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Testes sorológicos na patologia 
clínica
Apresentação
Diversas patologias clínicas podem ser associadas ao sistema imunológico, seja pela resposta imune 
do hospedeiro diante de uma infecção, com resposta celular e produção de anticorpos e citocinas, 
seja pela formação de autoanticorpos em doenças autoimunes. Independentemente da patologia 
clínica investigada, os métodos sorológicos empregados utilizam como princípio básico a interação 
entre antígenos e anticorpos para confirmação da patologia analisada.
Dessa forma, é de extrema importância que o laboratório de imunologia clínica conheça as 
características e particularidades das principais patologias clínicas diagnosticadas com ensaios 
sorológicos, para que a escolha do método a ser empregado e os parâmetros relacionados à 
interpretação desses testes sejam os mais corretos possíveis, garantindo confiabilidade para o 
diagnóstico entregue ao paciente.
Nesta Unidade de Aprendizagem, você vai conhecer as principais patologias clínicas que podem ser 
diagnosticadas com exames sorológicos e identificar os principais testes sorológicos utilizados para 
o diagnóstico em ambiente laboratorial. Além disso, vai aprender os parâmetros mais utilizados na 
interpretação dos resultados desses testes.
Bons estudos.
Ao final desta Unidade de Aprendizagem, você deve apresentar os seguintes aprendizados:
Identificar as principais patologias clínicas diagnosticadas com exames sorológicos.•
Reconhecer os principais testes sorológicos utilizados na patologia clínica.•
Descrever os parâmetros mais utilizados na interpretação dos testes sorológicos.•
Desafio
Os hemocentros, ou bancos de sangue, são instituições públicas ou privadas que desenvolvem 
atividades de hemoterapia e hematologia, com a finalidade de fornecer sangue (seus componentes 
e derivados) aos hospitais da rede pública ou privada.
No Brasil, a Resolução RDC no 158, de 4 de fevereiro de 2016, da Agência Nacional de Vigilância 
Sanitária (Anvisa), determina o regulamento técnico para os procedimentos hemoterápicos, 
incluindo captação, proteção ao doador e ao receptor, coleta, processamento, estocagem, 
distribuição e transfusão do sangue, de seus componentes e derivados, para diagnóstico, prevenção 
e tratamento de doenças.
Acompanhe a situação a seguir:
Sendo assim, responda:
a) Por que a janela imunológica deve ser considerada na realização da triagem sorológica?
b) Por que os ensaios sorológicos utilizados em hemocentros priorizam a sensibilidade?
Infográfico
As hepatites virais são um problema de saúde pública no Brasil. São infecções que acometem o 
fígado, sendo geralmente silenciosas. Porém, podem manifestar-se com cansaço, febre, tontura, 
vômitos, dor abdominal, pele e olhos amarelados, urina escura e fezes claras. Seu diagnóstico pode 
ser baseado em marcadores sorológicos, que variam conforme o vírus causador da infecção.
Neste Infográfico, você vai conhecer mais informações sobre os diferentes marcadores sorológicos 
para as hepatites virais mais comuns no Brasil.
 
Aponte a câmera para o 
código e acesse o link do 
conteúdo ou clique no 
código para acessar.
https://statics-marketplace.plataforma.grupoa.education/sagah/a631f4ac-74a2-4984-aa0f-f338a30403ab/a77a697c-fdab-4797-9078-e46381e1e9c3.jpg
Conteúdo do livro
A imunologia clínica utiliza diversas metodologias, baseadas na interação entre antígenos e 
anticorpos, para a investigação de patógenos ou anticorpos desenvolvidos em resposta a infecções 
e inflamações. Entre as patologias investigadas, estão a síndrome da imunodeficiência adquirida 
(AIDS), a dengue, a artrite reumatoide, o lúpus eritematoso sistêmico, as hepatites e a 
toxoplasmose, entre outras. Todas com importantes características clínicas e particularidades que 
devem ser conhecidas e consideradas para a escolha do ensaio sorológico a ser utilizado.
No capítulo Testes sorológicos na patologia clínica, base teórica desta Unidade de Aprendizagem, 
você vai conhecer as principais patologias clínicas diagnosticadas com exames sorológicos e 
reconhecer os principais testes sorológicos usados para essa finalidade. Além disso, vai aprender os 
parâmetros mais utilizados na interpretação desses testes.
Boa leitura.
IMUNOLOGIA 
CLÍNICA
OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM
 > Identificar as principais patologias clínicas diagnosticadas com exames 
sorológicos.
 > Reconhecer os principais testes sorológicos utilizados na patologia clínica.
 > Descrever os parâmetros mais utilizados na interpretação dos testes so-
rológicos.
Introdução
A imunologia é uma área de estudo abrangente que investiga o sistema imu-
nológico e seus diversos componentes e funções. Dentro desse campo, 
a imunologia clínica aborda as técnicas, metodologias e ensaios sorológicos 
disponíveis para o diagnóstico de patologias imunológicas, desde doenças autoi-
munes, reumáticas e infecciosas até dosagens hormonais. Sendo assim, cabe ao 
imunologista clínico conhecer as principais metodologias utilizadas em patologias 
relacionadas ao sistema imune. 
Neste capítulo, você vai estudar as principais patologias clínicas diagnosticadas 
com exames sorológicos, aprendendo a reconhecer os principais testes soroló-
gicos utilizados e conhecendo os parâmetros mais empregados na interpretação 
desses testes. 
