aula 6 - Hemocultura

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Diagnóstico microbiológico
das infecções sistêmicas
(Hemoculturas)
Prof. Alan Brito
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DAS 
INFECÇÕES SISTÊMICAS 
(HEMOCULTURAS)
PROF. DRA. FABÍOLA KEGELE
Conceitos
 Hemocultura  Coleta simultânea em um único local de
punção de um par de frascos, geralmente um para aeróbio e
outro para anaeróbio;
 Bacteremia  Presença de microrganismos circulando na
corrente sanguínea  Geralmente devido a evolução de
certas doenças;
 Septicemia  Presença de microrganismo circulando e se
multiplicando na corrente sanguínea  Geralmente processo
infeccioso sistêmico;
 Infasão de microrganismos no sangue  Drenagem de
microrganismos à partir de um foco primário ou acesso
direto à corrente sanguínea.
Microrganismos mais frequentemente
encontrados em hemoculturas
 Gram positivos  S. aureus, Staphylococcus coagulase negativo
(ECN), Enterococcus spp., Streptococcus spp. e mais raramente
outros como L. monocytogenes e Corynebacterium diphtheriae;
 Gram negativos  Enterobactérias, em especial, E. coli,
Salmonella, Enterobacter spp., Serratia marcescens, Klebsella
pneumoniae; bacilos Gram negativos não fermentadores, como, P.
aeroginosa, Acinetobacter baumanni, Burkholderia cepacia e
Stenotrophomonas maltophila. Além de cocos Gram negativos como
N. meningitidis;
 Últimos anos  Aumento significativo de ECN  Dificuldade na
interpretação dos resultados.
Microrganismos mais frequentemente
encontrados em hemoculturas
 Década de 90  Enterococcus spp, fungos e micobactérias;
 Bacteremias por bactérias anaeróbias  Rara;
 Entre o fungos destaca-se o aumento crescente do isolamento de
Candida spp, lembrando que outros fungos podem também ser
isolados como Cryptococcus neoformans (criptococose).
Procedimento
 Espécime Clínico
o Amostras são coletadas por punção venosa;
o Número de amostras
• Adultos  2 à 3 amostas;
• Crianças  2 amostras
 Volume de Sangue
o Adultos  8 a 10 ml por punção em cada frasco;
o Crianças (1 a 6 anos)  1 a 5 mL por punção em frascos pediátricos;
o Recém-nascidos  0,5 a 1 mL por punção em frascos pediátricos.
Intervalo entre as coletas de amostras
Geralmente 2 amostras de hemocultura são suficientes, porém se
houver solicitação médica de uma terceira amostra, repetir o procedimento
após outros 15 a 20 minutos ou em 24 horas, dependendo da urgência do
estado clínico e/ou necessidade de introdução de antibioticoterapia
imediata.
INTERVALO ENTRE AS COLETAS DE AMOSTRAS
Geralmente 2 amostras de hemocultura são suficientes, porém, se houver
solicitação médica de uma terceira amostra, repet ir o procedimento após outros
15 a 20 minutos ou em 24 horas, dependendo da urgência do estado clínico e/ ou
necessidade de int rodução ant ibiot icoterapia imediata.
CONDIÇÃO CLÍNICA PROTOCOLO
- Sepse, osteomielite, meningite, artrite, - 2 à 3 amostras, sem intervalo e
pneumonia e pielonefrite intercalar os sítios de punção;
- Febre de origem desconhecida e - 2 à 3 amostras com 15 a 20 minutos
endocardite de intervalo entre as coletas
- Paciente em uso de antibióticos - De preferência utilizar frascos com
inibidores e coletar antes da próxima
dose
Frascos de coleta
 Metodologias manuais  Meios enriquecidos para aeróbios e anaeróbios
acrescidos de anti-coagulante SPS (polianetolsulfonato sódico) 0,025 a
0,05%. Ex: BHI;
 SPS Aça ̃o inibitória para aminoglicosídeos e polimixinas + Aça ̃o
inibito ́ria para algumas fraço ̃es do complemento + Inibe parcialmente a
fagocitose;
 SPS Aça ̃o inibitória para determinados microrganismos como N.
meningitidis, N. gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Peptostreptococcus
sp e Moraxella catarrhalis;
 Recomendac ̧a ̃o  Acre ́scimo de 1,2% de gelatina para inibir
parcialmente os efeitos nocivos do SPS.
