Aula 2 MÉTODO DE ESTUDO DE CÉLULA2

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MÉTODOS DE ESTUDOS DA 
CÉLULA 
 
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE 
CENTRO DE BIOCIÊNCIAS 
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E GENÉTICA 
Prof. Delando Nasário de Medeiros 
1. INTRODUÇÃO 
 1. Aperfeiçoamento dos métodos de investigação. 
 2. Microscópio óptico de luz  célula. 
 3. Microscópio eletrônico  organelas e moléculas 
celulares 
 3. Equipamentos como ferramentas de estudos. 
 4. Biologia Celular e Molecular  depende de 
aperfeiçoamento de instrumentos e técnicas de 
pesquisa. 
TAMANHO DAS CÉLULAS 
• Hemácia humana - 7.6 µm 
 Óvulo Humano - ~100 µm 
TAMANHO DAS CÉLULAS 
 
2. OBJETIVOS: 
 
Compreender os métodos gerais empregados para 
decifrar as estruturas e as funções celulares. 
 
Identificar a importância das técnicas e suas 
metodologias experimentais no estudo das células. 
3. MÉTODOS: 
 3.1.PREPARADOS PERMANENTES: 
 Fixação do material (1ª etapa) 
 Finalidades: 
 Evitar autólise 
 Impedir invasão de microrganismos decompositores. 
 Endurecimento do tecido (célula) para os cortes. 
 Aumentar afinidade por corantes (MO) e contrastantes 
em (ME). 
 
 
3.2. FIXADORES: 
 
 a) Formaldeído  H-C-OH 
 Não Forma ligação cruzada 
 Preserva a integridade bioquímica e antigênica da célula 
b) Glutaraldeído  HOC-CH2-CH2-CH2-COH 
 Forma ligação cruzada com o grupo amina livre das 
proteínas 
 Fixa bem proteínas 
 Fixador aditivo 
 Concentração 2,5% 
3.2. FIXADORES: 
3.2. FIXADORES: 
 
c) Tetróxido de ósmio: OsO4 
 Usado na segunda fixação 
 Fixa bem lipídios (ácidos graxos insaturados) 
 Confere contraste as membranas 
 Poder de penetração 1mm/hora 
 Não fixa bem proteínas devido ao 
deslocamento do ponto isoelétrico 
d) Misturas Fixadoras  contêm proporções 
variadas. 
 
3.3. Microtomia: corte do material 
1. Microscopia óptica  inclusão parafina 
2. Microscopia eletrônica  inclusão resinas 
3.3. Microtomia: corte do material 
 
3.4. Coloração/Contrastação: 
Corantes: ácidos, básicos e vitais. 
 
Contrastantes: conferir melhor 
visualização 
 
Acetato de Uranila, citrato de Chumbo, 
OsO4. 
4. MICROSCOPIA 
4.1. MICROSCOPIA ÓPTICA: 
a) Histórico 
Hans Jansen – 1590 
Roberto Hooke – 1665 
Antony Leeuwenhoeck – 1674 (MO 266X) 
4. MICROSCOPIA ÓPTICA: 
Hans Jansen–1590 
Antony Leeuwenhoeck-1674 
Roberto Hooke-1665 
4. MICROSCOPIA: 
b) Limite de resolução e poder de resolução. 
 
Olho Humano - 0,2mm 
 
MO - 0,2µm 
 
ME - 0,2nm 
PODER DE RESOLUÇÃO 
 PR de um microscópio é a 
capacidade de: 
 
 Separar detalhes 
 
 Produzir imagens separadas de 
partículas muito próximas 
 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Tipos: 
 
 
MET 
MEV 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Micrografias: imagens. 
5. CITOQUÍMICA: 
Localização intracelular das diversas 
substâncias que compõem a célula. 
Reação de Feulgen: reação específica para 
DNA 
1ª etapa HCl quente 
2ª etapa reativo de Schiff 
Lei de Lambert-Beer 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
Localização intracelular de proteínas 
específicas. 
Tipos: 
Imunocitoquímica direta: antígeno/anticorpo 
 
Imunocitoquímica indireta: marcação de 
antianticorpo. 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
7. ELETROFORESE EM GEL: 
 Separação de diversas substâncias (íons ou 
moléculas) de uma solução, de acordo 
com suas cargas elétricas. 
7. ELETROFORESE EM GEL 
8. PCR (Reação de Polimerização em Cadeia) 
Amplificação de regiões específicas do DNA. 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
1. Cultura de células vegetais: (Meio 
de cultura MS) 
2. Germinação in vitro 
3. Micropropagação in vitro 
4. Formação de calos 
5. Fusão de células: protoplastos 
(heterocários) 
6. Micropropagação de plantas 
geneticamente modificada 
(plantas transgênicas) 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
1. Cultura de células animais: meio de 
cultura 
2. Embriões clonados 
3. Células tronco 
4. Animais geneticamente modificados 
(animais transgênicos) 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
1. Fertilização in vitro 
 Animais estéreis 
 Ejaculação retrógrada 
 Determinação do sexo extra-uterino 
 Poliembrionia 
 Fertilização pós-mortem 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
Fertilização in vitro 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
 Micromanipulação in vitro: inoculação 
do núcleo do espermatozóide no óvulo