Testes sorológicos 
na patologia clínica
Miriãn Ferrão Maciel Fiuza
Principais patologias clínicas diagnosticadas 
com sorologia
O termo imunidade, do ponto de vista biológico, significa proteção contra do-
enças, especialmente doenças infecciosas. As células e moléculas responsáveis 
pela imunidade formam o sistema imune, e sua resposta conjunta e coordenada 
a substâncias estranhas é denominada resposta imune. A imunidade pode ter 
duas principais divisões: imunidade inata e imunidade adaptativa. 
A imunidade inata atua como primeira linha de defesa contra micror-
ganismos. Não promove memória imunológica, mas é capaz de responder 
rapidamente a infecções, e está presente desde o nascimento, ou seja, mesmo 
antes de uma infecção acontecer. É formada por barreiras físicas, como a pele, 
e químicas, que incluem lágrimas, saliva e secreções ácidas do estômago e 
do trato vaginal. Além disso, células como os neutrófilos, os macrófagos e as 
células dendríticas, e proteínas sanguíneas, incluindo proteínas do sistema 
complemento e outros mediadores da inflamação, também compõem essa 
forma de imunidade (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; LEVINSON, 2016). 
A imunidade adaptativa, também chamada de imunidade adquirida ou 
específica, ocorre somente após a exposição a um agente infeccioso. Ela se 
aprimora e aumenta em intensidade e capacidade defensiva a cada exposição 
consecutiva a um microrganismo particular. Essa forma de imunidade tem 
duas importantes características: a especificidade, que permite identificar 
diferentes substâncias, e a memória, ou seja, sua capacidade de responder 
mais ativamente a exposições repetidas ao mesmo patógeno. 
A imunidade adaptativa é composta por linfócitos TCD4+ (auxiliares), linfó-
citos TCD8+ (citotóxicos), linfócitos B, plasmócitos e produtos secretados, como 
os anticorpos. Além disso, os macrófagos e outras células apresentadoras de 
antígenos (APCs), como as células dendríticas, também participam da imuni-
dade adaptativa. Quando as APCs fagocitam e digerem os microrganismos, 
fazem parte da imunidade inata, mas quando apresentam o antígeno Ag às 
células TCD4+, estão fazendo parte da ativação da imunidade adaptativa. 
A partir disso, o linfócito TCD4+ estimula o linfócito TCD8+ a provocar a apop-
tose de células infectadas com o Ag, além de induzir os linfócitos B a se 
diferenciarem em plasmócitos secretores de anticorpos. Após a resolução 
do quadro de infecção, permanecem no organismo os linfócitos de memória, 
que ativam uma resposta imunológica muito mais rápida e eficaz no segundo 
contato com o Ag. O Quadro 1, a seguir, apresenta as principais diferenças entre 
as imunidades inata e adaptativa (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; LEVINSON,2016; SOARES; ARMINDO; ROCHA, 2014).
Testes sorológicos na patologia clínica2
Quadro 1. Principais características das imunidades inata e adaptativa
Característica Imunidade inata Imunidade adaptativa
Células Macrófagos, células 
dendríticas, células NK 
e neutrófilos
Macrófagos, células 
dendríticas, linfócitos B 
e linfócitos T
Início de ação Imediato Lento
Especificidade Não Sim
Memória Não Sim
Eficiência Não aumenta Aumenta com a 
exposição
Fonte: Adaptado de Levinson (2016).
No laboratório clínico, o diagnóstico de certeza de um processo infeccioso 
se dá pela identificação do microrganismo nos tecidos ou fluídos biológicos 
dos hospedeiros. Entretanto, nem sempre isso é possível, quer por ausência 
do agente infeccioso, por falta de sensibilidade das técnicas utilizadas, por 
falhas metodológicas, pelos longos períodos de execução ou pelos custos 
envolvidos no processo. Para isso, exames sorológicos podem ser utilizados, 
oferecendo vantagens na pesquisa de antígenos, anticorpos ou imunocom-
plexos, como rapidez, simplicidade de execução e baixo custo operacional. 
Os testes imunológicos podem ser aplicados em diversas investigações, 
como transplante e rejeição de órgãos/tecidos, imunodeficiências e doenças 
reumáticas, autoimunes e infecciosas (FERREIRA; MORAES, 2013; HENRY, 2013). 
Acompanhe a seguir as principais patologias clínicas diagnosticadas com 
exames sorológicos.
Infecção por HIV
Os vírus da imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2) provocam uma doença 
infecciosa crônica que apresenta diferentes características clínicas, imuno-
lógicas e virológicas ao longo do seu período evolutivo, pois há variações 
entre hospedeiros e o tipo de vírus. A transmissão do HIV ocorre através de 
fluidos corporais infectados, sendo que os mais importantes são o sangue, 
que contém de 1 a 100 mil vírus por mL, e o sêmen, com cerca de 10 a 50 vírus 
por mL (MIRANDA, 2003; TORTORA; FUNKE; CASE, 2017). 
