PONTIFICIA_UNIVERSIDADE_CATOLICA_DE_MINA

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PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS CURSO DE BIOMEDICINA
PRÁTICA 9
GEL DE POLIACRILAMIDA
Claudymara Queiroz de Souza Xavier
Gabriela Geoffroy Netto Silva
Jessica Tavares Santos
BETIM
2016
Claudymara Queiroz de Souza Xavier
Gabriela Geoffroy Netto Silva
Jessica Tavares Santos
PRÁTICA 9
GEL DE POLIACRILAMIDA
Relatório, apresentado a disciplina de Biologia Molecular,
do curso de Biomedicina, da Pontifícia Universidade Católica De Minas Gerais.
Professora: Alzira Cecílio
BETIM
2016
1. INTRODUÇÃO
A eletroforese é considerada uma técnica versátil para a análise de proteínas, sendo de fácil aplicação em estudos que abordam a variação genética presente nos organismos. Essa técnica, desenvolvida inicialmente por Kunkel e Teselius no ano de 1951, e mais tarde aperfeiçoada com a introdução de uma camada suporte, de amido (Smithies, 1955) e de poliacrilamida (Ornstein & Davis, 1962), citado por Steward et al. (1965), consiste basicamente na migração diferencial de proteínas em campo elétrico, onde a velocidade de deslocamento das moléculas depende da carga elétrica lí- quida de sua superfície externa, seu tamanho e forma. A revelação de bandas é feita com corantes, mostrando tamanho, intensidade da cor e distância do ponto de aplicação, os quais são usados para comparar as amostras. Esse princípio vem sendo amplamente utilizado para o estudo de proteínas nativas e desnaturadas (Weber & Osborn, 1975).
A técnica do gel de poliacrilamida em gradiente facilita ao pesquisador ter um completo domínio sobre as condições de porosidade do gel, possibilitando fazer altera- ções para a separação das proteínas e, conseqüentemente, obter melhor padrão eletroforético, portanto é uma técnica com grande poder de separação molecular, pois possibilita separar não somente com base na carga da proteína, mas explora melhor as diferenças no tamanho das cadeias polipeptídicas (Markert & Moller, 1959).
1. OBJETIVOS
· Realizar a eletroforese no gel de poliacrilamida; 
· Aprender as técnicas para montagem da poliacrilamida; 
· Analisar a corrida eletroforética para visualizar as bandas que aparecerem;
· Analisar a coloração com o nitrato de prata. 
· 
1. MATERIAIS E MÉTODOS
Protocolo presente na apostila de Biologia Molecular.
1. RESULTADOS
Após os procedimentos realizados, nota-se que aas bandas ficaram separadas pois correram por pouco tempo.
IMAGEM 1: Suporte completo para colocar as placas com gel de Poliacrilamida.
IMAGEM 2: Cuba vertical de eletroforese.
IMAGEM 3: Visualização das bandas.
1. DISCUSSÃO
Após vários procedimentos para montar o gel de poliacrilamida, usando soluções fixadoras 1 e 2, solução oxidante, água destilada, solução de prata, solução reveladora e solução secadora, obtivemos resultados sobre as bandas, mas pelo pouco tempo da corrida eletroforética não conseguimos observar claramente o resultado. Vimos que apareceram bandas na amostra, mas devido a grande aproximação entre elas, pareciam ter ficado emboladas.
1. QUESTÕES
· Qual a constituição do gel de poliacrilamida?
A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida. Para preparar este gel, basta adicionar os dois polímeros nas concentrações desejadas em um suporte de vidro e na presença de um catalisador.
· Quais os principais tipos de géis usados em Biologia Molecular? 
- Gel de Poliacrilamida
- Gel de Agarose
· Como é descartado o nitrato de prata? Por quê?
O nitrato de prata é descartado em um recipiente próprio, por ser um metal pesado contamina o ambiente.
1. CONCLUSÕES
Este trabalho é uma abordagem prática na qual é apresentada a utilização de gel em poliacrilamida, técnica de eletroforese, que permitiu a visualização das bandas, e estas ficaram juntas pois correu por pouco tempo. Esta técnica é utilizada,pois o gel poliacrilamida tem a capacidade de separar fragmentos muito pequenos de DNA e que apresentam uma mínima diferença de massa, além disso o gel pode recuperar e purificar determinada amostra.
Apesar das vantagens, o gel de agarose é mais utilizado pois a poliacrilamida é muito tóxica e difícil de ser preparada. Neste tipo de gel a corrida é feita em cubas verticais, e o carante utilizado é o mesmo da eletroforese em gel de agarose.
A eletroforese é de grande importância para as ciências, permitindo a separação e identificação de moléculas de DNA por meio da diferença de velocidade de migração, identificação de pessoas em testes de paternidade pela comparação de DNA, na indústria farmacêutica e até mesmo na agropecuária.
1. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
WEBER,K.; OSBORN, M. Proteins and sodium dodecyl sulfate:molecular weight determination on polyacrylamide gels and related procedures. In: WEBER, K. The proteins. New York: Academic Press, 1975. v.1, p.179-233.
MARKET, C.L.; MOLLER, F. Multiple forms of enzymes: tissue, ontogenic, and species specific patterns. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, v.45, p.753-63, 1959.
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