Aula_Detecção_de_Mutações

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Heidi Lacerda A. da Cruz
Doutoranda em Biotecnologia – RENORBIO
Técnica da Plataforma de Sequenciamento – LABCEN/CCB/UFPE
heidi.alves@gmail.com
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
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Diferenças entre indivíduos (SNPs) – Tratamento individualizado
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A variação dos níveis séricos de MBL é resultado da combinação de polimorfismos presentes nas regiões promotora e estrutural do gene MBL2;
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dNTPs
Oligonucleotídeos = primers
Taq polimerase
Sequência alvo
94⁰C
50-60⁰C
72⁰C
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http://www.ugr.es/~mgarrido/transiluminador.jpg
Gel redTM
Gel greenTM
Corantes 
fluorescentes
Transiluminador
Foto do gel
Brometo de etídio
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+
–
DNA        
“migrando através do gel”
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A PCR permite a rápida amplificação de um gene específico ou de parte dele como a primeira etapa para rastreamento de mutações não caracterizadas.
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Permite a identificação a genotipagem de indivíduos para mutações específicas.
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Extração de RNA
Reação de RT-PCR >>> RNAm em cDNA 
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O sequenciamento de DNA é uma série de processos bioquímicos que tem por finalidade determinar a ordem dos nucleotídeos em uma amostra de DNA.
Definição
Precisão e rapidez.
Grande volume de informação.
Bancos de dados para cruzamento de informações.
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mRNA
DNA
cDNA
alinhamento de EST
Bibliotecas genômicas (BAC, YAC)
alinhamento da biblioteca
Sequenciamento
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A/A
A/O
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O/O
A/O
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Sequência de DNA Parcial 1: ATGGTGCACCTGACTCCTGAGGAGTAGTCTGCC Paciente 1: _________________
Sequência de DNA Parcial 2: ATGGTGCACCTGACTCCTGAGGAGAAGTCTGCC Paciente 2: _________________
Sequência de DNA Parcial 3: ATGGTGCACCTGACTCCTGTGGAGAAGTCTGCC Paciente 3: _________________
VAL
GLU
LIS
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Tabela 1. Exemplos de endonucleases de restrição com os organismos de origem e as seqüências de reconhecimento. As setas indicam os sítios de clivagem (NASCIMENTO et al, 1999).
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