Testes sorológicos na patologia clínica 3
O HIV infecta vários tipos de células, incluindo as TCD4+ auxiliares, macró-
fagos e células dendríticas. A infecção inicia de forma aguda, e é controlada 
parcialmente pela resposta imune do hospedeiro, avançando para uma doença 
crônica progressiva de tecidos linfoides periféricos. O desenvolvimento da 
infecção pode ser dividido em três fases clínicas. Na primeira, a quantidade 
de RNA viral por mL de plasma sanguíneo pode chegar a mais de 10 milhões 
na primeira semana. A infecção pode ser assintomática ou causar edema dos 
linfonodos (linfadenopatia). Na segunda fase, o número de células TCD4+ 
diminui constantemente e a replicação do HIV continua em nível baixo. Além 
disso, poucas células infectadas liberam o microrganismo, e alguns sintomas 
podem surgir, como febre e diarreia persistente. Já na terceira fase, a con-
tagem de células TCD4+ fica abaixo de 200 células/µL, indicando síndrome 
da imunodeficiência adquirida (aids). O diagnóstico da infecção pode ser 
realizado por meio de imunoensaios (IEs), como o ensaio imunoenzimático 
indireto (Elisa indireto) (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; BRASIL, 2016; TORTORA; 
FUNKE; CASE, 2017).
Artrite reumatoide
A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória que causa lesão nas 
articulações das extremidades, envolvendo os ombros, dedos das mãos e 
pés, punhos, joelhos e tornozelos. A AR é uma doença complexa em que 
fatores genéticos do hospedeiro e exposições ambientais contribuem para 
a quebra de tolerância a autoantígenos. Imunocomplexos chamados fatores 
reumatoides, formados pela ligação de imunoglobulina M (IgM) e imuno-
globulina G (IgG), são depositados nas articulações. Essa deposição causa 
uma inflamação crônica que provoca a destruição da cartilagem e de ossos 
articulares, gerando os efeitos característicos da doença. O diagnóstico da 
artrite reumatoide baseia-se na detecção de fator reumatoide no soro, como, 
por exemplo, pela técnica de turbidimetria (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; 
LEVINSON, 2016). 
Lúpus eritematoso sistêmico (LES)
O LES é uma doença autoimune crônica multissistêmica e recidivante (que 
reaparece), afetando predominantemente o gênero feminino. Assim como a AR, 
trata-se de uma condição complexa, em que fatores genéticos e ambientais 
contribuem para a quebra de tolerância de linfócitos B e T autorreativos. 
Testes sorológicos na patologia clínica4
No lúpus, autoanticorpos são formados contra DNA, histonas, proteínas 
nucleolares e outros componentes do núcleo celular. A maior parte dos sin-
tomas é causada por imunocomplexos que ativam o sistema complemento 
e, consequentemente, danificam os tecidos, acarretando artrite, erupções 
cutâneas e glomerulonefrite. Esses imunocomplexos contêm anticorpos, 
IgG, IgM ou imunoglobulina A (IgA) e o componente C3 do complemento. 
O diagnóstico de LES é baseado na detecção de anticorpos antinucleares 
(ANAs) por meio de testes de anticorpos fluorescentes e pela detecção de 
anticorpos anti-dsDNA (dupla fita de DNA), com a utilização de ensaio imuno-
adsorvente ligado à enzima (Elisa) (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; LEVINSON, 
2016). 
Arboviroses
As arboviroses são doenças causadas por arbovírus, que incluem o vírus da 
dengue, zika e chikungunya. Os arbovírus são transmitidos por artrópodes, 
nesse caso pelo mosquito Aedes aegypti, que se encontra distribuído em 
regiões tropicais e subtropicais do mundo, especialmente nas áreas urbanas 
e semiurbanas (ARAÚJO et al., 2017). 
A dengue é uma doença sistêmica aguda, infecciosa, não contagiosa, 
provocada por um vírus da família Flaviviridae que possui genoma de RNA e 
apresenta quatro sorotipos (DEN-1, DEN-2, DEN-3, e DEN-4). A doença pode 
ser assintomática, leve ou grave. Os principais sintomas incluem febre alta 
(acima de 38,5°C), dores musculares (mialgia) intensas, dor ao movimentar 
os olhos, dor de cabeça (cefaleia) e dor nas articulações (artralgia), sendo 
que em alguns casos podem aparecer manchas vermelhas na pele (ARAÚJO 
et al., 2017; BRASIL, 2016). 
A doença causada pelo vírus zika inicia com manchas vermelhas no corpo, 
olhos vermelhos, febre baixa, mialgia e artralgia. Além disso, pode causar 
anomalias congênitas em embriões ou fetos expostos durante a gravidez 
(GOMES et al., 2019). Por sua vez, a chikungunya pode se manifestar de forma 
atípica e/ou grave, com sintomas variados que incluem febre, poliartralgia, 
mialgia, cefaleia, náuseas e vômitos, podendo desenvolver encefalite e outras 
complicações neurológicas (VAIRO et al., 2019). O diagnóstico laboratorial 
sorológico dessas arboviroses pode ser realizado por meio da técnica de 
MAC-Elisa (BRASIL, 2016; FERREIRA; MORAES, 2013).
Testes sorológicos na patologia clínica 5
Hepatites
O termo genérico hepatite se refere a uma inflamação do fígado. Diferentes 
vírus podem ser associados à hepatite, mas cinco deles atingem diretamente 
o órgão, possuem importância médica e são classicamente associados a 
essa inflamação: os vírus das hepatites A, B, C, D e E. As infecções causa-
das pelos vírus das hepatites A e E são autolimitadas, transmissíveis pela 
via fecal–oral e não se apresentam como portadores. Já as hepatites B, C e 
D (delta) levam ao estado de portador crônico e são transmitidas por sangue 
e contato sexual. Em geral, os sintomas básicos incluem icterícia e liberação 
de enzimas hepáticas. O diagnóstico laboratorial envolve a utilização de 
marcadores específicos para cada tipo de hepatite. Para hepatite A, por 
exemplo, o diagnóstico baseia-se na detecção sorológica de anticorpos IgM 
anti-HAV feita por ensaio imunoadsorvente ligado à enzima (Elisa) ou por 
radioimunoensaio (FERREIRA; MORAES, 2013; LEVINSON, 2016).
