PCR lepto
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PCR lepto


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Acta Scientiae Veterinariae, 2013. 41: 1114.
 RESEARCH ARTICLE
 Pub. 1114
ISSN 1679-9216
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Received: 18 May 2012 Accepted: 24 October 2012 Published: 30 January 2013
¹Discente, Curso de Medicina Veterinária da Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), Ilhéus, Bahia, Brazil. ²Hospital Veterinário - UESC, Ilhéus, 
Bahia. ³Clinica de Pequenos Animais. 4Pleno de Genética e Melhoramento Animal do Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, UESC, Ilhéus, 
Bahia. CORRESPONDENCE: F.S. Carvalho [fabiouesc@gmail.com - Tel.: +55 (73) 3680-5406]. Universidade Estadual de Santa Cruz, Hospital Vet-
erinário, km 16, Salobrinho. CEP 45662-900 Ilhéus, Bahia, Brazil.
Investigação molecular de Leptospira spp. em rins de bovinos 
Molecular Research of Leptospira spp. in Kidneys of Cattle 
Janaína Maria Xavier Corrêa¹, Fábio Santos Carvalho², 
Renata Santiago Alberto Carlos³ & Amauri Arias Wenceslau4
ABSTRACT 
Background: Leptospirosis is a zoonotic bacterial disease caused by Leptospira spp. that affects wild and domestic animals 
and humans. It has a worldwide distribution and causes public health problems and economic losses in livestock. The genus 
Leptospira is divided basically into two species: the Leptospira interrogans that is pathogenic and Leptospira bifl exa that 
is considered saprobic. Cattle are an important source of infection, mainly to humans who work with these animals such 
as breeders, cowboys, slaughtermen, veterinarians and agricultural technicians. The temperature and rainfall indices of 
tropical and subtropical climate regions encourage the continuing disease outbreaks. In humans the symptoms are head-
ache, fever, myalgia, nausea and vomiting. The identifi cation of the disease is possible with some tests such as ELISA, 
immunofl uorescence, bacterial culture, and Polymerase Chain Reaction (PCR). The aim of this work was to perform the 
molecular research for the presence of Leptospira spp. in kidneys of cattle refuted at a slaughterhouse.
Materials, Methods & Results: Two hundred fragments of cattle kidney were collected at slaughterhouse located at Ilhéus, 
Bahia, Brazil. The macroscopic kidney refutation causes were nefritis, presence of cysts, congestion and presence of whit-
ening and hemorrhagic areas. The kidney samples were placed in plastic containers identifi ed and packed in an isother-
mal box until arrival at the laboratory, where they were kept at -20°C until the DNA extraction with phenol/chloroform/
isoamyl alcohol (25:24:1). The DNA was quantifi ed by spectrophotometer at 260 nm wavelength. The integrity of DNA 
was evaluated with 1% agarose gel stained with ethidium bromide and visualized at an ultraviolet light transilluminator. 
DNA amplifi cation was performed with primers G1- [forward] 5\u2019-CTGAATCGCTGTATAAAAGT-3\u2019 and G2- [reverse] 
5\u2019-GGAAAACAAATGGTCGGAAG-3\u2019 for pathogenic and non-pathogenic Leptospira. Aliquots of 50 ng/µL of extracted 
DNA were used for PCR reaction. Out of 200 tissue samples, 16 (8%) were positive and the amplifi ed fragments had 
molecular weight compatible with Leptospira spp. 
Discussion: The amplicons presented molecular weight compatible with pathogenic and non-pathogenic strains of Leptospira 
spp. wich may represent a health risk for the ones who may contact animals or consume uncoocked products. Leptospira 
molecular diagnose may allow the pathogen identifi cation in asymptomatic animals from small DNA amounts. Primers G1 
and G2 amplifi ed bacterial 16S rRNA gene area, allowing the identifi cation. The renal tissue alterations identifi ed during 
inspection, may be associated with Leptospira spp. presence showing the fundamental importance of correct identifi cation 
and discard of affected organs in order to reduce the bacterial transmission risk. Many articles have being showing the 
Leptospira cattle prevalence and human risks by contacting these animals. The results presented in this article emphasizes 
the importance of the cattle as possible transmitters of the pathogen for slaughterhouses workers and meat inspectors, vet-
erinarians as well as rural workers and their families, being critical to conduct orientation and conscientization programs 
about the problem and ways to combat and control it.
