RESUMAO MICROBIOLOGIA CLINICA

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RESUMÃO MICROBIOLOGIA CLÍNICA
· Infecção nosocomial: 
- Nome técnico dado a infecção hospitalar (IH), que está relacionada à procedimentos clínicos e hospitalares, mas não necessariamente no hospital propriamente dito. 
- Características: 
· Admissão: não é válida caso tenha outros motivos para gerar a infecção, ou seja, a infecção precisa ser contraída sem precedentes.
· Permanência/48h antes: a nova doença foi adquirida durante a permanência no local.
· Internação – alta: algumas doenças são percebidas após a alta. 
· Estabelecimento de saúde. 
- Como são contraídas?
· Sistema imune (defesas imunológicas) precário. 
· Através do tecido cutâneo (pele).
· Transmissão cruzada (movimentação de bactérias, fungos etc.).
· No centro cirúrgico (é considerado IH até 30 dias após a cirurgia).
· Exceção (1 ano): colocação de prótese e válvulas cardíacas, ou seja, implementação de corpos estranhos no próprio corpo. 
- Diagnóstico: 
· 75% dos casos gera infecção urinária, pois geralmente são pacientes acamados que não levantam para urinar, gerando infecção. 
· Pneumonias.
· Septicemia/sepse (quando o sistema circulatório não supre mais oxigênio e nutrientes exigidos pelo corpo, gerando infecção generalizada).
· Feridas cirúrgicas.
· Identificação. 
- Tratamento: 
· Resistência. 
- Prevenção: POPs (Procedimento Operacional Padrão – determinados) e ações para minimizar os riscos, sendo elas: 
· Isolamento em casos de contágio (ex. tuberculose).
· Vacinação.
· Descarte dos materiais de risco biológico no lugar correto. 
· Roteiro de inspeção: 
1. Identificar o local. 
2. Leitos (quantidade).
3. Unidades (separar os setores).
4. Profissionais (lista).
· Treinamento com registro.
· Serviço de limpeza terminal (quando está esterilizado, geralmente com lacre de identificação que foi limpo), podendo ser próprio ou terceirizado. 
· CCHI = Comissão de Controle de Infecção Hospitalar, membros consultores e executores. 
· SVEIH: 
1. Imprescindível (I). 
2. Necessário (N). 
3. Recomendável (R).
Obs: são informativos (INR).
· Bactérias multirresistentes (MR):
- Microrganismos resistentes a vários grupos de antibióticos, sendo eles:
· MRSA: meticilina (penicilinas).
· VRSA: vancomicina.
· ORSA: oxacilina. 
- Mutações: 
· Fungos. 
· Staphylococcus aurus (S. Aurus), é a bactéria mais importante quando se trata de infecção bacteriana. 
(forma arredondada – “cachos de uva”).
- MRSA: 
· Contaminação de caracteres. 
· Grupo predominante: idosos. 
· Internação de longa duração.
· São eles: 
a) S. Aurus. 
b) Streptococcus pneumoniae (pneumococo) – pneumonia. 
c) Escherichia coli – intestino, causa contaminação urinária. 
d) Aspergilus fumigatus (aspergliose, 88/óbito) – fungo, afeta a parte respiratória. 
e) Klebsuela pneumoniae – meningite (problemas na meninge).
f) Rhizopus oryzae (fungo negro) – sistema imune comprometido. 
g) Pseudomonas aeruginosas – problemas urinários/sepse/ pneumonia. 
h) Clostridium difficile – difícil de os antibióticos curarem.
· Meios de cultura: 
Características: 
- São materiais nutritivos pré-preparados para o desenvolvimento dos microrganismos. 
- Especificidade (objetivo): isolamento e identificação. 
- Quanto ao estado físico:
· Sólido: ágar [1-2%].
· Semi-sólido: ágar até [5%].
· Líquido: sem solidificante.
Obs: a concentração do ágar (preparado feito de algas marinhas secas e pasteurizadas – pó) determina como o meio se apresenta.
- São quimicamente definidos, ou seja, é definido a quantidade específica de elementos de cada meio. Sendo suas definições: 
· Básicos: ágar + açúcar – meio de sobrevivência do organismo. Ex. ágar nutriente. 
· Complexos: fonte específica proteica, de origem vegetal e/ou animal. 
· Seletivos: seu objetivo é o favorecimento do crescimento de determinada bactéria da amostra, ainda permitindo o crescimento da outra. 
· Diferencial: específicos, só cresce no meio o microrganismo que eu desejo. 
· Pré-enriquecedor: recuperação da bactéria, ajuste e reparo da sua “sobrevivência”.
· Enriquecimento: separar o material coletado em pequenas e grandes quantidades.
- Meios e suas características: 
	MEIOS
	CARACTERÍSTICAS
	Ágar chocolate – bactérias fastidiosas.