Toxoplasmose
A toxoplasmose é uma infecção causada pelo Toxoplasma gondii, um proto-
zoário encontrado nas fezes de gatos e outros felinos, que pode se hospedar 
em humanos, considerados hospedeiros intermediários. A infecção ocorre pela 
ingestão de cistos presentes na carne malcozida ou pelo contato com cistos 
presentes nas fezes de gato. Na maioriados casos, a infecção em humanos 
é assintomática, mas podem ocorrer complicações, como na toxoplasmose 
congênita, que pode levar a prematuridade, restrição do crescimento uterino 
e icterícia, entre outros sintomas. O diagnóstico é baseado na detecção de 
anticorpos IgM e IgG com técnicas de imunofluorescência (LEVINSON, 2016). 
As imunoglobulinas podem ser diferenciadas em cinco classes, de 
acordo com sua função, estrutura, meia vida plasmática e forma 
secretada. Os cinco grupos são: (1) IgA que está presente na imunidade da 
mucosa, (2) IgD que atua como receptor de antígeno na célula B imatura, (3) IgE 
que protege contra parasitas e está relacionada a reações de hipersensibilidade 
imediata, (4) IgG e (5) IgM que possuem diversas funções como a ativação do 
complemento, sendo que IgM está principalmente relacionada a fase aguda de 
uma infecção e IgG a fase crônica e é considerado anticorpo de memória (ABBAS; 
LICHTMAN; PILLAI, 2015). 
Testes sorológicos na patologia clínica6
Principais testes sorológicos utilizados 
na patologia clínica
Antígenos são substâncias que se ligam de forma específica a uma molé-
cula de anticorpo ou receptor de célula T. Apesar de todos os antígenos 
serem reconhecidos, apenas alguns deles são capazes de ativar os linfócitos. 
As moléculas que têm essa capacidade, ou seja, que conseguem induzir 
resposta imune, são chamadas de imunógenos. A interação entre antígenos e 
anticorpos é altamente específica, e essa propriedade é amplamente utilizada 
pelos laboratórios de diagnóstico. Como já mencionado, técnicas sorológicas 
laboratoriais podem ser empregadas para detecção de autoanticorpos em 
doenças autoimunes e para investigação de anticorpos em doenças infec-
ciosas. Além disso, podem detectar a presença de antígenos, indicando de 
forma direta sua presença no hospedeiro (ABBAS; LICHTMAN; PILLAI, 2015; 
LEVINSON, 2016). As diferentes metodologias de Elisa, as técnicas de turbi-
dimetria e imunofluorescência e o método de radioimunoensaio estão entre 
os principais testes sorológicos utilizados na patologia clínica. 
Teste de Elisa 
O ensaio imunoadsorvente ligado a enzima (Elisa, de enzyme-linked immuno-
sorbent assay) é o mais empregado entre os imunoensaios enzimáticos (EIA, 
de enzyme immunoassay). Os testes de Elisa podem ser divididos em ensaios 
para análise de antígenos e anticorpos. Para investigação de anticorpos, 
estão disponíveis o método indireto e o método de captura para anticorpo 
IgM. Já para detecção de antígenos, estão disponíveis o método de captura, 
o método de competição com anticorpo marcado, o método de competição 
com antígeno marcado e o método da inibição para haptenos. Essas varia-
ções na técnica de Elisa podem ser empregadas no diagnóstico de diversas 
doenças, como aids, dengue, zika e chikungunya (FERREIRA; MORAES, 2013; 
TORTORA; FUNKE; CASE, 2017).
Ao longo dos anos, quatro gerações de EIA foram desenvolvidas para o 
diagnóstico de HIV, definidas de acordo com a evolução das metodologias 
utilizadas a partir do primeiro teste disponível comercialmente. O ensaio de 
primeira geração é conhecido também como Elisa indireto, o que significa que 
anticorpos específicos são detectados por um conjugado constituído por um 
anticorpo anti-IgG humano. Nesse teste, o poço da placa de microtitulação 
contém um antígeno, como o microrganismo inativado que causa a patologia 
Testes sorológicos na patologia clínica 7
a ser diagnosticada. Uma amostra de soro do paciente é adicionada ao poço, 
e caso ela apresente anticorpos contra o microrganismo, haverá uma reação 
entre o antígeno do poço e os anticorpos presentes na amostra. Depois 
disso, o poço é lavado para a remoção de anticorpos não ligados. Uma anti-
-imunoglobulina marcada com enzima e um substrato cromogênico também 
são adicionados. Por fim, uma eventual reação positiva é identificada pela 
mudança de cor causada pela enzima ligada à anti-imunoglobulina marcada, 
conforme ilustrado na Figura 1 (BRASIL, 2016; TORTORA; FUNKE; CASE, 2017).
Figura 1. Ensaio imunoenzimático indireto do tipo Elisa.
Fonte: Brasil (2010, p. 22).
