MicroAmbiental_ IntroduçaoMEIOS2013

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UNIVERSIDADE DO OESTE DE SANTA CATARINA
CAMPUS DE VIDEIRA
CURSO: ENGENHARIA SANITÁRIA E AMBIENTAL
DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGIA GERAL
Sabrina Pinto Salamoni
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Crescimento microbiano
 Refere-se ao número e não ao tamanho da célula
 O crescimento é influenciado por fatores físicos e fatores químicos 
 Fatores físicos : pH, temperatura, pressão osmótica
 Fatores químicos: água, fontes de carbono, fontes de nitrogênio, minerais
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Fatores Físicos - Temperatura
 Psicrófilos – crescimento em baixas temperaturas
 Mesófilos – crescimento em temperaturas moderadas
Termófilos – crescimento em altas temperaturas
 Temperatura mínima, temperatura máxima e temperatura ótima
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Psicrófilos – crescem a 0ºC
Psicrotróficos – também crescem a 0 ºC, mas seu ótimo 10-15ºC
Mesófilos – sua temperatura ótima de crescimento está entre 25 e 40 ºC
Termófilos – temperatura ótima está entre 40 e 60ºC
Termófilos extremos ou hipertermófilos – não crescem abaixo de 45ºC
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 Fatores Físicos – pH
 A maioria daas bactérias cresce próximo a neutralidade (6,5 – 7,5)
 Acidófilos maioria fungos com crescimento em pH 5 e 6
 Em laboratório, geralmente são empregados soluções tampão (K2HPO2, KH2HPO4)
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 Fatores Físicos – Pressão osmótica
 Plasmólise –célula em solução hipertônica, membrana se desprende da parede celular
 Halofílicas extremas 
 halofílicas obrigatórias – 30% de sal
 halofílicas facultativas – 2% de sal
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 Fatores Químicos
 Macronutrientes – requeridos em maior quantidade
 (H2O, C, N, S, P)
 Micronutrientes – necessários ao metabolismo, mas 
em menores proporções
Carbono
 Elemento estrutural básico, essencial para a síntese de compostos orgânicos
 Representa metade do peso seco
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 Quimioheterotróficos - a fonte energia e de carbono provêm de compostos orgânicos 
 Quimioautotróficos – fonte de cabono, dióxido de carbono
Nitrogênio, Enxofre e Fósforo
 Síntese de proteínas, síntese de DNA, RNA, e de ATP
 Fonte de nitrogênio
 Matéria orgânica, íons amônia, nitratos ou fixação biológica 
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 Macronutrientes
Enxofre
 Síntese de aminoácidos e vitaminas como tiamina e biotina
 Fontes de enxofre- sulfatos,sulfito de hidrogênio e aminoácidos
Fósforo
 Síntese de ácidos nucleicos, fosfolipídeos e ATP
 Micronutrientes: Mg, K, Ca, Mb, Fe, Co,Zn
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Aeróbios Anaeróbio Anaeróbio Anaeróbio Microaerófilo
Obrigatório Facultativo Obrigatório Aerotolerante
 Aeróbios estritos - microrganismos capazes de utilizar oxigênio molecular
 Anaeróbios facultativos – podem utilizar oxigênio, mas na sua ausência realizam respiração anaeróbia e fermentação
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 Crescimento anaeróbio
 Meios redutores (tioglicolato de sódio, bicarbonato de sódio e boroidreto de sódio)
 Maior concentração de CO2
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JARRA DE ANAEROBIOSE
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 Meios de cultura
 Material nutriente preparado em laboratório para o crescimento de microrganismos
 Alguns microrganismos possuem maiores requerimentos, outros não são cultiváveis
 Meio estéril - ausência de microrganismos viáveis (água, nutrientes, pH)
 Ágar – polissacarídeo sintetizado por algas marinhas, solidifica o meio de cultura
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Os meios de cultura, de acordo com a sua aplicação ou função, podem ser classificados, entre outros, como:
Meios Enriquecidos: a adição de sangue, soro ou extratos de tecidos
animais ou vegetais ao caldo ou ágar nutritivos proporciona nutrientes acessórios, de modo que o meio possa permitir o crescimento de heterotróficos fastidiosos.
Meios Seletivos: a adição de certas substâncias químicas específicas ao
ágar nutritivo previne o crescimento de um grupo de bactérias sem agir sobre outras. O cristal violeta, por exemplo, em uma dada concentração, impede o crescimento de bactérias gram-positivas, sem afetar o desenvolvimento das bactérias gram-negativas.
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Meios Diferenciais: a incorporação de certos reagentes ou substâncias químicas no meio pode resultar num tipo de crescimento ou modificação, após a inoculação e a incubação, que permite ao observador distinguir os tipos de bactérias.
 Por exemplo, inoculando-se uma mistura de bactérias num meio de ágar sangue, algumas das bactérias podem hemolisar as células vermelhas e outras não. 
A zona clara ao redor da colônia é a evidência de ter ocorrido a hemólise. Assim, pode-se estabelecer a distinção entre bactérias hemolíticas e não-hemolíticas, de acordo com o seu desenvolvimento.
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 Meio quimicamente definido
 Composição química exata é definida (sais,aminoácidos, vitaminas, carboidrtatos)
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 Meio complexo
 Compostos extrato de levedura, de carne e produtos de digestão protéica 
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Meio seletivo – favorece o crescimento do microrganismo de interesse impedindo o crescimento de outros.
 Ágar sulfeto bismuto – Salmonella typhi
 Sabouraud dextrose – pH 5 e verde brilhante (fungos)
Meio diferencial – identificação de colônias de interesse quando existem outras bactérias crescendo na mesma placa de cultivo
 
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Ágar sangue – microrganismos hemolíticos e não hemolíticos
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E. coli em meio EMB
Pseudomonas aeruginosa em Cetrimide
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 Meio diferencial e seletivo
Ágar sal manitol (7,5% de sal e manitol)
 A concentração de sal seleciona os microrganismos tolerantes e o manitol permite diferenciar colônias que fermentam este carboidrato
Ágar MacConkey 
 Os sais biliares e cristal de violeta inibem Gram positivas, e a lactose presente no meio diferencia fermentadores de não fermentadores
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Meio MacConkey
Ágar sal manitol
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Obtenção de culturas puras
 Método de semeadura por esgotamento
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Preservação de culturas
 Preservação por curtos períodos – refrigeração
 Preservação por tempo prolongado
 Congelamento – rápido congelamento a baixas temperaturas
 Liofilização – suspensão congelada e sublimada
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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO
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 Fases de Crescimento 
Fase lag – adaptação, intensa atividade metabólica, síntese de enzimas e DNA. Número de células sofre pequena alteração
Fase log – células estão em divisão celular, tempo de geração constante.
Fase estacionária – taxa de crescimento igual a morte
Fase declínio – taxa de morte maior que taxa de crescimento
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N de gerações =Log n de células finais – Log n. células iniciais
 0,301
Tempo de geração = 60 min X horas 
 n de gerações