	Branhamulla catarrhalis, Moraxella spp, Haemophillus spp, Neisseria spp.
	Ágar mac conkey – meio seletivo. 
	Seletivo (sais biliares/ CV/NaCl) – GNF (-).
	Ágar Mueller-Hunton.
	Avaliação de resistência (disco kirby-bauer).
	Ágar sangue – identificar quem forma hemólise (alfa – parcial / beta – total / gama – não forma).
	Hemólise Streptococcus e Staphylococcus spp.
	Caldo tioglicolato. 
	Meio líquido enriquecedor. 
	Ágar salmonella-shigilla (ASS).
	Isolamento e identificação. Também para lactose + e – ou H2S.
	Ágar saboraud – meio de crescimento geral para os fungos. 
	Candida spp: identificar. 
	Ágar chromoagar – de acordo com a coloração, é um tipo de cândida.
	Crescimento de Candida spp e outros fungos filamentosos. 
	Ágar manitol – S. aureus.
Seletivo a bactérias halófilas. 
	Sal = ação bacteriana, para que outras bactérias não cresçam.
Técnicas de semeadura/crescimento: 
- Padrão de crescimento da bactéria.
- Alça bacteriológica – flambada e esterilizada. 
- Boca dos tubos – flambada e esterilizada. 
- Bico de Bunsen – placas ao lado da chama.
Obs: o crescimento de microrganismos está diretamente relacionado com o meio de cultura.
Técnicas para implantar o material, semeadura (técnicas de superfície):
- Esgotamento: zigue-zague em sentido único, não soltando o contato da alça bacteriana com o material. Ela avalia a capacidade de crescimento do microrganismo. 
· Estria simples e composta. 
- Quantitativa: linhas retas e central perpendicular. 
· Alça calibrada. 
· Apenas amostra líquida. 
- Picada: não se usa placa e sim, um tubo de ensaio para maior agilidade. 
· A bactéria vai se espalhando por toda alça.
· Identifica a motilidade, ou seja, movimentação. 
- Pour-plate: do fundo para a superfície. 
· Passos do procedimento: 
1. Bactéria no fundo da placa vazia. 
2. Meio de cultura adicionado e cobrindo a bactéria. 
3. Junção.
4. Observação do crescimento bacteriano. 
· Verifica:
1. Forma: puntiforme, circular ou irregular. 
2. Elevação: plana, elevada ou complexa. 
3. Margem: total/inteira, lobular ou espiralada. 
· Diagnóstico diferencial de Cocos Gram positivos:
Características: 
- Inoculação primitiva em ágar sangue (meio base).
· Hemólise alfa: parcial. Halo cinza esverdeado. 
· Hemólise beta: total. Halo transparente.
· Hemólise gama: ausência de hemólise. 
- Forma, elevação e margem: 
Staphylococcus – diagnóstico diferencial: 
- Teste da catalase: 
· Se der positivo (bolhas): Staphylococcus spp., Micrococcus spp. / Se der negativo (sem bolhas): Streptococcus spp., Enterococcus spp. 
· Catalase = enzima. 
· Se o microrganismo tem catalase, quebra 2H2O2 em 2H2O + O2. E se há quebra, há formação de bolhas. 
· Etapas:
1. Coletar o centro de uma colônia suspeita e esfrega-la em uma lâmina. 
2. Colocar sobre o esfregaço uma gora de água oxigenada a 3% e observar a formação de bolhas.
· Deve-se passar com leveza no meio de cultura para não arrasta-lo e dar falso positivo. 
· Caso dê positivo, é feito o teste da coagulase: 
- Teste da coagulase: 
· Teste feito quando a catalase dá positivo. 
· Observa se a bactéria forma ou não um coágulo. 
· Coagulase (fator aglutinante) ligada na superfície da parede celular. “Clumping fator”: permite a aglutinação, reage com o fibrinogênio. 
· Etapas: 
1. Colocar 2 gotas de salina em uma** lâmina. 
2. Emulsionar uma colônia isolada a ser testada.
3. Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito. 
4. Observar a aglutinação em 10 segundos.
· Se der positivo: Staphylococcus aureus.
· Se der negativo: teste com novobiocina.
- Teste com novobiocina: 
· Novobiocina = antibiótico. 
· Teste feito para identificar qual Stphylo é. 
· Quando for resistente ao antibiótico não há formação de halos, isso indica que a bactéria é Staphylococcus saprophyticus. 
· Quando for sensível (não resistente) ao antibiótico, há formação de halos/distância,isso indica que a bactéria é Staphylococcus epidermidis. 
 
Adendos: 
- Staphylococcus aureus: 
· Colonização transitória: alta resistência no ambiente, abcessos, pele escaldada, enterotoxicose, endocardite.