Incubação
Incubação
Legenda
Lavagem
Degradação do substrato
Reação de cor: presença 
de anticorpos
Lavagem
Fase sólida 
Poço de uma placa de 96 poços
Antígeno de HIV (Ag)
Ligado à fase sólida - poço da placa
Substrato (S) 
Cromógeno + H2O2
Anticorpo
IgG Anti-HIV (Ac)
Conjugado (Conj) 
Anti-IgG Humana + Enzima
O ensaio de segunda geração, também indireto, utiliza antígenos recombi-
nantes ou peptídeos sintéticos derivados de proteínas do HIV. Essa estratégia 
é utilizada porque existem regiões antigênicas em determinadas proteínas do 
vírus (epítopos imunodominantes) que são alvos primários da resposta imune 
humoral, ou seja, da resposta imune mediada por anticorpos. Os ensaios de 
segunda geração são mais sensíveis e específicos que os de primeira, pois 
contêm uma maior concentração de epítopos imunodominantes relevantes. 
Testes sorológicos na patologia clínica8
O EIA de terceira geração, por sua vez, utiliza antígenos recombinantes ou 
peptídeos sintéticos tanto na fase sólida quanto sob a forma de conjugado. 
Possui formato sanduíche e permite a detecção de anticorpos anti-HIV IgM 
e IgG ao mesmo tempo. O anticorpo IgG é bivalente, isto é, apresenta dois 
sítios de ligação ao antígeno (chamados de região Fab da imunoglobulina). 
Já o anticorpo IgM é pentavalante. Sendo assim, um desses sítios liga-se ao 
antígeno adsorvido à fase sólida e os outros ficam disponíveis para posterior-
mente ligarem-se aos mesmos antígenos solúveis, sob a forma de conjugado. 
Desse modo, o anticorpo fica “cercado” por dois antígenos e qualquer classe 
de imunoglobulina anti-HIV pode ser detectada por esse tipo de metodologia. 
Esse ensaio é considerado mais sensível que os anteriores pela possibilidade 
de detectar anticorpos da classe IgM. 
No ensaio de quarta geração, ocorre a detecção do antígeno p24 e de 
anticorpos específicos anti-HIV ao mesmo tempo. O componente de detecção 
de anticorpo reconhece todas as classes de imunoglobulinas contra proteínas 
recombinantes ou peptídeos sintéticos derivados das glicoproteínas gp41 e 
gp120/160 do HIV (ALEXANDER, 2016; BRASIL, 2016; GUARNER, 2017). 
Imunoturbidimetria
A imunoturbidimetria é uma técnica de turbidimetria, ou seja, mede a tur-
bidez de uma amostra. Nesse caso, o objetivo é detectar a presença de 
imunocomplexos pela ocorrência de reação antígeno–anticorpo. Essa técnica 
detecta partículas grandes medindo a redução da luz transmitida em rela-
ção à incidente através de uma suspensão de partículas, devido à reflexão, 
à absorção ou ao espalhamento. A presença de complexos insolúveis numa 
solução causada pela interação entre antígenos e anticorpos dispersa a luz, 
e a quantidade dessa dispersão é diretamente proporcional à concentração 
de imunocomplexos. Sendo assim, quanto maior a quantidade de antígeno 
ou anticorpo na amostra, maior a dispersão luminosa detectada pelo espec-
trofotômetro (FERREIRA; MORAES, 2013; LEVINSON, 2016). 
Imunofluorescência
Na técnica de imunofluorescência, corantes fluorescentes são ligados a mo-
léculas de anticorpos excitados pela exposição à luz UV e então visualizados 
por meio de um microscópio fluorescente. A reação de imunofluorescência 
direta ocorre quando anticorpos conhecidos e marcados se ligam de forma 
Testes sorológicos na patologia clínica 9
direta aos antígenos desconhecidos, ou seja, o corante fluorescente que é 
conjugado ao anticorpo reage com o antígeno diretamente na superfície 
celular. Por sua vez, a imunofluorescência indireta é composta de dois está-
gios, e o corante fluorescente é conjugado ao anticorpo contra a IgG humana. 
Na Figura 2, é possível visualizar uma representação esquemática do ensaio 
de imunofluorescência (FERREIRA; MORAES, 2013; LEVINSON, 2016). 
Figura 2. Ensaio de imunofluorescência direto e indireto.
Fonte: Levinson (2016, p. 535).
Radioimunoensaio
O radioimunoensaio (RIA) é um método utilizadopara quantificação de antíge-
nos ou haptenos que podem ser radiativamente marcados. É uma das técnicas 
mais sensíveis para análise quantitativa das reações antígeno–anticorpo. 
O método se baseia na competição por anticorpo específico entre concentra-
ções de materiais marcados, que são conhecidos, e não marcados, que sãos 
os desconhecidos. Os complexos imunes formados entre antígeno–anticorpo 
podem ser separados e a quantidade de radioatividade pode então ser me-
dida. Sendo assim, quanto maior a quantidade de antígenos não marcado 
na amostra, menor a medida de radioatividade no complexo. O teste radio-
alergoaborvente (RAST) é um RIA especializado para quantificar anticorpo 
IgE sérico que reage com um antígeno conhecido, que é um alérgeno, para 
investigar respostas alérgeno específicas (LEVINSON, 2016).
