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Prática de Identificação de Carboidratos e Proteínas Iago Cardoso - Monitor - S2 Bioquímica Reação com Iodo (Reagente Lugol) Reagente de cor Amarela Reage com carboidratos complexos Na presença de: Amido = Cor AZUL Glicogênio = Cor VERMELHA Não reage com Celulose, mono e dissacarídeos 1 3 4 2 Lugol Água Sacarose Glicose Amido Colocar Lugol nos tubos contendo os seguintes conteúdos: Lugol Água Sacarose Glicose Amido Reações obtidas: A água serve só para saber a cor do reagente Não reage como mono e dissacarídeos Reage com o Amido E se adicionar saliva e aquecimento aos tubos com amido e lugol? Amido + Lugol + Saliva 37ºC (temperatura corporal normal) Amido + Lugol + Saliva 100ºC E se adicionar saliva e aquecimento aos tubos com amido e lugol? Amido + Lugol + Saliva 37ºC Amido + Lugol + Saliva 100ºC Cor AMARELO Por que? Na saliva, tem a presença da AMILASE SALIVAR, então ao misturar o amido com a saliva, a amilase vai iniciar a digestão do amido, então a cor que permanece no tubo é a do reagente lugol, amarelo. Cor AZUL Por que? Embora tenha a amilase salivar, ao aumentar a temperatura para 100ºC, a enzima sofrerá uma desnaturação, perdendo sua função. Então o Lugol conseguirá reagir normalmente com o amido, no qual fica azul. Aquecer o Amido com Iodo O amido é formado por Amilose e Amilopectina. Na amilopectina tem a presença de espirais (como mostrado na imagem). o Iodo, quando em contato com o amido, entra dentro desses espirais (Iodo representado pelas bolas). Quando o Iodo está nos espirais, se adquire a cor AZUL, que é o que acontece na reação de Lugol com Amido, o Iodo entra nos espirais. Iodo Aquecer o Amido com Iodo Ao aquecer o amido com o Iodo, esse Iodo irá sair dos espirais, o que irá tornar a reação INCOLOR. Ao diminuir a temperatura, a reação pode retornar para a coloração azul. Iodo Não confundir com a questão da saliva, aqui não temos saliva presente, apenas Iodo e amido Identificação de Carboidratos Redutores São carboidratos que possuem um grupamento glicosídico livre Capazes de reduzir íons Cu2+, Ag+, Bi+2 (podem receber) Reagente de Benedict Cor: Azul Reage com monossacarídeos, principalmente glicose, formando uma cor VERMELHA/MARROM 1 3 4 2 Grupamento Glicosídico Livre Grupo Carbonila (cadeia aberta) ou Hidroxila (cadeia fechada) Hidroxila anomérica livre Reação de Benedict Água Sacarose Glicose Reagente de Benedict Colocar o reagente de Benedict nos tubos contendo os conteúdos e aquecê-los: Reação de Benedict Água Sacarose Glicose Reagente de Benedict Reações obtidas: A sacarose, na teoria não reage, mas na prática reage um pouco, mas por ter glicose em sua composição, pode-se perceber uma coloração “verde vômito”. Reage com com o benedict, ficando uma cor vermelha terra/telha/marrom Pesquisa da ligação peptídica Identifica subs. Que contém no mínimo 2 ligações peptídicas Reagente de Biureto Cor: Azul Na presença de proteínas Reage, formando Cor: Lilás/Roxo Utilizado para verificar BCAA 1 3 4 2 Reagente de Biureto Água Refrigerante Caseína L-Prolina Colocar Reagente de Biureto nos tubos contendo os seguintes conteúdos: Clara de ovo Reagente de Biureto Água Refrigerante Caseína L-Prolina Reações obtidas: Clara de ovo Reagente de Biureto Água Refrigerante Caseína L-Prolina Reações obtidas: Clara de ovo Não possuem ligações peptídicas. Reage, ficando Lilás. Proteína do leite Não reage, pois é um aminoácido isolado, então não possui ligações peptídicas Reage, ficando Lilás. Possui a proteína Albumina BCAA Suplemento que possui apenas AMINOÁCIDOS ISOLADOS Pode ser perguntado o seguinte: Há 4 marcas de BCAA, quer descobrir quais são fiéis e possui apenas aminoácidos isolados, e quais foram alterados A marca que reagir com o reagente de Benedict e ficar lilás, é a que possui alteração, pois foi encontrado proteína em uma fonte que deveria ter apenas aminoácidos Obrigado Boa prova! Monitor: Iago Cardoso de Assis -S2