· Grupos multirresistentes a antibióticos: vancomicina, meticilina, oxacilina. 
- Staphylococcus coagulase negativa: 
· Staphylococcus epidermidis: infecções de cateteres e próteses, microrganismo mais frequente em hemoculturas. 
· Staphylococcus saprophyticus: infecção urinária em mulheres jovens. 
· Staphylococcus haemolyticus: resistência aumentada aos antimicrobianos, endocardite e septicemia. 
Teste da oxidase: 
- É baseado na produção de uma enzima oxidase intracelular pela bactéria. 
- As bactérias que possuem atividade de citocromo-oxidase (oxidase positiva) provocam uma oxidação rápida do reativo, que quando reduzido é incolor e desenvolve coloração púrpura intensa quando oxidado. 
- Esse teste é muito útil para diferenciar as enterobactérias (oxidase-negativa) das Pseudomonas spp. 
- A enzima citocromo oxidase está envolvida com a redução do oxigênio no final da cadeia de transporte de elétrons.
- Etapas: 
1. Transferir uma ou duas colônias e espalhar sobre a superfície da área reagente da tira. 
2. Observar o resultado em até 2 minutos, o desenvolvimento de uma coloração violeta caracteriza a prova da oxidase positiva. 
Streptococcus – diagnóstico diferencial: 
- Streptococcus caracteríticas: 
· Pode se apresentar em pares (diplococos) ou cadeias. 
· As colônias são discoides, mucoides, opacas ou brilhantes.
· São fastidiosos, imóveis, não esporulados, mesófilos (temperatura que varia entre 20-25°C, ou seja, temp. ambiente) e a grande maioria anaeróbios facultativos. 
- Classificação por tipo de hemólise em ágar sangue (streptococcus divididos em 4 grupos): 
1. S. pneumoniae:
· Preferência pelo sistema respiratório. 
· Hemólise alfa.
· Pneumonia, bacteremia, meningite/otite, artrite séptica.
2. S. pyogenes:
· Produção de pus.
· Comum em crianças e idosos (vinculado ao sistema imune).
· Hemólise beta. 
· Faringites, erisipela, endocardites, febre reumática.
3. S. agalactiae:
· Relacionado a gestantes (pode causar abortos, partos prematuros e danos severos ao bebê, que pode se contaminar no canal do parto).
· Hemólise beta. 
· Sepse, meningite, bacteremia, endocardite.
4. S. grupo viridans:
· Predileção na boca, porém também presente no TGI.
· Biofilme dentário (forma a placa bacteriana que pode gerar tártaro).
· Hemólise alfa. 
· Microbiota, contaminante, endocardite, biofilme dentário.
- Classificação de Lancefield: 
· Classificação sorológica, ou seja, observa-se complexo Ag-Ac.
· Baseia-se nas características antigênicas de um polissacarídeo de composição variável, chamado de carboidrato C, localizado na parede da célula, que pode ser detectado por diferentes técnicas imunológicas. 
· Tomando por base estre polissacarídeo, os streptococcus foram divididos em 20 grupos sorológicos (grupos de Lancefield), designados por letras do alfabeto.
Testes: 
- Teste da catalase: 
· O teste da catalase quando da negativo, pode indicar Streptococcus spp. ou Enterococcus spp. 
- Hemólises: 
Hemólise alfa: 
- Teste da optoquina: 
· Preparar uma suspensão do isolado em solução salina 0,5 da escala de McFarland. 
· Semear a suspensão em uma placa de ágar sangue de forma a obter crescimento confluente.
· Após a absorção da suspensão pelo meio de cultura, colocar um disco de optoquina na superfície do meio semeado, com o auxílio de uma pinça. Incubar. 
· Se for sensível a optoquina: S. pneumoniae.
· Se for resistente a optoquina: S. grupo viridans.
- Bile solubilidade: 
· Preparar uma suspensão bacteriana densa a partir da cultura recente. 
· Os sais biliares têm a capacidade de lisar seletivamente o S.pneumoniae durante o crescimento, ativam as autolisinas produzidas pelo pneumococo. 
· Positivo: turvação menor ou límpido. O teste fica turvo quando há bactéria, pois a bile (sais biliares) quebra a parede celular, gerando gordura = turvação. 
· Se for positivo a bile solubilidade: S. pneumoniae.
· Se for negativo a bile solubilidade: S. grupo viridans.
Hemólise beta: 
- Teste CAMP:
· Identifica as cepas de S. agalactiae. Estas cepas produzem o fator CAMP que atua sinergicamente com a beta-hemolisina, produzida pelo S. aureus em ágar sangue. 
· Positivo: a formação de uma seta ou meia lua convergindo para o S. aureus na intersecção do crescimento das duas bactérias indica que o teste é positivo e indicativo de S. agalactiae. 