Frascos de coleta
 Metodologias automatizadas  Meios com aditivos para neuralizar e
inativar agentes antimicrobianos
FRASCOS DE COLETA
Metodologias automatizadas Meios de cultura com aditivos para neutralizar e inativar
agentes antimicrobianos;
Exemplos Bactec (Becton-Dickinson) Resinas
BacT-Alert (Bio-Meriex) Carvão ativado
 Amostras coletadas sem anti-sepsia adequada podem levar ao
isolamento de microrganismos contaminantes, não relacionados ao
processo infeccioso;
 O método de coleta utilizado é crítico para a obtenção de resultados
confiáveis;
 Fazer coleta durante a ascenão da temperatura e, de preferência, antes
da antibioticoterapia.
Procedimentos
 Os frascos contendo as amostras devem ser enviados ao laboratório à
temperatura ambiente (20 – 25oC) até 12 horas após a coleta;
 O resultado da hemocutura depende também da rapidez do transporte
ao laboratório, principalmente quando a metodologia utiizada é a
automatizada;
 Não é recomendado realizar coloração pelo método de Gram das
amostras de sangue devido à baixa sensibilidade nesse tipo de material
clínico.
Transporte
 Metodologia manual
 Na ̃o é recomendada atualmente;
 Mi ́nimo de 7 dias de incubac ̧a ̃o dos frascos;
 Tanto os frascos de hemocultura como os sub-cultivos devem ser
mantidos a 35-37oC e em microaerofilia;
 Meios de cultura para sub-cultivo  A ́gar chocolate e agar sangue.
Procedimento
PROCEDIMENTO
Metodologia manual
Frasco de 
hemocultura
Incubar 35-370C / CO2
Positivo
Após 24h Tio + ACh
Negativo
Positivo
Após 48h
Negativo
Positivo
Incubar 35-370C / CO2
7º dia
Negativo
Positivo
Fungos ?
Emitir resultado 
parcial
Identificação e TSA
Resultado negativo e desprezar 
o frasco
Incubar 300C + 10 dias
Tio + ACh
Tio + ACh
Procedimento
 Metodologia automatizada
 Existem diversos aparelhos no mercado para a realização de
hemoculturas;
 Vantagens  rapidez e diminuição do trabalho técnico;
 Protocolo, em geral, de 5 dias de incubac ̧a ̃o;
o Bactec e BacT-Alert  Baseado na detecc ̧a ̃o de CO2 produzido
durante o metabolismo microbiano;
o ESP System  Baseado na detecça ̃o de consumo e produça ̃o de
gases.
Procedimento
Procedimento
PROCEDIMENTO
Metodologias automat izadas
Frascos posit ivos
GRAM
Posit ivo Negat ivo
Emit ir 
resultado 
parcial
Recolocar 
o frasco 
no 
aparelho
Tio + ACh e incubar 35-370C / 
CO2
Tio/ ACh (-)
Gram (-)
Tio/ ACh (-)
Gram (+)
Tio/ ACh
(+)Gram (+)
Reincubar 
as placas
Semear em 
anaerobiose
Ident ificação 
+ TSA
Ident ificação + 
TSA
Prováveis microrganismos contaminantes
PROVÁVEIS MICRORGANISMOS CONTAMINANTES
Staphylococcus coagulase negativo, Propionibacterium sp, Corynebacterium sp, Bacillus
sp, Micrococcus sp ou Streptococcus do grupo viridans
Uma amostra (+), 
sem outras 
coletadas dentro 
de 48h
Conversar com o 
médico
Contaminante
Reportar como 
provável 
contaminante
Uma amostra (+), com outras 
(+) para o mesmo agente 
dentro de 48h
Identificação + 
TSA
Uma amostra (+), 
com outras (-) dentro 
de 48h
Reportar como 
provável 
contaminante. Não 
realizar TSA, a não 
que solicitado pelo 
clínico
Identificação de prováveis patógenos
 Staphylococcus aureus  Ver aula de vias aéreas inferiores;
 Streptococcus pneumoniae  Ver aula de vias ae ́reas inferiores;
 Streptococcus agalactiae Ver aula de vias aéreas superiores e
sistema nervoso central;
 Neisseria meningitidis Ver aula de sistema nervoso central;
 Haemophilus influenzae  Ver aula de sistema nervoso central;
 BGNNF  Ver aula de cultura de vias aéreas inferiores;
Identificação de bacilos gram-negativos
Bacilos gram-negativos
Fermentador da glicose Não-fermentador
Oxidase (-) Oxidase (+)Enterobactérias Aeromonas
Plesiomonas
Vibrio
Campylocacter
Oxidase (-) Oxidase (+)
Exemplos:
Acinetobacter spp.
