Biotecnologia 3

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

*
*
Biotecnologia
Msc. Edson Delatorre
ANVISA
Área 2 - Ciências Biológicas/Biomedicina
delatorre.ioc@gmail.com
Especialista em Regulação e Vigilância Sanitária
Parte 3
*
*
Produção de anticorpos
Fungos
Proteínas exógenas
Vírus
Bactérias
Patógenos
Secreção de 
anticorpos
Plasmócito
Neutralização
Linfócito B
Maturação
*
*
Hibridomas: fusão de células somáticas
Célula B isolada
Poucos dias de vida
 
Imortalização
transformação viral (exemplo: Epstein-Barr) 
fusão de células cancerosas para gerar híbridos ou “hibridomas”
*
*
Produção de Ac monoclonais
Etapas
Imunização
Fusão e seleção
Triagem
Produção de ascite
Caracterização
*
*
Imunização
Imunógenos: proteínas, células, peptídeos antigênicos, peptídeo pequeno ligado a carreador
Adição de adjuvante
Produção de Ac monoclonais
*
*
*
*
Selecionar o camundongo com a melhor resposta imune
Remover as células B do baço
Produção de Ac monoclonais
*
*
Fusão e seleção
Células de mieloma (da mesma espécie ou espécie diferentes) e linfócitos
A fusão pode ocorrer de forma espontânea, mas com baixa frequência
Agentes fusogênicos
Vírus Sendai
PEG (polietilenoglicol)
Campos elétrico
Produção de Ac monoclonais
*
*
Seleção metabólica
Após o processo de fusão
Híbridos (heterocárion)
Produção de Ac monoclonais
*
*
Célula mieloma
Célula B
Heterocárion
Hibridoma
Três híbridos que 
serão selecionados
Meio HAT
*
*
*
*
3. Triagem
Hibridomas que produzem os anticorpos de especificidade adequadas
ELISA
Western Blot
Imunofluorescência
Etc
Produção de Ac monoclonais
*
*
4. Produção de ascite
Hibridoma cultivado em tumor ascítico
Maior quantidade de anticorpo
Purificação
Diálise
Produção de Ac monoclonais
*
*
Caracterização
Quantificação
Isotipagem
Reação com outros antígenos
Imunoprecipitação, ensaior imunoenzimáticos, imunofluorescência, cromatografia
Produção de Ac monoclonais
*
*
Aplicações dos anticorpos monoclonais
Detecção e tratamento de câncer
Imunização passiva
Testes diagnósticos
Insumos laboratoriais
*
*
Biomedicamentos
Produtos farmacêuticos produzidos por células geneticamente modificadas
A maioria dos biomedicamentos são
Proteínas (ou peptídeos)
Componente proteíco majoritário (conjugados)
*
*
Biomedicamento
Definição mais usada (Walsh, 2002):
 “Substância farmacêutica baseada em proteína ou ácido nucleico utilizada para terapia ou diagnóstico in vivo, produzida de forma independente da extração da fonte biológica nativa.”
Walsh G (2002), Biopharmaceuticals and biotechnology medicines: an issue of nomenclature, European Journal of Pharmaceutical Sciences 15, 135–138
*
*
Biomedicamento
Biofármacos em comercialização 
	= proteínas terapêuticas:
„avanços no entendimento da base molecular das doenças revelaram a existência de proteínas com potencial terapêutico
produzidas naturalmente pelo organismo em mínimas quantidades
*
*
Evolução dos biomedicamentos
Primeira geração:
„Proteínas com idêntica sequência de aminoácidos
„ Voltadas para a reposição ou aumento do nível de proteínas endógenas
Segunda geração:
„Fração crescente dos biofármacos aprovados recentemente
„ Engenharia de proteínas  propriedades terapêuticas planejadas
Geração de um produto de ação mais rápida ou mais lenta
„ Alteração do tempo de meia vida do produto
„ Alteração da imunogenicidade do produto
„ Desenvolvimento de proteínas terapêuticas híbridas
*
*
Estratégias usadas em engenharia de proteínas e exemplos:
Alteração da sequência de aminoácidos
Insulina e t-PA
Remoção de domínios da proteína
Fator VIII modificado (Refacto) e t-PA
Obtenção de moléculas híbridas (anticorpos) e proteínas de fusão
Infliximab – anticorpo quimérico
Enbrel – proteína fusionada
Engenharia pós-traducional
Glicosilação: EPO Aranesp
Adição de PEG: interferon α2 peguilado
*
*
Exemplos
*
*
Exemplos
Remoção do domínio B na molécula recombinante
Manutenção da atividade coagulante
Maior estabilidade
Fator VIII completo
(Inativo)
Fator VIII incompleto
(Ativo - FVIIIa )
*
*
Exemplos
*
*
Células animais como sistemas de expressão
„ Sistema de expressão atualmente majoritário para a produção de proteínas recombinantes:
secretam a proteína no meio de cultivo
facilidade de purificação
modificações pós-traducionais
carboxilação, hidroxilação, sulfatação, fosforilação e especialmente a glicosilação
 atividade biológica
 estabilidade
 imunogenicidade 
*
*
*
*
Processo de produção
*
*
*
*
Biomateriais
Biomaterial é definido como todo material utilizado para substituir - no todo ou em parte - sistemas biológicos
metálicos
cerâmicos
poliméricos (sintéticos ou naturais)
compósitos
biorecobrimentos
*
*
Biocompatibilidade
não estimular ou provocar o mínimo de reações alérgicas ou inflamatórias
Classificação
substituição de tecidos moles 
substituição de tecidos duros
materiais para sistemas cardiovasculares
Biomateriais
*
*
Biomateriais: Seleção
Identificação das propriedades requeridas para a aplicação em questão
Escolha da matéria prima e dos componentes
Biocompatibilidade
Não causar nenhum dano tecidual
*
*
Biomateriais: Aplicações
Implantes dentais
Próteses mamárias
Ligamentos artificiais e tendões
Válvulas cardíacas
Reparo de pele
Implantes ósseos