Aula 7. Identificação de Enterobacterias (1)

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Diagnóstico Laboratorial das Infecções causadas por 
Enterobacterias
Centro Universitário Maurício de Nassau
Disciplina de Microbiologia Clínica
Professora Gleiciere Maia Silva
Especialista em Microbiologia Médica e Micologia
Mestre em Biologia de Fungos
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
 Objetivos
➢ Conhecer as principais bactérias Gram negativas da 
familia Enterobacteriaceae
➢ Aprender as identificar através de testes bioquímicos 
os principais grupos de microrganismos
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Maior e mais heterogênea família de bactérias Gram negativas de 
importância médica. 
➢ 25 espécies. 
Bastonetes Gram-negativos, anaeróbios facultativos, 
móveis ou imóveis, sendo, quando móveis, portadores 
de flagelos peritríquios, oxidase positivos, 
fermentativos (Prova de OF), e reduzem nitratos a 
nitritos.
 Características
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Habitat: Trato gastrointestinal de humanos, no reino animal, na 
água, solo e vegetais. 
➢ Enteropatógenos.
➢ Representam 80% ou mais de todos os gram negativos de 
importância clínica isolados na rotina microbiológica. 
➢ Responsáveis por 70% das infecções urinárias e 50% das 
septicemias (ANVISA,2008).
 Características
Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp, Proteus 
spp, Providencia spp, Morganella spp, Citrobacter spp, 
Salmonella spp, Shigella spp, Serratia spp.
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por Enterobactérias
✓ Alguns gêneros apresentam características morfocolonial 
típicas: 
✓Klebsiella spp e Enterobacter spp pode se apresentar na 
forma de colônias mucóides ; 
✓Proteus spp apresenta um véu espalhando-se por toda a 
placa;
✓Yersinia spp colônias pequenas e puntiformes;
✓ Serratia spp apresenta pigmentação vermelha quando 
incubada no meio de Mueller-Hinton a temperatura ambiente, 
devido a uma substância conhecida como prodigiosina 
 Características
✓Os caracteres indicador, seletivo e diferencial dos meios de 
cultura utilizados no isolamento primário das amostras para 
cultura, manifestam-se das seguintes formas: 
✓Agar MacConkey: distingue os gêneros fermentadores de 
lactose dos não fermentadores. 
✓Os que fermentam a lactose tomam a cor rosa ou avermelhada 
os que não fermentam apresentam-se incolor . 
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por Enterobactérias
 Características
Fermentação Rápida da 
lactose
Fermentação lenta Lactose não-
fermentada
E. coli: Brilho metálico em 
meios diferenciais; colônias 
achatadas e não-viscosas.
Enterobacter: colônias 
elevadas, sem brilho, 
crescimento + viscoso.
Klebsiella: crescimento mucóide 
muito viscoso.
Serratia, Citrobacter Shigella spp.: nenhuma 
formação de gás a partir da 
dextrose.
Salmonella spp.: formação 
de ácido e gás a partir de 
dextrose.
Proteus: rápida hidrólise da 
uréia (odor de amônia)
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por Enterobactérias
 Características
✓Triagem - TSI (triple sugar iron) : avalia a capacidade de a 
bactéria fermentar ou não, glicose, lactose, sacarose; produzir 
ou não H2S; produzir ou não gás (CO2) .
✓Demais testes: 
✓S I M - avalia a capacidade de a bactéria produzir ou não, 
H2S; de produzir ou não indol e de ser ou não móvel.
✓Uréia - avalia a capacidade de a bactéria hidrolizar ou não, a 
uréia .
✓Citrato - avalia a capacidade de a bactéria utilizar ou não o 
carbono (C) de uma fonte inorgânica que é o citrato sódico .
Outras provas adicionais poderão ser utilizadas quando se encontrar 
dificuldades na identificação utilizando apenas os meios acima descritos. 
Sugerimos os seguintes meios: LDC (lisina descarboxilase), ODC (ornitina 
descarboxilase), Malonato, fenilalania desaminase
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por Enterobactérias
Testes realizados
Negativo
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por Enterobactérias
 
Bactérias mais comuns 
isoladas da Familia 
Enterobacteriaceae
Lactose Glicose
com 
produção 
de gás 
H2S Urease L-TD Motili
-dade
Indol Lisina
Descarb
o-xilase
Citrato
Escherichia coli + + - - - - /+ + + -
Klebsiella pneumoniae + + - + - - - + +
Enterobacter cloacae + + - - /+ - + - - /+ +
Citrobacter freundii - /+ + - /+ - /+ - + - / + - +
Arizona + + + - - + - + +
Shigella sp - +- - - - - - /+ - -
Edwardsiella tarda - + - /+ - - + + + -
Salmonella sp - + + - - + - + +
Serratia marcescens - + - - /+ - + - + +
Proteus mirabilis - + -/+ + + + - /+ - - 
Providencia rettgeri - + - - + + + - +
Yersinia enterocolitica - - - + - - /+ - / + - - /+
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Gastroenterites e infecções extraintestinais como infecções no 
trato urinário, meningites e sepses.
