits and Vegetables 2021
Background paper. Food and Agriculture Organization of the
United Nation - FAO, Roma, 2020.Obrigada!