procedimentos hematologia

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Procedimentos Hematologia 
Contagem global de leucócitos: 
1. em um tubo de ensaio fazer diluição da amostra na proporção 
de 1:20, ou seja, adicionar 380 µL de Turck + 20 µL de amostra 
(sangue total). 
2. Homogeneizar e adicionar 10 µL em câmara de Neubauer. 
3. Fazer contagem nos quatro quadrantes laterais em objetiva de 
10x ou 40x. 
4. Após contagem dos quatro quadrantes, somar todos os 
quadrantes e multiplicar por 50. 
L1 + L2 + L3 + L4 = L(total) x 50 = leucócitos/mm3 
Contagem diferencial de leucócitos 
1. Primeiramente fazer o esfregaço e corar. 
2. Esperar secar e adicionar o óleo de imersão. 
3. Fazer contagem diferencial em objetiva de 100x 
4. Contar até chegar em 100 leucócitos, diferenciando-os 
conforme os tipos. 
Parâmetros de contagem: 
 - Neutrófilo; 
 - Linfócito; 
 - Monócito; 
 - Eosinófilo; 
 - Basófilo. 
Contagem de hemácias: 
1. em um tubo de ensaio fazer diluição da amostra na 
proporção de 1:200, ou seja, adicionar 3980 µL de soro 
fisiológico + 20 µL de amostra (sangue total). 
2. Homogeneizar e adicionar 10 µL em câmara de Neubauer. 
3. Fazer contagem de cinco quadrantes dentro do quadrante 
central em objetiva de 10x ou 40x. 
4. Após contagem dos cinco quadrantes, somar todos os 
quadrantes e multiplicar por 10.000 
C1 + C2 + C3 + C4 + C5 = C(total) x 10.000 = hemácias/mm3 
 
Contagem de plaquetas: 
Método de Fônio 
1. Preparar o esfregaço e corar; 
2. Fazer contagem na objetiva de 100x com óleo de imersão, 
em campo com aproximadamente 200 hemácias. 
3. Contar as plaquetas em 10 campos e somar. 
4. Ainda é necessário fazer contagem das hemácias em câmara 
de Neubauer. 
5. Posteriormente aplicar os valores encontrados na fórmula de 
regra de 3: 
Plaquetas --- 2.000 hemácias 
 X --- contagem de hemácias (C. de Neubauer) 
Coagulograma: 
OBS: coletar sangue em tubo de citrato e centrifugar para 
obtenção do plasma. 
 TAP (Kit Bioclin) 
Obs.: pré-aquecer o reagente 1 em banho-maria a 37 °C (o reagente 
deve permanecer em aquecimento durante o processo) 
1. Pipetar 100 µL de amostra (plasma) em tubo de ensaio e 
incubar em banho-maria a 37 °C por 3 minutos. 
2. Depois adicionar 200 µL de reagente 1 e incubar em 
banho-maria a 37 °C (manter em banho-maria por 9 
segundos) 
3. Olhar a cada segundos para verificar a formação de 
coágulo. 
4. Como resultado temos o tempo que levou até a formação 
do coágulo. 
 TTPA (Kit Bioclin) 
Obs.: pré-aquecer o reagente 2 em banho-maria a 37 °C. 
1. Pipetar 100 µL de amostra (plasma) em tubo de ensaio e 
incubar em banho-maria a 37 °C por 3 minutos. 
2. Depois adicionar 100 µL de reagente 1 e incubar em 
banho-maria a 37 °C por 2 a 3 minutos. 
3. Depois adicionar 100 µL de reagente 2 e incubar em 
banho-maria a 37 °C. (manter em banho-maria por 20 
segundos) 
4. Olhar a cada segundos para verificar a formação de 
coágulo. 
5. Como resultado temos o tempo que levou até a formação 
do coágulo. 
 
Coombs direto: 
1. Em um tubo de ensaio adicionar 950 µL de soro fisiológico 
+ 50 µL de sangue total. 
2. Homogeneizar e passar 50 µL para outro tubo de ensaio. 
3. Lavar as hemácias 3 vezes com 1 mL de soro fisiológico, 
ou seja, adicionar 1 mL de soro fisiológico e centrifugar a 
2.500 rpm por 15 segundos três vezes. 
4. Na última lavagem ao descartar o soro fisiológico limpar as 
bordas com papel toalha. 
Obs.: cuidado para não desfazer o “botão” de hemácias. 
5. Após lavagem adicionar duas gotas de soro anti-humano. 
6. Centrifugar a 2.500 rpm por 15 segundos. 
7. Depois visualizar a formação de aglutinação (+) ou não (-). 
 
Coombs indireto: 
5. Em um tubo de ensaio adicionar 950 µL de soro fisiológico 
+ 50 µL de sangue total do tipo sanguíneo O+. 
6. Homogeneizar e passar 50 µL para outro tubo de ensaio. 
7. Nesse tubo adicionar duas gotas do soro do paciente a 
testar e duas gotas de albumina. 
8. Incubar em banho-maria a 37 °C por 20 minutos. 
9. Lavar as hemácias 3 vezes com 1 mL de soro fisiológico, 
ou seja, adicionar 1 mL de soro fisiológico e centrifugar a 
2.500 rpm por 15 segundos três vezes. 
10. Na última lavagem ao descartar o soro fisiológico limpar as 
bordas com papel toalha. 
Obs.: cuidado para não desfazer o “botão” de hemácias. 
8. Após lavagem adicionar duas gotas de soro anti-humano. 
9. Centrifugar a 2.500 rpm por 15 segundos. 
10. Depois visualizar a formação de aglutinação (+) ou não (-). 
 