· Caso seja negativo, indica outros. 
- Teste PYR: 
· Determina a atividade da enzima pyrrolidonil arilamidase produzida pelo S. pyogenes, mas não pelos demais streptococcus beta-hemolíticos. 
· Positivo: coloração vermelha. 
· S. pyogenes e Enterococcus spp. são PYR positivos. 
- Teste da Bacitracina: 
· Diferencia S. pyogenes de outras cepas do grupo A ou de outras espécies com colônias beta-hemolíticas PYR positivas, pois pode haver contaminação (falso positivo).
· Positivo: a presença de qualquer halo de inibição ao redor do disco é interpretado como sensibilidade a bacitracina e indicativo de S. pyogenes. 
Hemólise gama: 
- Teste bile esculina:
· Testa a capacidade de hidrolisar esculina na presença de bile. 
· Coloração inicial do ágar: esverdeada. 
· Positivo: enegrecimento do meio. 
- Teste NaCl 6,5%:
· Caldo BHI + NaCl.
· Positivo: turvação do meio. 
Enterococcus – diagnóstico diferencial: 
- Enterococcus características: 
· Apresenta morfologia esférica (cocos) aos pares ou cadeias curtas. 
· São imóveis (exceções), não esporulados, anaeróbios facultativos. 
· Crescimento em ampla faixa de temperatura. pH e elevada pressão osmótica (alta concentração, meios hipertônicos). 
- TGI: podem ser isolados em indivíduos saudáveis em localizações como pele, região peri-anal, via hepato-biliar e em secreções de orofaringe e vaginal.
- Associações clínicas: 
· Infecções do trato urinário (ITU).
· Infecções da corrente sanguínea (ICS).
· Infecções de sítio cirúrgico e intra-abdominais. 
· Endocardite bacteriana. 
Resumão de diagnósticos (Streptococcus e Enterococcus): 
· Diagnóstico diferencial de Neisserias:
Características: 
- Geralmente habitam membranas mucosas de mamíferos. 
- Diplococos Gram-negativos: 
· Achatados nas laterais. 
· Forma de rim/grão de feijão. 
- Catalase/oxidase positivas. 
- Diagnóstico diferencial: Moraxella catharralis (diplococo – pneumonia).
- Bacterioscopia – ágar chocolate.
· No ágar chocolate (meio de cultura) é adicionado sangue na hora. Com água quente, o sangue sofre hemólise, liberando ferro, por isso a cor do meio fica escura (marrom avermelhado).
· Meio enriquecido, crescimento de fastidiosos.
- Ágar Thayer-Martin: 
· Isolamento seletivo.
· Contém antibióticos.
· Neisseria saprófitas e outras (contaminação).
· Laboratório: 
Diluição seriada: 
- Objetivo: quantificação bacteriana. 
- Cada colônia tem origem e se multiplica de uma bactéria. 
Antibiograma: 
- Prova microbiológica (direciona o tratamento de escolha, identificando se a bactéria é sensível, resistente ou intermediária ao antibiótico).
· Para saber se é resistente ou não, é necessário medir o diâmetro do halo formado, e analisar os valores de referência. 
Cálculos bacterianos: 
1. Amostragem geral: 
Tf = Ti x 2n 
- Tf = quantidade final total de bactérias. 
- Ti = T0, número inicial de bactérias. 
- 2 = número fixo da equação. 
- N = esse N está elevado, na forma exponencial (log). Ele representa o número de multiplicações/gerações, ou seja, o quanto a bactéria se multiplicou dentro de X minutos. 
Exemplo: 
- Variação de T = 10 min (a bactéria se multiplica a cada 10 min).
- Entre 18h – 18:30. 
- Ti = 12.
- Tf = ?
- Resolução: 
Entre 18h e 18:30, há 30 minutos, a bactéria nesse exemplo se multiplica a cada 10 minutos, no entanto, dentro de 30 minutos ela se multiplicará 3 vezes, sendo esse o valor de N. 
Tf = 12 x 2³
Tf = 12 x 8
Tf = 96 bactérias. 
2. Cálculo de UFC/ml: 
UFC/ml = X (media) . número de colônias (plaqueamento prévio) / diluição utilizada. 1 / volume inoculado no meio de cultura. 
- UFC/ml = número de bactérias por ml. 
- Usamos: 
· 25 – 250 UFC (bactérias).
· 10 -100 UFC (bolores).
Exemplo: 
- Placa com 9 colônias.
- Volume = 0,01 ml.
- Resolução: 
UFC/ml = X.9 / 10-² . 1 / 100ul ou 0,1ml
UFC/ml = 9.100.10 
UFC/ml = 9.10³ bactérias em 1 ml. 
Ou
UFC/ml = 9.000 bactérias em 1ml.
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