➢ A disseminação de E. coli é feita de pessoa – pessoa pela rota 
fecal-oral ou por contaminação de alimentos, água, leite e alimentos 
mal cozidos. Podem causar infecção gastrointestinal e extra-
intestinal, nesta última, compreendendo: trato urinário; septicemia; 
pneumonia nosocomial; meningites em recém-nascidos e infecção de 
feridas.
➢ As cepas de E.c que causam gastroenterites são subdivididas em 5 
grupos principais: 
 Enterobactérias de Importância Médica
Escherichia coli
➢ Enterotoxigenica (ETEC), Enteropatogenica (EPEC), 
Enteroagregativa (EAEC), Entero-hemorragica (EHEC), 
Enteroinvasiva (EIEC)
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por Enterobactérias
➢ Encontrada em países em desenvolvimento.
➢ Acometem crianças ou viajantes que vão para essas áreas. 
➢ As infecções são adquiridas por consumo de água e alimentos 
contaminados com fezes.
Escherichia coli: enterotoxigênica (ETEC)
 Enterobactérias de Importância Médica
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por Enterobactérias
➢ 1º associada a doença
➢ Diarréia infantil em países pobres.
➢ A transmissão ocorre de pessoa para pessoa.
➢ Ocorre ligação da bactéria as células do epitélio do intestino 
delgado....destruição das microvilosidades.
Escherichia coli: enteropatogenica (EPEC) 
 Enterobactérias de Importância Médica
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Diarréia aquosa persistentes com desidratação em crianças e 
viajantes que visitam esses países.
➢ Autoaglutinação “tijolos empilhados” processo mediado pela 
fímbria de aderência agregativa.
Escherichia coli: enteroagregativa (EAEC)
 Enterobactérias de Importância Médica
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Doenças em pessoas de países desenvolvidos
➢ Meses quentes e apresentam alta incidência em crianças com 
menos de 5 anos. 
➢ Transmissão: consumo de carne moída mal cozida e produtos 
derivados de leite não pasteurizado.
➢ Diarréia branda até uma colite hemorrágica.
Escherichia coli: entero-hemorragica (EHEC)
 Enterobactérias de Importância Médica
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por Enterobactérias
➢ Poucos frequentes em países em desenvolvimento. 
➢ Capazes de invadir e destruir o epitélio do cólon , produzindo uma 
doença caracterizada por diarréia aquosa até ulceração no colón.
Escherichia coli: enteroinvasiva (EIEC)
 Enterobactérias de Importância Médica
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Formas de infecção:
➢ Salmonella entérica- typhi, S. paratyphi.
Salmonella spp
 Enterobactérias de Importância Médica
Gastroenterites
Septicemia
Febre entérica 
Colonização assintomática
Febre tifóide
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por Enterobactérias
➢S.dysenteriae, S. flexneri, S.boydii, S. sonnei. 
➢ Shigellacausa doença invadindo e se multiplicando nas células que 
revestem o cólon. 
➢ Reservatório: humanos
➢ Doença pediátrica (60%-menores de 10 anos).
➢Transmissão: pessoa a pessoa pela via oro-fecal, mãos contaminadas e 
menos comumente em água e alimentos.
Shigella spp
 Enterobactérias de Importância Médica
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ Cápsula proeminente que é responsável pelo aumento da virulência dos 
micro-organismos e aparência mucoide das colônias isoladas . 
➢ K.pneumoniae e k. oxytoca são frequentemente isoladas e podem causar 
pneumonia.
➢ Destruição necróticas dos espaços alveolares, a formação de cavidades 
e produção de escarro com sangue. 
➢ Causa feridas, infecções nos tecidos moles e infecções do trato 
urinário.
 Enterobactérias de Importância Médica
Klebsiella spp e Enterobacter spp
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por Enterobactérias
➢ Infecção do trato urinário. P. vulgaris 
➢ Proteus mirabilis e P. vulgaris
➢ Favorece o aumento do pH da urina precipitando magnésio e cálcio , 
resultando na formação de cristais e formando cálculos renais.