Keywords: leptospirosis, PCR, kydneys, slaughterhouse, zoonosis, Bos taurus. 
Descritores: leptospirose, PCR, rins, abatedouros, zoonoses, Bos taurus.
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 J.M.X. Corrêa, F.S. Carvalho, R.S.A. Carlos & A.A. Wenceslau. 2013. Investigação molecular de Leptospira spp. em rins de bovinos. 
 Acta Scientiae Veterinariae. 41: 1114.
INTRODUÇÃO
Leptospiras são bactérias espiroquetas móveis 
pertencentes ao gênero Leptospira que é composto por 
duas espécies: L. interrogans que é patogênica com 
mais de 200 sorotipos e L. bifl exa que é sapróbica [7]. A 
leptospirose tem ocorrência mundial, porém as regiões 
com climas tropical e subtropical favorecem a ocor-
rência da doença, sendo endêmica no Brasil [1,4,24]. 
A leptospirose é uma doença com caráter 
ocupacional que acomete agricultores, criadores de 
gado, veterinários e funcionários de matadouros, nesses 
indivíduos a doença parece estar associada à infecção 
em bovinos [3,7,16,21,22]. 
Os principais sinais clínicos da leptospirose em 
bovinos são febre, anorexia, hemoglobinúria, icterícia 
e dispnéia. As manifestações clínicas crônicas são 
abortos, infertilidade, repetições de cio, nascimentos de 
bezerros fracos, agalactia e mastite [5,20,24]. Os sinais 
clínicos em humanos são cefaléia, febre, mialgia, ic-
terícia, incapacidade renal leve, insufi ciência hepática, 
vômitos e hemorragia pulmonar [2,21].
Essa zoonose além de propiciar problemas na 
saúde pública acarreta perdas econômicas devido aos 
entraves do processo de reprodução dos bovinos [22,24]. 
Exames como o ELISA, imunofl uorescência 
e a cultura bacteriana podem ser utilizados para o di-
agnóstico, sendo a Reação em Cadeia da Polimerase 
(PCR) sensível, específi ca e rápida para identifi car 
o DNA do agente em tecidos e fluidos corporais 
[8,16,19,27], como o sêmen [13,28], rim, fígado, 
conteúdo estomacal de fetos, placenta, cotilédone [14], 
urina [12] e sangue [25]. 
O trabalho investigou, através de método 
molecular, a presença de Leptospira spp. em rins de 
bovinos refutados no abate. 
MATERIAIS E MÉTODOS
A cidade de Ilhéus localiza-se no litoral sul do 
Estado da Bahia (14º 47\u2019 20\u201d de latitude sul, 39º 02\u2019 
56\u201d de longitude oeste). Encontra-se no nível do mar 
e possui área territorial de 1.760,004 Km2 e 184.236 
habitantes segundo senso IBGE 2010 [11]. O clima 
é tropical e o índice pluviométrico médio anual está 
entre 2000-2400 mm. Foram coletadas 200 amostras 
de rins de bovinos refutados durante abate no frigorí-
fi co localizado em Ilhéus, Bahia, nos meses de agosto, 
setembro, outubro e novembro de 2010. 
As amostras de rins foram escolhidas após 
a inspeção das vísceras pelo médico veterinário re-
sponsável, colocados individualmente em recipientes 
plásticos, devidamente vedados, identifi cados e acondi-
cionadas em isopor com gelo, sendo encaminhadas 
para o Laboratório de Genética Animal do Hospital 
Veterinário da Universidade Estadual de Santa Cruz, 
onde as amostras foram mantidas a - 20°C até o mo-
mento do processamento. 
Extração do DNA genômico
Para a extração de DNA genômico dos rins 
dos bovinos utilizou-se 100 mg do tecido que foram 
mergulhados em nitrogênio líquido e macerados. Em 
seguida foi adicionado 500 µL de tampão de extração 
(10 mM Tris-HCl, pH 8,0; 200 mM EDTA 200, pH 8,0 
e 10 mg/mL RNAse