Testes sorológicos na patologia clínica10
Parâmetros mais utilizados na 
interpretação dos testes sorológicos
Conforme mencionado anteriormente, os testes sorológicos foram desen-
volvidos com base nas interações entre antígenos e anticorpos. Eles podem 
ser utilizados com o objetivo de detectar essas moléculas para diversas 
finalidades. Anticorpos, por exemplo, podem ser investigados para identificar 
a fase de uma doença, selecionar doadores de sangue e avaliar a imunidade 
após administração de vacina. Quanto aos antígenos, a pesquisa pode ser 
utilizada para confirmação de infecção por microrganismo específico e como 
critério de cura de determinadas doenças. Sendo assim, os testes sorológicos 
são fundamentais no diagnóstico de patologias clínicas e, portanto, devem 
ser escolhidos e executados de forma adequada, considerando as caracte-
rísticas específicas de cada teste, para que os resultados representem a real 
condição da amostra. Além das questões de execução de técnica, os ensaios 
podem apresentar variações em função de alguns fatores relacionados a 
resposta imune do hospedeiro, variações antigênicas do microrganismo e 
características específicas de cada teste. O conhecimento desses fatores, 
conhecidos como parâmetros sorológicos, é essencial para a utilização e 
interpretação de um ensaio sorológico (FERREIRA; MORAES, 2013). Desse 
modo, as particularidades e limitações dos testes sorológicos são definidas 
por determinados parâmetros, examinados a seguir.
A capacidade de um teste identificar corretamente uma doença é chamada 
de sensibilidade, que diz respeito à porcentagem de resultados positivos na 
população de doentes, ou seja, a proporção de resultados que são verda-
deiro positivos (VP). Um teste com sensibilidade de 90% indica que, a cada 
100 pessoas com a doença testadas pelo método a ser investigado, 90 serão 
identificados e 10 não o serão (falso negativos — FN). Assim, quanto maior 
a sensibilidade do teste, menor a quantidade de FNs (FERREIRA; MORAES, 
2013). Já que o confundidor da sensibilidade (S na equação a seguir) são os 
FNs, pode-se representar esse parâmetro pela relação:
S =
VP
VP + FN
 
Testes sorológicos na patologia clínica 11
Por sua vez, a especificidade é definida pela porcentagem de resultados 
negativos em indivíduos conhecidamente não infectados, ou seja, a pro-
porção dos verdadeiros negativos (VNs). Representa uma condição em que 
a probabilidade de resultado negativo nos VNs, os não doentes, é confun-
dida pelos falso positivos (FPs). Nesse caso, um teste com especificidade de 
90% indica que, a cada 100 pessoas sabidamente saudáveis testadas pelo 
método analisado, 90 não serão identificadas e 10 serão FPs. Vários fatores 
podem influenciar a especificidade de um ensaio e levar a resultados FPs. 
Como exemplo, no diagnóstico da doença de Chagas os anticorpos naturais e 
heteroanticorpos, geralmente IgM, levam a resultados FPs do teste de hema-
glutinação. Procedimentos laboratoriais, como a utilização de determinados 
reagentes químicos, são utilizados para minimizar a ocorrência desses FPs. 
Além disso, epítopos de microrganismos obtidos por recombinação gênica ou 
síntese peptídica podem ser utilizados para melhorar a especificidade dos 
testes (FERREIRA; MORAES, 2013). A especificidade (E na equação a seguir) de 
um ensaio sorológico pode ser estabelecida pela fórmula: 
E =
VN
VN + FP
 
Para estabelecer a especificidade e a sensibilidade de um ensaio soroló-
gico, deve-se compará-lo a um teste considerado padrão-ouro, que é o teste 
referência entre os existentes, pois é o que apresenta a melhor capacidade 
para detectar os VPs e os VNs. Normalmente, como esse método é mais 
complexo e demanda mais tempo de execução que os métodos sorológicos, 
é pouco utilizado na prática clínica. 
De todo modo, testes altamente específicos são úteis para confirmação 
diagnóstica porque produzem menos resultados FPs. A sensibilidade e a 
especificidade de um teste variam de acordo com o limiar de reatividade 
(LR), que é a quantidade da substância utilizada para diferenciar um resul-
tado positivo de um negativo. Se o limiar for maior, a sensibilidade diminui, 
mas em compensação a especificidade aumenta, elevando a proporção de 
FNs; do mesmo modo, se o limiar for menor, a sensibilidade aumenta, mas a 
especificidade diminui, elevando a quantidade de FPs. 
Alguns parâmetros são influenciados não apenas pelo teste e pelo seu 
desempenho, mas também pela prevalência do microrganismo na população 
investigada. A prevalência refere-se à porcentagem de indivíduos doentes 
Testes sorológicos na patologia clínica12
numa população, ou seja, o número total de casos da doença. Ela representa 
a probabilidade de uma pessoa apresentar certa doença antes de ser testada 
(probabilidade pré-teste), com base na prevalência desse microrganismo na 
população geral, o que é avaliado pelos valores preditivos positivos e negati-
vos. O valor preditivo de um teste indica a probabilidade de seu resultado estar 
correto, demonstrando a probabilidade pós-teste (FERREIRA; MORAES, 2013). 
O valor preditivo positivo (VPP) corresponde à probabilidade de doença 
num indivíduo com resultado de exame positivo, isto é, a quantidade de VPs 
entre todas as pessoas com teste positivo. Sendo assim, quanto mais espe-
cífico for um teste, maior será seu VPP, pois há maior probabilidade de que 
uma pessoa com teste positivo tenha realmente a doença. Do mesmo modo, 
quanto maior a prevalência da doença, maior será o VPP, porque quanto maior 
a quantidade de doentes, maior a chance de um resultado positivo indicar de 
fato a ocorrência de doença. No entanto, como os FPs também apresentam 
positividade no teste, estes podem confundir o VPP, que pode ser calculado 
da seguinte forma:
VPP =
VP
VP + FP
 
Em contraste, o valor preditivo negativo (VPN) indica a probabilidade de 
ausência de doença em pessoas com resultado negativo do teste avaliado, 
ou seja, representa os VNs entre aqueles com teste negativo. Nesse caso, 
quanto mais sensível o teste, maior seu VPN (maior a probabilidade de que um 
resultado negativo indique ausência de doença). Desse modo, quanto menor 
a prevalência da doença, maior será o VPN, porque quanto mais pessoas 
saudáveis existirem, maior a possibilidade de que um resultado negativo 
represente realmente a ausência do microrganismo. Um FN pode confundir 
o VPN, cuja relação é: 
VPN =
VN
VN + FN
 
Quando os índices de sensibilidade e especificidade são conhecidos, 
é possível calcular o VPN e o VPP de acordo com a variação na prevalência 
da doença, representando de forma mais exata o que ocorre na população 
(FERREIRA; MORAES, 2013).
