Método de coloração de Ziehl-Neelsen

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Método de coloração de Ziehl-Neelsen
Coram as bactérias que o método de gram não consegue corar ou cora muito mal. Temos as que não possuem parede celular, que são os Mollicutes (classe). Tem o gênero:
Mycoplasma : destaca o M.pneumoniae (pneumonia comunitária).
Ureaplasma : Doenças no aparelho genital. No homem o uretrite e na mulher cervicite.
E as que possuem parede celular com baixa permeabilidade aos corantes, que são as micobactérias (se coram muito mal ou não se coram pelo gram pela sua parede celular ser rica em lipídeos, dificultando a permeabilidade dessa estrutura a corantes hidrossolúveis. Então como eles não passam, se tem que utilizar recursos especiais para que os corantes passem). Dentro das micobactérias existem 2 muito importantes :
M. tuberculosis : causa a tuberculose.
M. leprae : causa a hanseníase.
COMPOSIÇÃO DA PAREDE CELULAR DAS MICOBACTÉRIAS :
Rica em lipídeos e outras substâncias específicas das micobactérias.
 Possuem alguns polipeptídes chamados de tuberculina. Ou seja, cada espécie de micobactéria tem um peptídeo próprio, que recebe o nome semelhante ao de sua espécie de micobactéria. Por exemplo : Tuberculina= da tuberculose. 
 Outras substâncias como : fator corda, cera D, micosidios (direcionam a resposta imune). Esses fatores das micobactérias originam uma resposta imune celular, aquela que envolve multiplicação de células do sistema imune. 
Fator corda: um glicolipídeo extremamente tóxico as células do hospedeiro. Leva a morte dessas células 
Cera D: diretamente relacionada com os fenômenos de hipersensibilidade celular, envolve células (hipersensibilidade tardia). Alergias que se manifestam tardiamente. 
Os ácidos micólicos são ácidos graxos típicos das micobactérias.
Essas bactérias são muito resistentes aos antibióticos, desinfetantes, etc. 
As micobactérias tem um tempo de geração muito diferentes das outras bactérias de importância médica ou mesmo de bactérias da microbiologia dos alimentos que demoram cerca de 15-30 minutos pra se duplicarem e as micobactérias demoram cerca de 18-20 horas.
A consequência desse tempo longo de geração é que as micobacterioses são doenças crônicas, mas como seu tempo de duplicação é grande, uma pessoa pode ficar anos com uma doença até evoluir para óbito. Elas demoram muito para formar colônias, para crescer nos meios de cultura, que tem haver com a parede do meio celular (até os nutrientes têm dificuldade para passar por esse meio celular).
TUBERCULINA: derivado proteico purificado (PPD). Essa substância é utilizada em um teste do PPD da tuberculina (PROVA TUBERCULÍNICA), onde se injeta intradermicamente (antebraço) a injeção da tuberculina e faz a leitura desse teste medindo a induração (quando palpa o local vemos que fica duro, não vermelho) onde células são atraídas para essa região que dão essa induração, que se forma 48-72 horas depois da aplicação.
Vai ser importante para medir a hipersensibilidade (reação alérgica) às substâncias presentes na parede celular das micobactérias (não é diagnóstico, no sentido de dizer se tem tuberculose ou não). A chance de dar positivo é alta por conta da BCG. 
BCG = vacina que protege contra as formas graves da tuberculose. Não contra a tuberculose (principalmente da meningite tuberculose).
Frequentemente o nosso sistema imunológico reforça a hipersensibilidade da vacina BCG de quando criança. 
EXECUÇÃO DO MÉTODO :
Começa com o preparo do esfregaço e sua fixação pelo calor. Os materiais clínicos podem ser: escarro, liquor, urina, biópsia da pele, etc. Pode pegar também material oriundo da colônia desenvolvidos pelas micobactérias, fazer o esfregaço, fixar pelo calor e a coloração começa:
Cobre o esfregaço com uma coloração de fucsina de Ziehl- Neelsen (presença de fenol com importância detergente facilitando a passagem do corante por essa parede lipídica) ou fenicada (carbolfucsina), concentrada à quente por 5 min (o calor ajuda a desorganizar os lipídios da parede celular, facilitando a passagem da fucsina concentrada). Dando uma cor vermelho intensa as micobactérias
Espera a lâmina esfriar, lava com água corrente e cobre o esfregaço com uma solução álcool ácida, tendo um alto poder descorante, removendo a toxina de ziehl-neelsen de todas as bactérias presente na lâmina, exceto as micobactérias.
Depois, faz a coloração de fundo, de tudo que foi descorado com uma solução de azul de metileno. 
Interpretação do resultado :
Reação positiva : forma de bactéria, bastonete, em vermelho e o resto em azul 
BAAR= Bacilo Álcool-ácido resistente (bactérias em forma de bastão com cor vermelha por que resistiram a descoloração por uma solução álcool-ácida resistente)
Reação negativa : azul 
Ps : globia é a presença de muitas micobactérias juntas em uma área (geralmente é típico da hanseniase).