Aula 5 - Coloracao de Gram e Ziehl-Neelsen

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MICROBIOLOGIA CLÍNICA
PROFA. JAQUELINE BARBOSA
COLORAÇÃO DE GRAM E ZIEHL-NEELSEN
PREPARO DOS ESFREGAÇOS
❑ Preparação do esfregaço para coloração
de cultivos em meio líquido:
1. Flambar a alça corretamente;
2. Esfriá-la nas paredes do tubo;
3. Introduzir a alça no meio líquido de maneira
que esse forme um filme sobre o loop da alça;
4. Colocar o material coletado sobre a lâmina
limpa e seca;
Fonte: https://www.ibb.unesp.br/Home/ensino/departamentos/microbiologiaeimunologia/aula-nutricao-cresc.-meio-cultura-e-bioq.vet.pdf
5. Espalhar o material sobre a lâmina,
procurando obter um esfregaço fino;
6. Secar em temperatura ambiente;
7. Após o esfregaço ficar completamente
seco, com auxílio da pinça de madeira,
fixá-lo na chama do bico de Bunsen,
passando a lâmina 2 a 3 vezes pela chama;
8. Realizar a coloração.
Fonte: https://www.scienceprofonline.com/microbiology/how-to-prepare-microscope-slide-of-bacteria.html
PREPARO DOS ESFREGAÇOS
❑ Preparação do esfregaço para coloração
de cultivos em meio sólido:
1. Com a alça de platina, transferir uma pequena
gota de água para a lâmina;
2. Flambar a alça corretamente;
3. Esfriá-la no meio sólido (região sem colônias);
4. Coletar uma colônia e transferir para a pequena
gota de água na lâmina.
Fonte: https://www.laboratuvar.com/pt/kozmetik-testleri/mikrobiyolojik-analizler/staphylococcus-aureus-aranmasi
PREPARO DOS ESFREGAÇOS
5. Espalhar bem com movimentos suaves,
evitando a quebra dos agrupamentos
bacterianos;
6. Secar em temperatura ambiente;
7. Após o esfregaço ficar completamente seco,
com auxílio da pinça de madeira, fixá-lo na
chama do bico de Bunsen, passando a lâmina
2 a 3 vezes pela chama;
8. Realizar a coloração.
Fonte: https://www.scienceprofonline.com/microbiology/how-to-prepare-microscope-slide-of-bacteria.html
PREPARO DOS ESFREGAÇOS
COLORAÇÃO DE GRAM
➢ A técnica da coloração de
Gram foi desenvolvida em
1884 pelo bacteriologista
holandês Hans Christian
Gram. Essa coloração é uma
das mais importantes e
rotineiramente utilizada nos
laboratórios de bacteriologia.
Fonte: https://www.bbc.com/mundo/noticias-49688678
COLORAÇÃO DE GRAM
➢ Permite classificar as bactérias em
dois grandes grupos:
• As que retêm o corante Violeta de
Genciana (cristal violeta) –
Gram-positivas
• As que não retêm esse corante –
Gram-negativas
Fonte:
Fonte: https://pt.khanacademy.org/science/biology/bacteria-archaea/prokaryote-structure/a/prokaryote-structure
Fonte: https://blog.jaleko.com.br/esbl-kpc-mbl-ampc-e-oxa-voce-sabe-a-diferenca-entre-os-tipos-de-%CE%B2-lactamases/esquema-ilustrando-os-componentes-da-parede-celular-de-bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/
COLORAÇÃO DE GRAM
Fonte: https://www.sanarmed.com/resumo-bacterias-gram-negativas-definicao-classificacao-e-patologias
1 min 1 min 15 seg 30 seg
Fonte: https://publica.ciar.ufg.br/ebooks/iptsp/bacteriologia_humana/artigo_1.html
COLORAÇÃO DE GRAM
Fonte: https://www.blogs.unicamp.br/blog/grande-gram/
➢ INTERPRETAÇÃO – Leitura ao
microscópio óptico, em objetiva
de imersão (100x):
✓ Bactérias Gram-positivas: coradas em 
roxo.
✓ Bactérias Gram-negativas: coradas 
em vermelho.
Gram-positivos
Streptococcus oralis Bacillus subtilis
Gram-negativos
Fontes: https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Streptococcus_oralis; https://www.ihappysci.com/product/bacillus-subtilis-smear/; https://www.luciacangussu.bio.br/atlas/escherichia-coli/; https://quizlet.com/106517844/neisseria-
gonorrhoeae-flash-cards/ 
Escherichia coli Neisseria gonorrhoeae
COLORAÇÃO DIFERENCIAL (ZIEHL-NEELSEN)
Fonte: https://en.renylab.ind.br/produto/kit-ziehl-neelsen/
➢ Coloração diferencial importante
denominada de coloração álcool-
ácido resistente, que classifica as
bactérias em um grupo distinto
(Bacilos Álcool-Ácido Resistentes
– BAAR).
COLORAÇÃO DIFERENCIAL (ZIEHL-NEELSEN)
Fonte: http://anatpat.unicamp.br/nptneurotbc2.html
➢ A coloração de Ziehl-Neelsen
baseia-se na capacidade de
algumas bactérias resistirem aos
métodos comuns de coloração
devido à composição altamente
lipídica da parede celular.
COLORAÇÃO DIFERENCIAL (ZIEHL-NEELSEN)
➢ O método permite identificar os microrganismos que possuem paredes
celulares ricas em ácido micólico, capazes de resistirem ao descoramento
pela mistura álcool-ácido, depois de corados a quente pela fucsina (Ex:
Mycobacterium tuberculosis).
➢ O azul de metileno serve para corar o campo, tornando mais fácil a
visualização dos BAAR.
1. Cobrir a lâmina do esfregaço com a solução de fucsina fenicada de Ziehl-
Neelsen; 
2. Aquecer até a emissão de vapores (não deixar ferver); 
3. Repetir o processo por 5 minutos; 
4. Lavar com água corrente; 
5. Descorar com uma solução de álcool-ácido clorídrico 1%; 
6. Lavar em água corrente; 
7. Corar por 1 minuto com azul de metileno; 
8. Lavar em água corrente; 
9. Secar ao ar. 
COLORAÇÃO DIFERENCIAL (ZIEHL-NEELSEN)
Fonte: https://publica.ciar.ufg.br/ebooks/iptsp/bacteriologia_humana/artigo_1.html
Fonte: https://publica.ciar.ufg.br/ebooks/iptsp/bacteriologia_humana/artigo_1.html