Burkolderia cepacia
Stenotrophomonas maltophilia
Exemplos:
Pseudomonas spp.
Burkolderia spp.
Alcaligenes spp.
 Enterobactérias
 Testes de triagem:
 TSI (“Triple Sugar Iron”);
 SIM
 Citrato;
 Urease;
 Descarboxilação e desaminação de aminoácidos (arginina, ornitina e lisina).
Identificação de prováveis patógenos
 Enterococcus sp
 Prova da catalase  Negativo; 
 Hidrólise da esculina  Positivo; 
 PYR  Presença da enzima L-pirrolidonil-arilamidase; 
 LAP  Presenc ̧a de L-leucina-arilamidase  Procedimento idem a ̀
prova do PYR; 
 Resiste ̂ncia ao NaCl 6,5%  Difere Enterococcus de Streptococcus do 
grupo D, onde Enterococcus sa ̃o resistentes. 
Identificação de prováveis patógenos
 Enterococcus sp
 Produça ̃o de pigmento  Observada na superfície do meio de agar 
sangue;
 Descarboxilac ̧a ̃o da arginina  Realizado em anaerobiose e meio a ́cido;
 Fermentac ̧a ̃o de açúcares  Sacarose, L-arabinose, manitol, D-
rafinose, D-sorbitol, D-sorbose e Metil- -D-Glicopiranosi ́deo (MGP); 
 Motilidade. 
Identificação de prováveis patógenos
Sem-hemólise
NaCL a 6,5% +
Bile esculina +
ou Pyr +
NaCL a 6,5% -
Bile esculina +
ou Pyr -
Enterococcus spp.
Pigmento amarelo
Fermentação da xilose
Fermentação da arabinoseE. gallinarum
E. feecium E. faecalis
Móvel 30oC
Imóvel 30oC
E. casseliflavus
E. mundi
Estreptococo
grupo D
NaCL a 6,5% -
Bile esculina -
Outros 
estreptococos(+)
(+)
(+)
(-)
(-)
(-)
Identificação de prováveis patógenos
IDENTIFICAÇÃO DOS PROVÁVEIS PATÓGENOS
Enterococcus sp
+
Descarboxilação 
de arginina
+
-
Fermentação de 
açúcares
-
Identificação de prováveis patógenos
 Staphylococcus coagulase negativa
 Prova da catalase  Positivo;
 Prova da coagulase  Negativo;
 Resistência a novobiocina;
 Produção da enzima fosfatase alcalina;
 Produção da enzima urease;
 Descarboxilação da ornitina;
 Fermentação de açúcares  Manose, manitol e trealose.
IDENTIFICAÇÃO DOS PROVÁVEIS PATÓGENOS
Staphylococcus coagulase negat iva
- Prova da catalase Posit ivo;
- Prova da coagulase Negat ivo;
- Resistência à novobiocina;
- Produção da enzima fosfatase alcalina;
- Produção da enzima urease;
- Descarboxilação da ornit ina;
- Fermentação de açúcares Manose, manitol e t realose Fermentação
IDENTIFICAÇÃO DOS PROVÁVEIS PATÓGENOS
Staphylococcus coagulase negat iva
- Prova da catalase Posit ivo;
- Prova da coagulase Negat ivo;
- Resistência à novobiocina;
- Produção da enzima fosfatase alcalina;
- Produção da enzima urease;
- Descarboxilação da ornit ina;
- Fermentação de açúcares Manose, manitol e t realose Fermentação