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RELATÓRIO DE PRÁTICA CARLA DA SILVA OLIVEIRA SANTOS 3166037 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIOS 01 e 02 DATA: 08/12/2024 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular NOME: Carla da Silva Oliveira Santos MATRÍCULA: 03166037 CURSO: Farmácia POLO: Djalma Batista PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Juliana Prado TEMA DA AULA :EXTRAÇÃO DE DNA DE UM MORANGO Na demonstração de extração de DNA, isolamos o DNA do morango para análise posterior, como a eletroforese, que permite a separação de fragmentos de DNA com base em seu tamanho. Utilizamos os seguintes materiais: morangos frescos, sacos plásticos de vedação, solução de extração (água, detergente neutro, sal), filtro de café ou gaze, funil, tubo de ensaio ou copo, álcool frio (etanol ou isopropanol), bastão de vidro ou palito. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Iniciando, preparamos do morango, removendo as folhas e colocando-o dentro de um saco plástico, no processo biológico ele é composto por células vegetais que contêm DNA no núcleo e em organelas como mitocôndrias e cloroplastos. Na segunda fase, amassamos o morango dentro do saco até obter uma polpa homogênea na observação, percebemos que o mesmo se transforma em uma mistura líquida e pastosa e em seu processo biológico este processo quebra as paredes celulares, liberando o conteúdo celular. Na fase 3, com a adição da solução de extração que adicionamos a solução de extração ao saco e misturamos suavemente e podemos observar que a mistura pode ficar espumosa. Já em seu processo biológico o detergente dissolve as membranas lipídicas das células e núcleos, enquanto o sal ajuda a neutralizar as cargas negativas do DNA, permitindo sua agregação. Na fase 4, filtramos a mistura utilizando um filtro de café colocado em um funil sobre um tubo de ensaio e observamos que o líquido filtrado é coletado no tubo de ensaio, logo em seu processo biológico, a filtração remove detritos celulares maiores, deixando uma solução contendo DNA e outras moléculas solúveis. Na fase 5, com a precipitação do DNA, adicionamos com cuidado álcool frio à solução filtrada, onde observamos que o DNA precipita e forma uma substância esbranquiçada na interface entre o álcool e a solução aquosa e seu processo biológico o DNA é insolúvel em álcool, especialmente quando frio, e se precipita fora da solução aquosa. Para finalizar, coletar o DNA, usamos um bastão de vidro ou palito para enrolar e remover o DNA precipitado e observamos que o DNA pode ser visto como lamentos brancos e pegajosos e em seu processo biológico nessa fase, o DNA está suficientemente concentrado para ser visível a olho nu. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIOS 01 e 02 DATA: 08/12/2024 TEMA DE AULA: ELETROFORESE A eletroforese é uma técnica com base na separação de partículas, onde ocorre no momento em que as mesmas são dissolvidas ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente elétrica é aplicada. Usada também na identificação de substâncias, no estudo de homogeneidade de sistemas biológicos e na determinação de pontos isoelétricos. Esta técnica consiste na migração de moléculas ionizadas, em solução, de acordo com suas cargas negativa migram para o pólo positivo(ânodo) e moléculas com carga positiva migram para o pólo negativo(cátodo). Os equipamentos utilizados: Os reagentes e soluções utilizados: Agarose ultra-pura – 0,8g; TBE 1X -500ml; Corante e DNA SYBER SAFE – 5 µl e Tampão de amostra – 30 µl. As etapas dessa metodologia são: Colocar 0,8 e 100 ml de TBE1X em erlenmeyer de 200ml; adicionar 5µl de tampão do corante de DNA S YBER SAFE; Aquecer a mistura, sob agitação, até a completa fervura em forno micro-ondas; Esperar a amostra esfriar 45ºC e colocar no suporte, contendo os pentes, onde o gel será polimerizado; Esperar 30 minutos para a completa solidificação do gel; retirar os pentes com cuidado. colocar o suporte com o gel na cuba de eletroforese. adicionar tampão TBE 1X até cobrir a superfície do gel; preparar as amostras para aplicar no gel. Colocar 5 µl de DNA num tubo de 0,6ml e misturar com 5µl o tampão de amostra; aplicar as amostras nos poços do gel de agarose, colocando num poço separado um padrão de massa molecular de DNA comercial; Conectar os cabos elétricos a fonte de eletroforese e submeter o gel de agarose 0,8% a eletroforese a 120V por 30 minutos; levar o gel ao transluminador e observar na luz UV as bandas de DNA. A aplicação das diferentes concentrações dos géis acontece pelo tamanho dos poros do gel de agarose diretamente proporcional ao tamanho do fragmento que se deseja separar. O tamanho do poro, ou a porosidade do gel é definido pela concentração do gel. Quanto menor for a concentração do gel maior será a porosidade e, portanto, maior o fragmento de DNA que poderá ser separado. Quanto menor a concentração do gel, mais frágil ele se torna. Normalmente se trabalha com géis de agarose de 1 a 1,5%, dependendo do fragmento de DNA esperado. Referências: E-book Completo de Biologia Molecular V3. Cláudio Gomes Salles Junior. Juliana Prado Goncales. Disponível em: Inicialização LTI. Acesso em 08 de Dez de 2024. Webaula 01- material de aula. Disponível em: Conteúdo / Módulo E - 262818 . 7 - Biologia Molecular - D.20242.E. Acesso em 08 de Dez de 2024. YouTube. Mestre Henrique Cordeiro.16 de abr. de 2021 Disponível em : Bing Vídeos. Acesso em 08 de Dez de 2024. https://sereduc.blackboard.com/ultra/courses/_274787_1/outline/lti/launchFrame?toolHref=https:~2F~2Fsereduc.blackboard.com~2Fwebapps~2Fblackboard~2Fexecute~2Fblti~2FlaunchLink%3Fcourse_id%3D_274787_1%26content_id%3D_11662247_1%26from_ultra%3Dtrue&toolTitle=Biblioteca%20Virtual:%20e-Book https://sereduc.blackboard.com/ultra/courses/_274787_1/outline https://sereduc.blackboard.com/ultra/courses/_274787_1/outline https://www.youtube.com/watch?v=y7ot30njhRs https://www.bing.com/videos/riverview/relatedvideo?q=CENTRO+DE+ESTUDO+GENOMA+HUMANO+EXTRA%c3%87%c3%83O+DO+DNA+DO+MORANGO&mid=80021FA5D41068E4DBBA80021FA5D41068E4DBBA&FORM=VIRE RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIOS 01 e 02 DATA: 08/12/2024