AntibiogramaMedVetEInterpreta_C_eoGramNegativo

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Microbiologia Veterinária 
Doenças Infecciosas
Prof.ª. M.a. Camilla Beatriz S. Melo
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Teste de susceptibilidade a antimicrobianos - TSA
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O que são Antibióticos?
Definição
Compostos químicos 
produzidos por 
microrganismos capazes 
de ocasionar a morte de 
outros microrganismos.
Considerações Clínicas
Para uso clínico, considera-se 
indução de resistência, 
solubilidade e efeitos na 
microbiota intestinal.
Teste de Sensibilidade
Permite verificar in vitro se uma bactéria é sensível ou resistente 
aos antibióticos.
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Bactérias Gram-positivas, Gram-
negativas, Espiroquetas e 
Mycoplasmas.
sem danificar o organismo animal
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Classes de Antimicrobianos
β-Lactâmicos
Inibição da síntese da parede celular
Aminoglicosídeos e Macrolídeos
Atuam no ribossoma bacteriano
Quinolonas e Inibidores do Folato
Inibição do ácido nucléico e via metabólica
Anel β- lactâmico na sua estrutura
Inibe a síntese de proteínas bacterianas Alérgicas a penicilinas
síntese do DNA bacteriano síntese do ácido fólico
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Ribossomo - responsáveis ​​pela síntese de proteínas, um processo essencial para 
o crescimento e replicação bacteriana.
Bactérias Gram positivo
Bactérias Gram negativas 
Toxicidade e carcinogenicidade, o seu uso está proibido em vários países.
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Outras Classes Importantes
Aminoglicosídeos
Inibem a síntese proteica
bacteriana em nível
ribossômico. Exemplos:
Gentamicina, Amicacina.
Macrolídeos
Antimicrobianos que
inibem a síntese proteica.
Usados contra bactérias
Gram-positivas. Exemplos:
Azitromicina, Eritromicina.
Tetraciclinas
Inibem a síntese proteica 
em bactérias Gram-
negativas e Gram-positivas. 
Exemplos: Tetraciclina, 
Doxiciclina.
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Método Kirby-Bauer
Discos de Alta Potência
Emprega discos com antibióticos em meio 
Ágar Mueller-Hinton.
Formação de Halos
Avalia o crescimento bacteriano ao redor do disco 
de antibiótico.
Interpretação
Classifica a bactéria como sensível, intermediária ou 
resistente ao antimicrobiano.
A mais difundida e utilizada na rotina de análises clínicas, devido à praticidade 
de execução, baixo custo e confiabilidade dos resultados.
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Fatores Determinantes para 
Realização do TSA
Material Clínico
Cuidado no isolamento de microbiota normal de
determinado sítio anatômico, pois não é indicada a
realização do TSA neste tipo de amostra.
Realização da Técnica
Verificar se todos os passos estão sendo seguidos 
rigorosamente conforme prescrito.
Escolha dos Antimicrobianos
A escolha deve ser adequada à realidade da instituição 
ou hospital.
Resistência Intrínseca
Cuidado ao reportar resultados errôneos relacionados
à resistência natural de certos microrganismos.
herança genética
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Procedimento do Teste
Preparação do Inóculo
Selecionar colônias isoladas e transferir para tubo com 
salina estéril.
Controle de Turbidez
Comparar com solução padrão de McFarland 0,5.
Inoculação na Placa
Esfregar swab em toda superfície do meio, girando a 
placa em ângulos de 60°.
Aplicação dos Discos
Distribuir discos de antibióticos uniformemente na placa.
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Controle de Qualidade
Cepas Padrão
Utilizar cepas ATCC ou derivadas 
(até o quinto repique):
• Escherichia coli ATCC 25922
• Staphylococcus aureus ATCC 25923
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Periodicidade
Testar cada novo lote (dos discos e dos 
meios de cultura) em uso com a cepa 
padrão e em periodicidade definida 
pelo laboratório segundo sua rotina e 
necessidade.
Interpretação
Espera-se que cada cepa testada 
produza um halo inibitório dentro 
dos limites estabelecidos para 
controle. Resultados alterados 
implicam em revisão completa de 
todos os componentes do sistema 
analítico.
O controle de qualidade é essencial para garantir a confiabilidade dos resultados do antibiograma. 
Não é recomendado o uso de cepas clínicas para este fim, pois estas já podem ter passado por diversos estágios de 
adaptação ao meio ambiente e exposição a antibióticos.
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Menor quantidade de um antibiótico que impede o
crescimento de um microrganismo.