Testes sorológicos na patologia clínica 13
VPP =
S × prevalência
(1 − S)(1 − prevalência)
 
VPN =
E × (1 − prevalência)
[E × (1 − prevalência)] + [(1 − S) × prevalência]
 
Não existe teste sorológico 100% sensível e específico, já que os 
laboratórios clínicos buscam equilíbrio entre especificidade e sen-
sibilidade. Porém, quando os testes são ajustados para oferecer maior sensi-
bilidade, como em casos de triagem de doadores em bancos de sangue, há um 
aumento de FPs, exigindo testes adicionaispara confirmação do diagnóstico 
(FERREIRA; MORAES, 2013). 
Referências 
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Janeiro: Guanabara Koogan, 2015.
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lution. Clinical and Vaccine Immunology, v. 23, n. 4, p. 249-53, 2016. 
ARAÚJO, V. E. M. et al. Aumento da carga de dengue no Brasil e unidades federadas, 
2000 e 2015: análise do Global Burden of Disease Study 2015. Revista Brasileira de 
Epidemiologia, 20, p. 205-216, 2017.
BRASIL. Ministério da Saúde. Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. HIV: estra-
tégias para diagnóstico no Brasil. Brasília, DF: Ministério da Saúde, 2010.
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Vigilância das Doenças Transmissíveis. Dengue: diagnóstico e manejo clínico: adulto 
e criança 5. ed. Brasília, DF: Ministério da Saúde, 2016. 
FERREIRA, A. W.; MORAES, S. L. Diagnóstico laboratorial das principais doenças in-
fecciosas e autoimunes: correlações clínico-laboratoriais. Rio de Janeiro: Guanabara 
Koogan, 2013. 
GUARNER, J. Human immunodeficiency virus: diagnostic approach. Seminars Diagnostic 
Pathology, v. 34, n. 4, p. 318-324, 2017. 
GOMES, J. A. et al. Evaluation of a functional polymorphism of the P53 gene on ZIKV 
teratogenesis in humans. Reproductive Toxicology, v. 88, p. 140-141, 2019.
HENRY, J. B. Diagnósticos clínicos e tratamento por métodos laboratoriais. 21. ed. São 
Paulo: Manole, 2013.
LEVINSON, W. Microbiologia médica e imunologia. 13. ed. São Paulo: McGraw Hill, 2016.
Testes sorológicos na patologia clínica14
MIRANDA, A. M. Evolução natural da infecção por VIH-Aspectos clínicos. Revista Por-
tuguesa de Medicina Geral e Familiar, v. 19, n. 6, p. 587-597, 2003.
SOARES, R.; ARMINDO, R. D.; ROCHA, G. A imunodeficiência e o sistema imunitário: o 
comportamento em portadores de HIV. Arquivos de Medicina, v. 28, n. 4, p. 113-121, 2014.
TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 12 ed. Porto Alegre: Artmed, 2017.
VAIRO, F. et al. Chikungunya: epidemiology, pathogenesis, clinical features, management, 
and prevention. Infectious Disease Clinics, v. 33, n. 4, p. 1003-1025, 2019.
Testes sorológicos na patologia clínica 15
Dica do professor
Os testes rápidos podem ser utilizados para determinação de diversas substâncias, como glicose, 
hormônios, antígenos e anticorpos. São testes de rápida execução, leitura e interpretação, levando, 
no máximo, 30 minutos. Apesar das vantagens, geralmente não são utilizados para diagnóstico 
definitivo, sendo seu uso mais recomendado como método de triagem em testagens presenciais.
Nesta Dica do Professor, você vai aprender mais sobre esses testes imunológicos, sua 
aplicabilidade e metodologia.
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Exercícios
1) Os testes sorológicos são ensaios que detectam a presença de antígenos no soro do 
paciente, como proteínas ou polissacarídeos, ou anticorpos produzidos em resposta a 
infecção, dependendo da metodologia empregada e do objetivo da investigação.
Entre as técnicas listadas a seguir, quais correspondem a ensaios sorológicos?
A) Enzimaimunoensaio, ELISA, imunocromatografia, RT-PCR e RT-LAMP.
B) RT-PCR, ELISA, MAC-ELISA, imunofluorescência e hemaglutinação.
C) Hemaglutinação, ELISA, turbidimetria, radioimunoensaio e RT-LAMP.
D) Turbidimetria, imunofluorescência, radioimunoensaio e PCR.
E) ELISA, radioimunoensaio, turbidimetria, imunofluorescência e imunocromatografia.
2) Os ensaios sorológicos utilizados na patologia clínica geralmente detectam anticorpos da 
classe IgM, IgA ou IgG. A presença desses anticorpos não significa proteção contra infecção 
ou doença, apenas exposição natural ou pós-vacina ao microrganismo. Nesse caso, também 
poderia ser utilizado o ensaio para detecção de anticorpos neutralizantes.