Procedimentos Hematologia 
Contagem global de leucócitos: 
1. em um tubo de ensaio fazer diluição da amostra na proporção 
de 1:20, ou seja, adicionar 380 µL de Turck + 20 µL de amostra 
(sangue total). 
2. Homogeneizar e adicionar 10 µL em câmara de Neubauer. 
3. Fazer contagem nos quatro quadrantes laterais em objetiva de 
10x ou 40x. 
4. Após contagem dos quatro quadrantes, somar todos os 
quadrantes e multiplicar por 50. 
L1 + L2 + L3 + L4 = L(total) x 50 = leucócitos/mm3 
Contagem diferencial de leucócitos 
1. Primeiramente fazer o esfregaço e corar. 
2. Esperar secar e adicionar o óleo de imersão. 
3. Fazer contagem diferencial em objetiva de 100x 
4. Contar até chegar em 100 leucócitos, diferenciando-os 
conforme os tipos. 
Parâmetros de contagem: 
 - Neutrófilo; 
 - Linfócito; 
 - Monócito; 
 - Eosinófilo; 
 - Basófilo. 
Contagem de hemácias: 
1. em um tubo de ensaio fazer diluição da amostra na 
proporção de 1:200, ou seja, adicionar 3980 µL de soro 
fisiológico + 20 µL de amostra (sangue total). 
2. Homogeneizar e adicionar 10 µL em câmara de Neubauer. 
3. Fazer contagem de cinco quadrantes dentro do quadrante 
central em objetiva de 10x ou 40x. 
4. Após contagem dos cinco quadrantes, somar todos os 
quadrantes e multiplicar por 10.000 
C1 + C2 + C3 + C4 + C5 = C(total) x 10.000 = hemácias/mm3 
 
Contagem de plaquetas: 
Método de Fônio 
1. Preparar o esfregaço e corar; 
2. Fazer contagem na objetiva de 100x com óleo de imersão, 
em campo com aproximadamente 200 hemácias. 
3. Contar as plaquetas em 10 campos e somar. 
4. Ainda é necessário fazer contagem das hemácias em câmara 
de Neubauer. 
5. Posteriormente aplicar os valores encontrados na fórmula de 
regra de 3: 
Plaquetas --- 2.000 hemácias 
 X --- contagem de hemácias (C. de Neubauer) 
Coagulograma: 
OBS: coletar sangue em tubo de citrato e centrifugar para 
obtenção do plasma. 
 TAP (Kit Bioclin) 
Obs.: pré-aquecer o reagente 1 em banho-maria a 37 °C (o reagente 
deve permanecer em aquecimento durante o processo) 
1. Pipetar 100 µL de amostra (plasma) em tubo de ensaio e 
incubar em banho-maria a 37 °C por 3 minutos. 
2. Depois adicionar 200 µL de reagente 1 e incubar em 
banho-maria a 37 °C (manter em banho-maria por 9 
segundos) 
3. Olhar a cada segundos para verificar a formação de 
coágulo. 
4. Como resultado temos o tempo que levou até a formação 
do coágulo. 
 TTPA (Kit Bioclin) 
Obs.: pré-aquecer o reagente 2 em banho-maria a 37 °C. 
1. Pipetar 100 µL de amostra (plasma) em tubo de ensaio e 
incubar em banho-maria a 37 °C por 3 minutos. 
2. Depois adicionar 100 µL de reagente 1 e incubar em 
banho-maria a 37 °C por 2 a 3 minutos. 
3. Depois adicionar 100 µL de reagente 2 e incubar em 
banho-maria a 37 °C. (manter em banho-maria por 20 
segundos) 
4. Olhar a cada segundos para verificar a formação de 
coágulo. 
5. Como resultado temos o tempo que levou até a formação 
do coágulo. 
 
Coombs direto: 
1. Em um tubo de ensaio adicionar 950 µL de soro fisiológico 
+ 50 µL de sangue total. 
2. Homogeneizar e passar 50 µL para outro tubo de ensaio. 
3. Lavar as hemácias 3 vezes com 1 mL de soro fisiológico, 
ou seja, adicionar 1 mL de soro fisiológico e centrifugar a 
2.500 rpm por 15 segundos três vezes. 
4. Na última lavagem ao descartar o soro fisiológico limpar as 
bordas com papel toalha. 
Obs.: cuidado para não desfazer o “botão” de hemácias. 
5. Após lavagem adicionar duas gotas de soro anti-humano. 
6. Centrifugar a 2.500 rpm por 15 segundos. 
7. Depois visualizar a formação de aglutinação (+) ou não (-). 
 
Coombs indireto:5. Em um tubo de ensaio adicionar 950 µL de soro fisiológico 
+ 50 µL de sangue total do tipo sanguíneo O+. 
6. Homogeneizar e passar 50 µL para outro tubo de ensaio. 
7. Nesse tubo adicionar duas gotas do soro do paciente a 
testar e duas gotas de albumina. 
8. Incubar em banho-maria a 37 °C por 20 minutos. 
9. Lavar as hemácias 3 vezes com 1 mL de soro fisiológico, 
ou seja, adicionar 1 mL de soro fisiológico e centrifugar a 
2.500 rpm por 15 segundos três vezes. 
10. Na última lavagem ao descartar o soro fisiológico limpar as 
bordas com papel toalha. 
Obs.: cuidado para não desfazer o “botão” de hemácias. 
8. Após lavagem adicionar duas gotas de soro anti-humano. 
9. Centrifugar a 2.500 rpm por 15 segundos. 
10. Depois visualizar a formação de aglutinação (+) ou não (-).