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Bactéria que era sensível a um antibiótico passa a ser resistente
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Prática 
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Materiais Necessários
Culturas Bacterianas
• Placas com colônias de 
bactérias Gram-positivas e 
Gram-negativas
• Placas com meio Mueller-
Hinton
Materiais de Inoculação
• Salina estéril
• Escala de MacFarland
• Swabs e alça de inoculação
Materiais de Análise
• Discos com antibióticos
• Pinça
• Régua para medição
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Prática 
Com uma alça bacteriológica em
platina devidamente flambada e
resfriada, tocar na colônia recente
(18-24h);
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Suspender as colônias em solução salina estéril 
(NaCl 0,85%) até se obter uma turvação 
compatível com o grau 0,5 da escala Mac 
Farland (1x106 UFC/mL).
Para este passo deve ser utilizado um tubo 
aferido na escala 0,5 de Mac Farland como 
comparativo
Prática 
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Prática 
Embeber um swab estéril na suspensão bacteriana,
comprimindo-o contra as paredes do tubo para tirar o
excesso da suspensão.
Semear em seguida de forma suave em todas direções 
na placa (cinco direções), procurando abranger toda a 
superfície;
Aguardar (não mais que 15 minutos) a superfície do ágar secar.
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Prática 
Com auxílio de uma pinça flambada e resfriada,
colocar os monodiscos ou multidiscos, sobre a
superfície do meio inoculado, exercendo uma
leve pressão com a ponta da pinça para uma
boa adesão dos discos;
Incubar a placa com os discos em estufa bacteriológica a 
36°C por 18 a 24 horas; 
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Resultados: 
Aspecto de um antibiograma inoculado
com Pseudomonas aeruginosa.
- Seta laranja representa o diâmetro do halo de
inibição em mm;
- Seta branca espessa indica um disco com
antimicrobiano ou antisséptico;
- Seta branca fina indica o crescimento microbiano
na placa.
https://www.ufrgs.br/aulaspraticasdemip/?page_id=82
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Interpretação dos Resultados
Com o auxílio de uma régua, paquímetro
ou dispositivo semelhante, medir o
diâmetro dos halos inibitórios de cada
disco, e consultar uma tabela apropriada
para determinar se a bactéria em análise
é sensível, intermediárioou resistente ao
antimicrobiano testado.
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Interpretação dos Resultados
Amoxicilina + Ác. Clavu ≤ 19 - ≥20
Ampicilina ≤ 28 - ≥29
Cefalotina ≤ 14 15-17 ≥ 18
Ceftiofur (CTF) ≤17 18-20 ≥21
Enrofloxacina ≤ 16 17-22 ≥23
Penicilina ≤ 28 - ≥29
Tabela interpretativos do diâmetro da zona (halo) de inibição
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Microbiologia Veterinária 
Doenças Infecciosas
Identificação bactérias Gram negativas
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A Família Enterobacteriaceae engloba a maioria dos bacilos Gram-negativos de importância em
saúde animal.
- Habitat das enterobactérias:
 Microbiota intestinal de muitos animais.
 Fezes solo, água, vegetação.
IMPORTÂNCIA CLÍNICA
- Gastroenterites, infecções do trato urinário, septicemias, abscessos, mastites ambientais.
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Parâmetros Bioquímicos
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Estria em ágar inclinado
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Isolamento de enterobactérias no Ágar MacConkey.
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A= ácido, K= alcalino
Ágar Tríplice-Ferro (TAF)
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Ágar SIM
Sulfeto de Hidrogênio, Indol e Motilidade
Avaliar se a bactéria
sintetiza a enzima
triptofanase.
Esta enzima sintetizada pela
bactéria é capaz de
metabolizar o triptofano em
indol, que é evidenciado
pela formação de um anel
vermelho após a adição do
reativo de KOVACS.
Este procedimento
possibilita também verificar
a produção de sulfeto de
hidrogênio (meio fica com
coloração enegrecida) e a
motilidade (turbidez)
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Ágar Citrato de Simmons
Identificação de bactérias que
utilizam o citrato com única fonte
de carbono.
O meio tem a coloração inicial
verde, se a bactéria metabolizar o
citrato presente no meio, ele ficará
azul devido ao indicador azul de
bromotimol.
A mudança de cor ocorre pela
alcalinização do meio
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Caldo Ureia de Stuart
Avaliar se a bactéria é produtora
da enzima urease. A ureia
presente no meio é degradada
pela enzima urease em duas
moléculas de amônia. A amônia
formada alcaliniza o meio e o
indicador de pH, vermelho de
fenol, presente no meio, se torna
rosa. pH. Originalmente o meio
tem a cor âmbar e após a
alcalinização se torna rosa.
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Ágar Fenilalanina
O meio é incolor e se os bacilos
entéricos forem FA positivos, o
meio apresentará uma coloração
esverdeada na superfície após a
adição do cloreto férrico
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Interpretação dos Resultados
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Use a tabela abaixo e identifique a bactéria. Indique o número da bactéria utilizada.
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