MICROBIOLOGIA CLÍNICA - EPA

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Foi encaminhada ao laboratório uma amostra de urina de jato médio para realização do parcial de urina no respectivo setor, uma bacterioscopia do sedimento urinário e a cultura. A seguir está a placa da cultura após 24 horas de incubação a 35+-2°C em aerobiose e a imagem da bacterioscopia do sedimento urinário corada pela técnica de Gram.
1) Descreva de que forma seria reportado o resultado da quantificação da cultura.
Figura 1 – Urina semeada com alça calibrada de 0,001 ml em ágar cromogênico.
Fonte: A autora.
Resposta: O resultado da quantificação da cultura da urina semeado em ágar cromogênico é > 100.000 UFC/mL. Nesta imagem percebemos as colônias púrpuras (Escherichia coli). Havendo crescimento, proceder à contagem de colônias no meio (caso a metodologia o exija), multiplicando-se o número de colônias contadas pelo fator de diluição da alça para obter o resultado em Unidades Formadoras de Colônias por mililitro de amostra (UFC/mL); exemplo: usando-se uma alça 1/100, caso sejam contadas 25 colônias na superfície do meio, multiplica-se este número por 100 e obtém-se o resultado de 2500 UFC/mL. Meio de cultura destinado ao cultivo, contagem e identificação presuntiva microrganismos diversos. Didaticamente pode-se considerar a identificação da Escherichia coli, grupo KES (Klebsiella, Enterobacter e Serratia), PPM (Proteus, Providencia e Morganella), Pseudomonas aeruginosa e isolamento de outros BGN (Citrobacter, Hafnia etc), CGP (Staphylococcus, Streptococcus etc.) e leveduras como a Candida sp..
2) Descreva a bacterioscopia do sedimento que foi coletado a partir da cultura, citando a forma bacteriana e classificação do Gram.
Figura 2 - Lâmina do sedimento urinário corado pela técnica de Gram. Aumento de 1000x
Fonte: Imagem autoral
Resposta: a bacterioscopia do sedimento da cultura de urina semeada foi encontrado Bacilos Gram Negativos (BGN), sendo que a coloração de gram acima apresentou os bacilos em forma de bastonetes e a confirmação da Escherichia coli pela análise da lâmina de urina. 
As bactérias gram-negativas possuem uma parede fina que permite a descoloração do corante violeta genciana pelo descorante álcool-acetona e posterior coloração com o corante safranina ou fucsina adquirindo assim uma coloração róseo-avermelhado. Sugere-se que ao observar em um aumento de 100x em 20 a 40 campos a quantidade igual ou superior a 25 células por campo, o resultado pode ser reportado como 3+ ou (+++).
Observação: o uso de meios cromogênicos permite uma melhor avaliação de amostras com múltiplos contaminantes (facilita sua separação por cores) e sem recorrer ao uso de agentes inibidores de crescimento. Excetuando se as colônias características da E.coli, todos os demais grupos demandam a identificação pos sistemas de identificação bioquímica. 
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 
1. ANVISA, Descrição dos Meios de Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos; 
2. Oplustil, C.P., Zoccoli, C.M., Tobouti, N.R., e Sinto, S.I. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica, Sarvier, São Paulo, 2000. 
3. MERCK. Manual de medios de cultivo. Darmstadt, 1990
A técnica de semeadura quantitativa com alça calibrada é utilizada principalmente para amostras de urina. Nesta técnica o inóculo é depositado no centro da placa em uma linha vertical, e em seguida é realizado o estriamento na horizontal em zigue-zague partindo da parte superior em direção à parte inferior da placa. Neste tipo de semeadura o resultado deve ser reportado quantitativamente em UFC/ml (Unidades Formadoras de Colônia por mililitro), desta forma caso cresçam 15 colônias em uma placa, sendo a amostra inoculada com alça de 0,001 ml, o resultado quantitativo será reportado como 15.000 UFC/ml, caso não seja possível contar o resultado é reportado como superior a 100.000 UFC/ml. O resultado da semeadura por esgotamento pode ser reportado de forma semiquantitativa. Havendo crescimento apenas na primeira área reportar o resultado como raras, 1+ ou crescimento escasso. Havendo crescimento nas áreas 1 e 2 reportar o resultado como algumas, 2+ ou crescimento moderado. Caso o crescimento ocorra nas áreas 1, 2 e 3 reportar o resultado como numerosas, 3+ ou crescimento abundante.
Os agentes etiológicos mais comuns que causam esse tipo de infecção são as enterobactérias como a Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus spp. e Enterobacter spp. Entre os Gram-positivos os mais frequentes são os estafilococos, destacando-se o Staphylococcus saprophyticus, além dos Enterococcus spp.
Meio de cultura destinado ao cultivo, contagem e identificação presuntiva microrganismos diversos. Didaticamente pode-se considerar a identificação da Escherichia coli, grupo KES (Klebsiella, Enterobacter e Serratia), PPM (Proteus, Providencia e Morganella), Pseudomonas aeruginosa e isolamento de outros BGN (Citrobacter, Hafnia etc), CGP (Staphylococcus, Streptococcus etc.) e leveduras como a Candida sp..
a) Colônias púrpuras: Escherichia coli. 
b) Colônias azul-esverdeadas: fazer a coloração de Gram, se bacilos Gram negativos trata-se do grupo Klebsiella - Enterobacter - Serratia, se CGP e colônias pequenas associa-se ao gênero Enterococcus sp ou Streptococcus agalactiae. A prova da Bile Esculina positiva ou crescimento em MTS (meio de tolerância ao sal) caracterizam Enterococcus sp e a prova de Camp positiva caracteriza S. agalactiae. 
c) Colônias brancas: executar coloração de Gram: - Gram Positivos: suspeita-se de Staphylococcus sp, Streptococcus sp ou Candida sp. Utilizar provas de identificação compatíveis com os gêneros em suspeita. - Gram Negativos: executar prova do indol com uma gota do reagente de Kovacs, se positiva (coloração rósea ou avermelhada) pode se tratar de E. coli não produtora de cromógeno. Como existem inúmeras possibilidades de gêneros, 
d) Colônias verde-musgo: Características da Pseudomonas aeruginosa. 
e) colônias marrons: Características das bactérias do grupo PPM, Proteus, Providencia e Morganella.
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