 Enterobactérias de Importância Médica
Proteus spp, Morganella morganni e Providencia 
spp- 
 Uréia
Urease
Co2
NH3
 P. vulgaris 
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
➢ As infecções primarias causadas por esse grupo não são tão comuns em 
pacientes imunocompetentes. 
➢ Infecções adquiridas no hospital em pacientes neonatos e 
imunocomprometidos. 
 Enterobactérias de Importância Médica
Citrobacter e Serratia sp
Exame Macroscópicos
Exame Microscópico
Provas Bioquímicas
Provas Sorológicas
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
 Enterobactérias de Importância Médica
➢ Cultura: Meios seletivos: ágar MacConkey, ágar SS.
➢ O uso permite a separação das enterobacterias fermentadoras de 
lactose + ou não.
Determinar a importância clínica 
do isolado (ex: cepas patogênicas 
sorotipo especifico) e finalidade 
epidemiológica.
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas 
por Enterobactérias
 Enterobactérias de Importância Médica
Principais Provas de Identificação
 MEIO IAL (INSTITUTO ADOLFO LUTZ)
Este meio foi elaborado para triagem de enterobactérias e consiste de 9 
provas em apenas um tubo de ensaio, que consistem em: indol (tampa), 
fermentação da sacarose e glicose e produção de gás, fenilalanina, uréia, 
H2S, Lisina, Motilidade.
CONJUNTO EPM / MILI / CITRATO
Trata-se praticamente da mesma combinação de reações do meio IAL ou 
Rugai & Araújo (modificado por Pessoa & Silva), separados em 2 tubos, 
passando a verificação do indol da tampa do IAL, para o meio MILi após 
adição do reativo de Kovacs.
 MEIO IAL 
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 Enterobactérias de Importância Médica
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 Enterobactérias de Importância Médica
Principais Provas de Identificação
1. Fermentação da glicose
2. Fermentação da lactose
3. Motilidade
4. Utilização de citrato
5. Descarboxilação da lisina
6. Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)
7. Produção de gás (CO2)
8. Oxidase
9. Produção de indol
10. Produção de urease
11. Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase
 Enterobactérias de Importância Médica
 MEIO TSI (TRÍPLICE AÇUCAR FERRO) 
Considerado o mais clássico dos sistemas de identificação, necessita de 
provas adicionais, mas tem a vantagem de ser de mais fácil interpretação.
a) Púrpura/amarelo (ápice 
púrpuro e base amarela)
= Fermentação apenas da glicose (lactose e 
sacarose negativas)
b) Amarelo/amarelo (ápice e 
base amarelos)
= Fermentação da glicose + lactose e/ou 
sacarose (2 ou 3 açúcares)
c) Presença de gás (CO2) = Bolhas ou meio fragmentado
d) H2S positivo = Presença de precipitado negro
Alcalino/ Ácido: 
Principais exemplos de 
bactéria de interesse: 
Shigella spp e Serratia 
spp
Ácido/ Ácido: 
E.coli/ 
Enterobacter 
spp e Klebsiella 
spp
Alcalino/ ácido/ 
H2S: Principais: 
Proteus mirabilis 
e Salmonella spp
TSI
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 Enterobactérias de Importância Médica
Principais Provas de Identificação: SIM
➢ Motilidade e H2S e Indol (reativo de Kovacs). 
➢ Inoculação da bactéria através de picada central e incubar 24hs/35 C, 
adicionar 3 gotas de reativo de Kovacs após a leitura dos demais para o 
teste de indol.
➢ Motilidade: (+) meio turvo (-) meio límpido ou 
crescimento só no local do inóculo.
➢ SIM: coloração escura(+), meio permanece 
inalterado (-) .
➢ Indol: (+) formação de um anel rosa na superfície 
do meio.
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 Enterobactérias de Importância Médica
Principais Provas de Identificação: Citrato de Simmons
➢ Inocular na superfície e incubar 24h/35oC
➢ Citrato positivo = azul e/ou crescimento no meio
➢ Citrato negativo = cor verde (inalterado)
Uréia - avalia a capacidade de a bactéria hidrolizar ou não, a uréia
 Semeia por estrias em seguida incuba por 24 horas a 37ºC. 
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 Enterobactérias de Importância Médica
Principais Provas de Identificação: Uréia
Negativo
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Referências Bibliográficas
✓Microbiologia- Gerard J. Tortora.
✓ Microbiologia Ilustrada- Willian A. Strohl
✓ Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica- Carmen 
Oplustil et al.
✓ ANVISA
Meu DEUS, 
eu sou um 
gênio!!!