6_Imunoensaios liticos

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<p>Imunoensaios líticos</p><p>Imunologia Clínica</p><p>Profa Elisa Flávia Bailão</p><p>Universidade Estadual de Goiás</p><p>UnUCET</p><p>IMUNOENSAIOS LÍTICOS</p><p>¢  Permitem a detecção de antígenos ou anticorpos,</p><p>apresentando como produto final, presença ou</p><p>ausência de hemólise:</p><p>¢ Proteínas do sistema complemento para causar</p><p>citotoxicidade de hemácias sensibilizadas com</p><p>anticorpos anti-hemácias;</p><p>¢ Ação hemolítica de toxinas produzidas por</p><p>bactérias.</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO</p><p>¢  Como a via clássica depende de anticorpos, podemos</p><p>detectar esses anticorpos in vitro utilizando o</p><p>mecanismo de ativação do sistema complemento:</p><p>RFC – Reação de Fixação do Complemento;</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO – CH50</p><p>¢  Mede a hemólise a 50%, em comparação com a</p><p>hemólise total da mesma quantidade de hemácias</p><p>em água;</p><p>¢ Esse ensaio só é necessário quando há suspeita de</p><p>imunodeficiência funcional do sistema complemento;</p><p>¢  Para determinação de cada componente individual</p><p>d o s i s t e m a c o m p l e m e n t o , p o d e - s e u s a r</p><p>imunoprecipitação ou processos automatizados,</p><p>eficientes para quantificar essas proteínas</p><p>circulantes.</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO – CH50</p><p>¢  Todo o processo de coleta e ensaio deve ocorrer em</p><p>temperaturas baixas, inclusive a retração do</p><p>coágulo, uma vez que os componentes do sistema</p><p>complemento, especialmente o C2, são termolábeis;</p><p>¢  Diluições sucessivas da amostra são incubadas com</p><p>o sistema hemolítico/ indicador (hemácias de</p><p>carneiro + anticorpos anti-hemácias);</p><p>¢ A intensidade de hemólise é determinada por</p><p>espectrofotometria.</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO – CH50</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM SISTEMA</p><p>COMPLEMENTO – CH50</p><p>¢  Os componentes do sistema complemento estão em</p><p>c o n c e n t r a ç ã o a u m e n t a d a e m p r o c e s s o s</p><p>imunoinflamatórios de fase aguda e em vários</p><p>processos crônicos, especialmente auto-imunes;</p><p>¢ Raramente, alguns componentes podem se</p><p>apresentar em concentrações reduzidas por</p><p>deficiências genéticas.</p><p>REAÇÃO DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO</p><p>¢  Pode ser usada para detectar a presença ou mesmo</p><p>semiquantificar antígenos ou anticorpos quando um</p><p>dos elementos presentes é conhecido, revelando</p><p>hemólise ao final do teste;</p><p>¢ O sistema indicador é usado para revelar se houve</p><p>ou não o consumo do sistema complemento pelo</p><p>imunocomplexo que está sendo pesquisado.</p><p>REAÇÃO DE FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO</p><p>Amostra positiva Amostra negativa</p><p>REAÇÃO DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO</p><p>¢ A amostra deve ser coletada após jejum de 12 h:</p><p>lipídeos e quilomícrons são inativadores do</p><p>complemento;</p><p>¢ A amostra deve ser aquecida a 56 oC por 30 min</p><p>para inativar o próprio sistema complemento;</p><p>¢  O antígeno deve ser solúvel e não possuir atividade</p><p>inibitória: preferem-se extratos alcoólicos;</p><p>¢ A fonte usual de sistema complemento é soro de</p><p>cobaia, coletado e mantido a baixas temperaturas;</p><p>¢ As hemácias do sistema indicador ou hemolítico</p><p>devem estar íntegras e dentro da validade e os</p><p>anticorpos devem estar em excesso.</p><p>REAÇÃO DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO</p><p>¢ Falso-positivos:</p><p>¢ Falso-negativos:</p><p>¢ Perda de atividade do complemento;</p><p>¢ Diluições inadequadas;</p><p>¢ Contaminação em soluções;</p><p>¢ Sensibilização insuficiente das hemácias.</p><p>¢ Hemácias fragilizadas;</p><p>¢ Soro não-inativado;</p><p>¢ Não-adição do antígeno.</p><p>REAÇÃO DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO</p><p>¢ A técnica é trabalhosa e com grande número de</p><p>variáveis, o que a torna pouco atraente para a atual</p><p>rotina laboratorial;</p><p>¢ Ainda tem importância na pesquisa de anticorpos</p><p>fixadores de complemento em instituições de</p><p>pesquisa, especialmente no estudo de algumas</p><p>viroses e micoses sistêmicas.</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM TOXINAS</p><p>BACTERIANAS – INIBIÇÃO DA HEMÓLISE</p><p>¢ Pesquisa de anticorpos antiestreptolisina O (ASO ou</p><p>ASLO);</p><p>¢ Auxílio diagnóstico de infecções crônicas por</p><p>Streptococcus β-hemolítico do grupo A e sua</p><p>associação com febre reumática;</p><p>¢ Produção de hemolisinas extracelulares.</p><p>ENSAIOS LÍTICOS COM TOXINAS</p><p>BACTERIANAS – INIBIÇÃO DA HEMÓLISE</p><p>Amostra</p><p>Amostra negativa</p><p>Amostra positiva</p><p>DÚVIDAS???</p>