Qual das afirmações a seguir descreve de forma correta esses anticorpos?
A) Anticorpos da classe IgM são detectados na fase aguda e crônica de uma infecção e indicam 
imunidade.
B) Anticorpos da classe IgG são detectados durante a fase aguda de uma infecção, ou seja, 
indicam infecção recente.
C) Anticorpos neutralizantes têm a capacidade de inibir a ação do vírus, neutralizando-o e 
impedindo sua replicação viral.
D) Anticorpos da classe IgA são detectados durante a fase crônica de uma infecção e indicam 
imunidade.
E) Anticorpos neutralizantes têm capacidade de neutralizar a resposta imunológica do 
hospedeiro, impedindo resposta inflamatória exacerbada.
3) A turbidimetria é uma técnica utilizada para detectar turbidez causada pela presença de 
partículas grandes em uma amostra. Na imunoturbidimetria, uma variação dessa técnica, o 
objetivo é detectar a turbidez causada pela presença de imunocomplexos formados pela 
reação entre antígenos e anticorpos.
Como se pode definir o princípio desse método?
A) A técnica detecta partículas grandes medindo a redução da luz transmitida, em relação à 
incidente, através de uma suspensão de partículas.
B) Trata-se de uma técnica que mede a formação de complexos imunes em solução por meio do 
monitoramento da redução na dispersão de uma luz incidente.
C) O princípio da técnica é baseado na competição por anticorpo específico entre concentrações 
de materiais marcados e não marcados.
D) A técnica utiliza corantes fluorescentes ligados a moléculas de anticorpos que serão 
visualizados em microscópio fluorescente.
E) Trata-se de uma técnica alternativa ao radioimunoensaio para a detecção de antígenos e 
anticorpos.
4) Os ensaios sorológicos têm alguns fatores, conhecidos como parâmetros sorológicos, que 
devem ser considerados na interpretação de seus resultados. Para triagem sorológica em 
bancos de sangue, os testes utilizados são mais sensíveis do que específicos.
Qual das afirmações a seguir melhor define esses parâmetros?
A) A sensibilidade é representada pela proporção dos resultados que são verdadeiro-negativos.
B) A sensibilidade é a capacidade de um teste de identificar corretamente uma doença.
C) A sensibilidade é representada pela proporção de resultados verdadeiro-positivos e é 
confundida pelos falso-positivos.
D) A especificidade é representada pela proporção de resultados que são verdadeiro-positivos.
E) A especificidade é representada pela proporção de verdadeiro-negativos e é confundida pelos 
falso-negativos.
O teste de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) é o mais utilizado entre os 
enzimaimunoensaios. Eles podem ser divididos em ensaios para análises de antígenos e 
5) 
anticorpos.
Entre os ensaios citados a seguir, quais são direcionados à detecção de antígenos?
A) Método indireto, captura para IgM, competição com Ac marcado e inibição de haptenos.
B) Os únicos testes direcionados à detecção de antígenos são o método da inibição para 
haptenos e a competição com Ag marcado e com Ac marcado.
C) Método de competição com Ag marcado, método de competição com anticorpo marcado e 
método indireto.
D) Método de captura, competição com antígeno marcado e competição com anticorpo 
marcado.
E) Os únicos testes direcionados à detecção de antígenos são o método indireto e o método de 
captura para Ac IgM.
Na prática
A pandemia de covid-19 trouxe ao debate da sociedade importantes questões relacionadas à 
produção de vacinas, imunização e testes diagnósticos. No entanto, várias questões foram 
erradamente divulgadas e compartilhadas. Nesse sentido, é de extrema importância o 
conhecimento correto acerca das limitações dos testes utilizados na detecção de Sars-CoV-2.
Você vai conferir, Na Prática, um caso em que a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) 
emitiu um comunicado esclarecendo sobre o monitoramento do nível de proteção contra o vírus 
causador da covid-19.
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Saiba +
Para ampliar o seu conhecimento a respeito desse assunto, veja abaixo as sugestões do professor:
Diagnóstico do HIV
A infecção pelo vírus do HIV continua sendo um grave problema de saúde pública. Apesar de não 
haver cura, o correto diagnóstico pode oferecer maior qualidade de vida aos pacientes. Para saber 
mais sobre os diferentes métodos diagnósticos disponíveis, incluindo os ensaios sorológicos, acesse 
este material, disponibilizado pelo Ministério da Saúde.
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Sensibilidade e especificidade
Entre os parâmetros que devem ser considerados em ensaios sorológicos, a sensibilidade e a 
especificidade são de extrema importância para a determinação do teste a ser utilizado na rotina 
diagnóstica. Para saber mais sobre a diferença entre esses parâmetros, assista a este vídeo.
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Testes sorológicos para covid-19: interpretação e aplicações 
práticas
O teste considerado padrão-ouro para diagnóstico de covid-19 é o RT-PCR (do inglês reverse-
transcriptase polymerase chain reaction). No entanto, ensaios sorológicos podem ser 
complementares ao diagnóstico de infecção prévia ou recente. Para saber mais sobre a 
interpretação e as aplicações práticas desses ensaios, leia este artigo.
https://telelab.aids.gov.br/index.php/component/k2/item/111
https://www.youtube.com/embed/tdfVzRUqONc
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https://www.researchgate.net/profile/Ricardo-Cohen-2/publication/343084804_Serological_tests_for_COVID-19_Interpretation_and_practical_applications/links/5f16275592851c1eff22189c/Serological-tests-for-COVID-19-Interpretation-and-practical-applications.pdf